双歧杆菌三联活菌胶囊辅助治疗克罗恩病效果观察

黄良玖，刘日升，马婷

(海南省肿瘤医院，海口570130)

克罗恩病(CD)是一种慢性肠道炎性疾病，近年来其发病率呈逐年上升趋势[1]。CD临床表现为发热、慢性腹泻腹痛，反复发作可导致营养不良[2，3]；如治疗不及时，会引起肠穿孔、肠梗阻及肠瘘等严重并发症[4]。常规治疗药物有氨基水杨酸类、糖皮质激素类及免疫抑制剂等，但疗效并不理想[5]。近年来有研究[6]发现，肠道菌群失调与CD的发生发展密切相关。三联活菌胶囊为含有双歧杆菌、乳酸杆菌和肠球菌的复方制剂，常用于治疗肠道菌群失调所致的急慢性腹泻及便秘等。因此，我们将双歧杆菌三联活菌胶囊用于CD的治疗，评价其在CD治疗中的临床价值。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集海南省肿瘤医院2016年7月～2018年5月收治的CD患者。纳入标准：①符合2012年炎症性肠病诊断与治疗的共识意见中CD相关诊断标准；②经结肠镜检查、胃肠钡餐造影和黏膜组织学检查确诊；③年龄23～65岁；④3个月内无外科手术史、输血史，半月内未使用过类固醇、抗生素、益生菌等制剂药物；⑥签署知情同意书。排除标准：①合并心、肝、肾等其他脏器重大疾病；②合并内分泌疾病、恶性肿瘤；③合并细菌性痢疾、缺血性肠炎、溃疡性结肠炎；④合并精神疾病或意识障碍；⑤哺乳期或妊娠期女性。共选取符合标准的CD患者84例，其中常规治疗42例(对照组)、辅以双歧杆菌三联活菌胶囊42例(观察组)。观察组男23例、女19例，年龄(48.82±11.29)岁，病程(2.39±0.55)年，病情程度中度16例、重度26例，克罗恩病活动指数(CDAI)评分(10.97±1.32)分。对照组男25例、女17例，年龄(48.52±11.71)岁，病程(2.38±0.49)年，病情程度中度19例、重度22例，CDAI评分(11.01±1.21)分。本研究经医院医学伦理委员会批准，两组性别、年龄、病程、病情、CDAI评分具有可比性。

1.2 治疗方法 患者服药期间调整保持情绪平稳，忌食辛辣、生冷等刺激性较大的食物。对照组口服美沙拉嗪(佳木斯鹿灵制药有限公司，生产批号20160512)1.0 g，3次/d。观察组在对照组基础上温水口服2.0 g双歧杆菌三联活菌胶囊(纽迪希亚制药有限公司，生产批号20160322)2次/d，两组疗程均为28 d。

1.3 疗效判定方法 显效：临床症状及体征消失，肠镜或组织病理学检查提示肠道黏膜炎症反应趋于稳定状态；有效：临床症状体征较治疗前改善，肠镜或组织病理学检查提示肠道黏膜炎症反应较治疗前缓解；无效：未达到上述标准。总有效率=显效率+有效率。

1.4 肠道菌群检测方法 采用PCR法。分别于治疗前、治疗28 d，收集患者中段新鲜粪便标本；以细菌基因组DNA提取试剂盒提取总DNA，乳酸杆菌、双歧杆菌、拟杆菌、大肠杆菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌及酵母菌7种肠道细菌的引物由上海生工生物公司合成。PCR产物采用琼脂糖凝胶电泳检测，琼脂糖凝胶电泳浓度2%、电压5 V/cm、时间30 min。参照初步定量结果再进行荧光定量检测，最后利用Illumina MiSeq平台进行高通量测序。PCR反应条件：95 ℃ 3 min，95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，27个循环；72 ℃ 10 min。以Quanti FluorTM-ST蓝色荧光定量系统获取数据，用log拷贝数/湿便重(g)表示菌群数量。

1.5 血清白蛋白(ALB)、总蛋白(TLB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)检测方法 分别于治疗前后清晨取外周静脉血，室温下以3 000 r/min离心15 min，分离血清。采用7600型全自动生化分析仪检测ALB、TLB，采用680型酶标仪以ELISA法检测TNF-α、CRP，操作步骤严格按照说明书进行。

2 结果

2.1 两组临床疗效比较 观察组显效17例、有效19例、无效6例、总有效率85.71%，对照组显效9例、有效18例、无效15例、总有效率64.29%，观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。

2.2 两组肠道菌群数量比较 治疗前，两组7种肠道菌群数量差异无统计学意义。治疗后，观察组乳酸杆菌和双歧杆菌数量高于治疗前及对照组，而拟杆菌数量低于治疗前及对照组(P均<0.05)，大肠杆菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌及酵母菌数量与对照组差异无统计学意义。见表1。

