AU5821全自动生化分析仪试剂间交叉污染对检测结果的影响的探讨

丁修冬，周园园，沙立娜，梅 雪，金兆佳，周南南，王汝微，雷 红

（1.解放军309医院检验科，北京100091；2.国防大学医院，北京100091；3.兵器工业北京北方医院，北京100089）

全自动生化分析仪的优点在于加样微量、检测快速、精密度和准确度高及自动化程度高等优点，但在实际工作中，偶尔会发生生化分析仪的加样针、试剂针、比色杯及搅拌棒等易引起交叉污染的现象。现将笔者实际工作中遇到的两例即多个项目同时检测时出现的TBA、TG异常增高的现象，经过复查后结果正常，说明有些测试项目对TBA及TG的检测存在交叉污染，文献资料也提示全自动生化分析仪普遍存在交叉污染现象［1-2］，经过分析认为最有可能是IgE、GSP、CK、RBP的试剂对TBA以及CR、TBIL、Hcy、HDL的试剂对TG存在交叉污染。为了寻找问题的原因，作者设计了一下试验并采取了措施防止问题的再次发生。

材料与方法

1 仪器与试剂

仪器为贝克曼AU5821全自动生化分析仪，试剂中甘油三酯、肌酸激酶、肌酐、总胆红素、高密度脂蛋白胆固醇由贝克曼公司提供；同型半胱氨酸、总胆汁酸、糖化血清蛋白试剂由九强公司提供；视黄醇结合蛋白、免疫球蛋白E试剂由森美希格玛公司提供。

2 混合血清

取当天本院20份正常体检者血清混合备用。

3 方法

3.1 参数设定 各检测项目按试剂生产厂家提供的参数进行设定。

3.2 对照组 连续检测混合血清TBA及TG各20次，计算TBA及TG的均值作为参考值。

3.3 检测顺序

（1）按IgE→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA、GSP→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA、CK→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA、RBP→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA的顺序检测，每组项目重复检测20次，进行计算。

（2）按CR→TG→TG→TG→TG→TG、TBIL→TG→TG→TG→TG→TG、Hcy→TG→TG→TG→TG→TG、HDL→TG→TG→TG→TG→TG的顺序检测，每组项目重复检测20次，进行计算。

（3）改变TBA及TG检测时使用的比色杯，即将

4 统计学处理

检测结果用±s表示，应用PEMS3.1统计软件对不同测量方法结果进行配对t检验，方差不齐时用t’检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 IgE、GSP、CK、RBP试剂对TBA直接干扰

分别检测混合血清中IgE、GSP、CK、RBP后进行5批次TBA的测定，每批重复检测20次取其均值（表1、表2）。

表1 测混合血清中IgE、GSP、CK、RBP后进行5批次TBA的测定

注：与对照组相比，*P＜0.01

表2 测混合血清中RBP后第一批进行20次TBA的测定

2 CR、TBIL、Hcy、HDL试剂对TG直接干扰

分别检测混合血清中CR、TBIL、Hcy、HDL后进行5批次TG的测定，每批重复检测20次取其均值（表3）。

表3 检测混合血清中CR、TBIL、Hcy、HDL后进行5批次TG的测定

3 扰的检测项目分在不同单元后再检测混合血清5批次测定

将存在干扰的检测项目分在不同单元后后再RBP→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA检测、Hcy→TG→TG→TG→TG→TG检测，每批重复检测20次取其均值（表4）。

表4 干扰的检测项目分在不同单元后再检测混合血清5批次测定

讨 论

随着当今世界科学技术的发展，自动生化分析仪给我们工作带来方便同时也产生了交叉污染的新问题，主要是由于样本针、试剂针、搅拌棒等的交叉污染。我们实验室新引进了两台AU5821全自动生化分析仪部分全自动生化分析仪在检测过程中吸取不同样本与试剂后，样本针和试剂针仅用去离子水进行冲洗，很难完全清洗干净，如果前一样本某项待检测物含量较高，或前一检测项目试剂中含有后一检测项目的成分，或含有对后一检测项目有干扰的物质时，就会不可避免地会产生携带污染的问题［3］。由于我科刚刚搬入新实验室并且购置了贝克曼的生化免疫流水线，常规项目选用贝克曼配套试剂，不常用的项目选用非配套试剂。根据经验将有可能发生交叉污染的试剂分配到不同单元，或者是在同一单元使用不同圈的比色杯进行检测。AU5821生化分析仪分为1、2两个单元，每个单元的比色杯又分为内外两圈，而搅拌棒分为三组，根据这个构造分析一旦发生交叉污染事件，最有可能的是发生污染项目之前的、与其相邻的并且使用同一圈比色杯的检测项目的试剂。根据上述分析影响TBA检测结果最有可能为IgE、GSP、CK、RBP的试剂，影响TG检测结果最有可能为CR、TBIL、Hcy、HDL的试剂。TG及TBA均为常规检测项目，实际工作中发现出现问题时的室内质控二者均是在控的，而检测个别病人样本时会出现异常增高的现象。高TG的标本的检测结果会在15.0 mmol/L以上，正常情况下这种标本会出现肉眼可见的浑浊或者乳糜的情况，但这些标本均为清亮透明。高TBA的患者检测结果会在45.0μmol/L以上，并且均未有相关的临床症状且其他辅助诊断均正常。单独对这两个项进行复查时结果均正常，所以高度怀疑检测受到了干扰。本文之所以进行20次重复检测主要为了屏蔽掉随机误差的干扰，以及通过均值加减标准差的统计学的方式来说明在干扰项目检测后第一回检测被干扰项目，经一次清洗后第二回检测被干扰项目，经二次清洗后第三回检测被干扰项目，直到第四回检测被干扰项目间各回结果之间的差异。经统计分析说明了每一轮清洗都会去除一部分干扰，直到第四回的检测结果与对照组间是无统计学差异的。

本研究通过工作中发现个别标本的TG及TBA出现异常升高的现象，发现部分试剂中可能存在TG及TBA或者干扰TG及TBA检测的成分。Hcy引起TG升高的机理是试剂中添加了甘油脂的成分所致；RBP引起TBA检测结果升高的原因，可能是RBP试剂中含有活性较高的氧化性物质，影响了TBA氧化还原反应所致。但RBP试剂说明书未发现其含有TBA的成分。这两组实验通过连续检测5次后基本上不存在明显的干扰。

对上述携带污染造成的干扰的应对方法如下，一方面为加强对仪器的维护和日常保养力度，同时加强对仪器的清洗，不光用碱洗还应使用酸洗；另一方面如果通过维护保养以及特殊清洗无法解决时需合理改变试剂的顺序或者使用不同模块以及不同圈的比色杯进行检测。并重视对分析方法有针对性的科学选择的重要性，因同一项目分析方法可有多种，存在不同的优势和劣势，可能又具有较好的分析性能，但有严重的交叉污染的现象，故需对交叉污染的情况和方法的性能进行综合分析，来制定和选择适宜的方法［4-6］。也要加强与临床的沟通，当临床对我们发出的检验报告产生异议时需要高度重视，不应盲目的相信自己的室内质控结果，这两个例子均是临床对检验结果产生怀疑时，我们通过有效的实验设计才发现问题的。