胃癌组织Sox2、VEGF-C蛋白表达及临床意义

赵志勇，苏建民，程治强，宋诗伟

(河南省省直第一医院外科，河南 郑州 450000)

胃癌主要通过淋巴结进行转移，这也是影响患者预后的最关键的因素，现阶段淋巴管内皮细胞相对特异性标记物和有关淋巴管生成的细胞信号传导通路已成为恶性肿瘤淋巴结转移的重要方向[1]。近年来，部分作用于淋巴管内皮细胞的特异性生长因子不断被发现并为胃癌淋巴结转移的研究提供了新的思路。

Sox2转录因子的蛋白同鸡Sox2蛋白有95%的同源[2]，同鼠 Sox2蛋白有 98%的相似[3]，研究[4]已证实其与肿瘤细胞增殖、侵袭转移和维持肿瘤干细胞自我更新具有密切联系并提示在人类胃黏膜上皮细胞的分化过程中具有重要作用。相关研究[5]也在肺癌、前列腺癌、腺癌、胃癌、及卵巢癌等肿瘤组织中均发现了Sox2的异常表达。目前，血管内皮生长因子及其受体是重要的淋巴管调节因子，其既可以调节成熟淋巴管的生理功能还可调节胚胎组织淋巴管生成，但目前淋巴管生理功能调节因子与胃癌转移的作用研究资料相对缺乏。故此，本研究探讨干细胞转录调控因子Sox2、VEGF-C在胃癌组织中的表达及临床意义，现报告如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选取 2016年 2月至 2017年 4月我院病理科保存的胃癌组织标本52例，纳入标准：⑴均经病理组织学确诊；⑵患者临床资料保存完整；⑶术前未行放疗、化疗等治疗。排除标准：⑴合并其他原发性恶性肿瘤者；⑵未分化癌或特殊类型胃癌。同时选取正常胃粘膜组织34例、慢性萎缩性胃炎组织40例、萎缩性胃炎伴肠化生或不典型增生组织33例作为对照，各组性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0．05），见表 1。

表1 各组一般资料比较

1．2 实验方法 采用SP免疫组化法检测Sox2和VEGF-C蛋白表达：脱蜡及水化；蒸馏水冲洗，5min PBS溶液洗涤；抗原修复；H2O2室温孵育10min，3次PBS洗涤；滴加适当比例稀释的一抗，37℃温箱30min孵育，4℃孵育过夜；滴加二抗后37℃温箱30min孵育，3次PBS洗涤；DAB显色，苏木素复染后树胶封片显微镜观察。已知阳性切片作为阳性对照，代替一抗作为阴性对照，阳性对照充分显色，终止反应[6]。

1．3结果判断 SOX2阳性定位于细胞浆及细胞膜，VEGF-C阳性定位于细胞质，呈黄色颗粒状，随机选取5个高倍镜视野，每个视野计数100个细胞，对染色强度及阳性细胞比例进行评分，染色强度：无色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞比例：＜5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为 2分，51%～75%为 3分，＞75%为4分。最终得分为染色强度和阳性细胞比例得分之积，≥5分为阳性表达，≤4分为阴性表达[7]。

1．4 统计学处理 统计分析采用SPSS 19．0软件，计量资料采用（x±s）表示，多组间比较使用方差分析，两两比较采用LSD-t检验；计数资料比较使用χ2检验；相关性采用Spearman相关分析。以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 各组 Sox2、VEGF-C蛋白表达比较 胃癌组Sox2蛋白阳性表达率明显低于正常胃粘膜组和慢性萎缩性胃炎组（P＜0．05），而 VEGF-C 蛋白阳性表达率明显高于正常胃粘膜组和慢性萎缩性胃炎组（P＜0．05）；胃癌组和萎缩性胃炎伴肠化生或不典型增生组Sox2和VEGF-C蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义（P＞0．05）。 见表 2。

表2 各组Sox2、VEGF-C蛋白表达比较

2．2 Sox2蛋白表达与胃癌患者临床病理特征关系Sox2蛋白阳性表达与胃癌组织学类型、TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关 （P＜0．05）， 与患者年龄、性别及浸润深度无关（P＞0．05），见表 3。

2．3 VEGF-C蛋白表达与胃癌患者临床病理特征关系 VEGF-C蛋白阳性表达与胃癌浸润深度和淋巴结转移有关（P＜0．05），与患者年龄、性别、组织学类型、TNM 分期和分化程度无关（P＞0．05），见表4。