表1 两组肠道菌群数量比较(LogN/g湿便,

注：与同组治疗前比较，*P<0.05；与对照组同时点比较，#P<0.05。

2.3 两组血清TNF-α、CRP水平比较 治疗前，两组血清TNF-α、CRP水平差异无统计学意义；治疗后，观察组血清TNF-α、CRP水平低于治疗前及对照组(P均<0.05)。见表2。

表2 两组血清TNF-α、CRP水平比较

注：与同组治疗前比较，*P<0.05；与对照组同时点比较，#P<0.05。

2.4 两组ALB、TLB比较 治疗前，两组ALB、TLB水平差异无统计学意义；治疗后，观察组ALB、TLB水平高于治疗及对照组(P均<0.05)。见表3。

表3 两组ALB、TLB比较

注：与同组治疗前比较，*P<0.05；与对照组同时点比较，#P<0.05。

3 讨论

CD患者常由于肠黏膜破坏、不同程度厌食、胃肠功能减退、胃肠营养液流失等原因造成营养不良[7]，患者抵抗外界感染能力下降而导致疾病进一步恶化。美沙拉嗪是一种新型水杨酸类药物，但其不良反应较多，部分患者耐受性较差[8，9]。

有研究发现，通过为肠黏膜组织提供充分的营养物质可起到修复肠黏膜的作用，避免肠黏膜屏障破坏，能有效抑制肠道上皮细胞长期暴露于肠道细菌中而诱发的炎症“瀑布”现象。肠黏膜恢复和肠道功能的改善，最终有利于改善患者的营养状态[10]。肠道菌群失衡可加重肠道功能紊乱，进而加重CD病情。有研究报道，在常规治疗基础上调整肠道菌群有助于改善肠道吸收功能，改善机体营养状况[11]。双歧杆菌三联活菌胶囊是集多种正常肠道菌群于一体的微生态制剂，其活性成分为双歧杆菌、乳酸杆菌和肠球菌。双歧杆菌、乳酸杆菌可抑制有害菌的生长和肠道内容物腐败，合成人体所必需的维生素，促进人体对矿物质的吸收；产生有机酸刺激肠道蠕动，促进排便，净化肠道环境、分解致癌物质；刺激人体免疫系统，提高抗病能力。肠球菌可产生天然抗生素，抑制大肠杆菌、沙门菌等有害菌的生长，改善肠道微环境，还能抑制肠道内产尿素酶细菌和腐败菌的繁殖，可有效改善CD患者肠道菌群失衡和功能紊乱现象，改善患者肠道功能有利于提高临床疗效。同时，双歧杆菌三联活菌具有消化功能，可促进肠黏膜充分吸收营养物质，显著增强患者抵抗力，为疾病治疗提供基础和保障[12]。本研究结果显示，观察临床总有效率高于对照组，说明双歧杆菌三联活菌辅助治疗CD疗效可靠。

CD患者由于肠黏膜受损，肠道屏障破坏，菌群失调，加上感染、环境等外界持续性抗原刺激，进一步损伤肠黏膜细胞。此时，机体免疫系统异常过度激活，诱导炎症反应和免疫级联放大过程。该过程释放大量炎症因子，进一步损伤黏膜组织，使肠道功能状态恶化。其中，CRP是炎症反应过程重要的反应因子，其水平高低可反映炎症反应程度，间接反映病情严重程度[13]。有研究报道， TNF-α是CD发病机制中重要的炎症因子，可反映CD情严重程度。TNF是诱导免疫应答的重要物质，通过刺激IL-6、IL-1、γ干扰素等多种细胞因子持续放大炎症反应过程[14]。本研究结果显示，与对照组比较，观察组血清TNF-α、CRP水平降低。这提示双歧杆菌三联活菌可改善CD炎症反应程度，恢复肠黏膜结构和功能，对提高肠道功能及其营养状态具有积极作用。本研究结果显示，观察组血清ALB、TLB水平升高，与李宁等[15]报道结果一致,说明双歧杆菌三联活菌对改善CD患者营养状态有效。由于双歧杆菌三联活菌含有多种肠道正常菌群，故其可补充肠道正常菌群，纠正紊乱的肠道微环境；肠道微环境一旦得到改善，肠黏膜功能恢复，充分吸收营养物质而促进自身修复，提高肠道营养状态，增强患者免疫能力，纠正异常菌群移位现象。本研究发现，口服双歧杆菌三联活菌胶囊后，患者肠道中益生菌乳酸杆菌、双歧杆菌水平上升，拟杆菌水平降低。因此，我们认为，双歧杆菌三联活菌胶囊辅助治疗CD疗效显著，可改善患者肠道菌群，降低血清炎症因子水平，提高机体营养状态。