18%四唑虫酰胺悬浮剂高效液相色谱分析方法

李 卫，张 月，贾浩然，李保同

（江西农业大学农学院，南昌 330045）

四唑虫酰胺（tetraniliprole）是拜耳公司研发的新型双酰胺类杀虫剂，结构式见图1，其用于防治鳞翅目、鞘翅目和双翅目害虫[1-2]。目前四唑虫酰胺还处于田间试验阶段，其制剂分析方法在国内外报道较少[3]。本文建立高效液相色谱法检测四唑虫酰胺有效成分分析方法，本法操作简便快速、结果准确，可用于四唑虫酰胺制剂的定量分析。

1 实验部分

1.1 实验仪器与试剂

Agilent 1260型高效液相色谱仪（配自动进样装置）；色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；SB-5200DT超声波清洗器；过滤器：0.22 μm过滤膜。

乙腈（色谱纯），西陇科学股份有限公司；超纯水；四唑虫酰胺标准品（≥99%）、18%四唑虫酰胺悬浮剂，拜耳作物科学（中国）有限公司。

图1 四唑虫酰胺结构式

1.2 色谱条件

梯度洗脱条件：以乙腈+水为流动相，0～2.0 min，V乙腈∶V水=58∶42；2.1～3.0 min，V乙腈∶V水=95∶5；3.1～3.2 min，V乙腈∶V水=58∶42。流速：0.8 mL/min；进样体积：10 μL；检测波长：262 nm；四唑虫酰胺保留时间约3.8 min。

1.3 测定步骤

1.3.1 标准溶液配制

称取四唑虫酰胺原药0.01 g（精确至0.000 1 g），置于100 mL容量瓶中，用80 mL乙腈溶解，超声波水浴10 min，冷却至室温，用乙腈定容并摇匀，得100 mg/L四唑虫酰胺标准溶液。溶液过滤膜，置于4℃冰箱备用。

1.3.2 试样溶液配制

称取18%四唑虫酰胺悬浮剂0.056 g（精确至0.000 1 g），置于100 mL容量瓶中，用80 mL乙腈溶解，超声波水浴10 min，冷却至室温，用乙腈定容并摇匀，得100 mg/L四唑虫酰胺试样溶液，溶液过滤膜，置于4℃冰箱备用。

1.3.3 测定

在上述色谱操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针的峰度变化小于1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序依次进行测定。用外标法分别计算四唑虫酰胺的含量，四唑虫酰胺标溶液样色谱图见图2，试样溶液色谱图见图3。

图2 四唑虫酰胺标样色谱图

图3 18%四唑虫酰胺悬浮剂试样色谱图

1.4 计算

经上述方法测得标样溶液和试样溶液中四唑虫酰胺的峰面积，根据下列公式外标法计算试样中四唑虫酰胺的质量分数w（%）。

式中：A1为标样溶液中四唑虫酰胺峰面积，A2为试样溶液中四唑虫酰胺峰面积，m1为四唑虫酰胺标样的质量，g；m2为四唑虫酰胺试样的质量，g；P为标样中四唑虫酰胺的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

取100 mg/L四唑虫酰胺标样溶液放入紫外分光光度计中，选择200～400 nm波长下扫描，获得相应的紫外吸收光谱图见图4。由图4可知，四唑虫酰胺最大吸收波长在210 nm，262 nm波长处吸收较好。由于溶剂乙腈在波长小于220 nm时也有较强的吸收峰，为了避免其对样品分析产生影响，所以最终选用262 nm作为检测波长。且在262 nm条件下，四唑虫酰胺与杂质可有效分离。

图4四唑虫酰胺紫外吸收光谱图

2.2 流动相的选择

分别选用乙腈+水、甲醇+水2种体系，按不同比例为流动相，采用Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱进行分析试验。结果显示，选用甲醇+水为流动相时，有效成分与杂质不能较好分离。选用乙腈和水作为流动相，当乙腈比例较小时，保留时间长，检测效率降低，而当乙腈比例较大，保留时间短且有杂质峰干扰。经反复试验，梯度洗脱条件定为：以乙腈+水为流动相，0～2.0 min，V乙腈∶V水=58∶42；2.1～3.0 min，V乙腈∶V水=95∶5；3.1～3.2 min，V乙腈∶V水=58∶42。在此梯度条件下，仪器基线平稳，色谱峰保留时间合适，有效成分完全分离，峰形对称。

2.3 方法的线性相关性测定

将四唑虫酰胺配成一系列质量浓度的标准溶液，按照上述色谱操作条件对样品进行峰面积的测定，每个质量浓度重复2次，求其峰面积平均值。分别以质量浓度为横坐标，峰面积作为纵坐标绘图，得到线性关系曲线。四唑虫酰胺线性回归方程为y=26.586x-0.953，R2=1.000。四唑虫酰胺标准曲线如图5所示。

图5 四唑虫酰胺线性关系图

2.4 方法精密度测定

从同一18%四唑虫酰胺悬浮剂中称取6份试样，按照上述方法测定四唑虫酰胺的质量分数，验证此分析方法的精密度，计算其标准偏差与变异系数。试验结果表明，四唑虫酰胺的标准偏差为0.12，变异系数为0.67%（见表1）。

2.5 方法准确度测定

在已知含量的18%四唑虫酰胺悬浮剂试样中，分别加入一定量的四唑虫酰胺标样溶液，按照上述色谱操作条件下进行6次添加回收率测定。结果表明，四唑虫酰胺的回收率为100.05%～100.91%，平均回收率为100.63%（见表2）。

表1 18%四唑虫酰胺悬浮剂精密度测定结果

表2 18%四唑虫酰胺悬浮剂准确度测定结果

3 结论

本试验建立了18%四唑虫酰胺悬浮剂的高效液应，得到2-[4-(4-氯苯氧基)-2-三氟甲基苯基] -1-[1,2,4] 三唑-1-基丙-2-醇[6]。相色谱分析方法。该方法精密度和准确度良好，测量快速、简便，适用于四唑虫酰胺的分析检测。