表3 Sox2蛋白表达与胃癌患者临床病理特征关系

表4 VEGF-C蛋白表达与胃癌患者临床病理特征关系

2．4 Sox2与VEGF-C蛋白表达相关性 胃癌组织Sox2蛋白表达与VEGF-C蛋白表达无相关性 （P＞0．05），见表 5。

表5 胃癌组织Sox2与VEGF-C蛋白表达相关性

3 讨论

研究[8]发现胃癌的发展过程可从正常胃粘膜-慢性萎缩性胃炎-不典型增生-胃癌的依次进展。若对不典型增生和慢性非萎缩性胃炎患者的病情及时干预、及时治疗，便可有效避免疾病发展为成胃癌，进而从源头上提高预后效果。最新的研究[9]也对胃癌的分子机制和相关因子之间的联系进行了探讨。

研究[10]证实肿瘤的发生发展过程与胚胎干细胞关系密切，干细胞转录调控因子Sox2(sex determining region Y-box2)属于SOX家族，被称为胃特异性转录因子，具有调节胚胎发育的作用而Sox2还可表达于人类消化道并存在于胃底和幽门粘膜等胃上皮细胞中，但结肠中不表达。此外，Sox2对胃粘膜上皮细胞表型标志物MUC5AC的表达和胃蛋白酶具有重要调节作用。因为Sox2在维持正常胃表型和功能及胃的胚胎发育、分化过程中作用显著，故而，研究者推测其与胃癌的发生、发展及侵袭转移具有密切联系[11]。

血管内皮生长因子（VEGF）是一种特异性促进细胞增殖的有丝分裂源，亦称血管调理素或血管通透因子，可促进血管内皮细胞的增殖、分裂和诱导血管生成，并可增加微静脉和小静脉的通透性。VEGF-C被称为淋巴管生成因子，是VEGF家族新发现成员，可与VEGFR-2或VEGFR-3特异性受体结合分别发挥促进血管及淋巴管的生成的作用；VEGF-C可通过旁分泌作用于VEGFR-3促进自身的分泌并介导淋巴管内皮细胞的增殖和淋巴管的增生，调节淋巴管内皮细胞分化，故而VEGF-C常被认为是重要的淋巴管生成因子[12]。但目前淋巴管生理功能调节因子与胃癌转移的作用研究资料相对缺乏。故此，本研究探讨干细胞转录调控因子Sox2、VEGF-C在胃癌组织中的表达及临床意义。

本研究发现胃癌组Sox2蛋白阳性表达率为57．69%，明显低于正常胃粘膜组94．12%和慢性萎缩性胃炎组82．50%，而VEGF-C蛋白阳性表达率为75．00%，明显高于正常胃粘膜组20．59%和慢性萎缩性胃炎组45．00%；胃癌组和萎缩性胃炎伴肠化生或不典型增生组Sox2和VEGF-C蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义（P＞0．05）。上述结果提示Sox2和VEGF-C可维持胃粘膜上皮细胞的正常表型和功能，其异常表达可能与胃癌的发生和发展具有密切联系。Sox2是胃癌细胞保留胃腺体细胞表型的重要条件，可能属于胃癌发生过程中的一类抑癌基因；VEGF-3与其特异性受体结合后可激活酪氨酸激酶信号系统导致淋巴管扩张和增生[13]。

本研究发现粘液腺癌、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化及有淋巴结转移患者Sox2蛋白阳性表达率分别为 25．00%、28．57%、30．77%和 48．65%，明显低于非粘液腺癌、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、高分化及无淋巴结转移患者（P＜0．05）；侵及浆膜、有淋巴结转移患者VEGF-C蛋白阳性表达率分别为88．00%和89．19%，明显高于未侵及浆膜、无淋巴结转移患者（P＜0．05）。 上述结果说明 Sox2 和 VEGF-C 蛋白与胃癌的临床病理特征有一定关系，可能参与胃癌的发生发展过程。相关文献[14]发现胃癌组织中Sox2甲基化可下调Sox2的表达，使胃癌细胞无法正常凋亡而无限增殖，认为Sox2蛋白表达下调与胃癌的早期发生、肿瘤分化、胃癌细胞的浸润和转移能力增加密切相关。VEGF-C可增加淋巴结通透性和淋巴管外组织间压力进而牵拉内皮细胞增加淋巴管腔致使胃癌细胞经过疏松细胞而进而转移至淋巴结[15]。本研究发现胃癌组织Sox2蛋白表达与VEGF-C 蛋白表达无相关性（P＞0．05）。 这说明两种蛋白为影响胃癌发生、发展及转移的独立危险因素。

综上所述，胃癌组织Sox2蛋白呈低表达，而VEGF-C蛋白呈高表达，与患者临床病理特征有一定关系，可能参与胃癌的发生发展过程。