慢性乙肝患者外周血HMGB1、IL-17与HBV-DNA相关性分析

李宁侠 董恒利 王海东 陈长生

中国是乙型肝炎高发的国家，且感染者约有9 300万[1]。HBV的肝损伤并不是因为病毒本身，而是由于宿主针对表达病毒蛋白的肝细胞产生免疫应答所致，慢性乙型肝炎患者约2 000万，因乙肝相关肝病每年死亡人数约30万例，死亡者和感染者数量在全球相应病例中占比均为30%[2]。本病发病机制复杂，主要与机体细胞免疫失调有关，HBV的反复感染和复制成为治疗效果不佳的主要因素。近年，HMGB1分子作为细胞因子，在感染性疾病研究中逐渐被重视，且有研究发现，HMGB1与许多病毒感染性疾病的病因机制有关[3，4]，本研究主要明确乙肝患者中HMBG1、HBV-DNA及IL-17表达水平和三者间的相关性。

1 材料与方法

1.1 一般资料随机选取2016年6月～2017年1月在我院行PCR仪检测HBV-DNA患者的信息，结合病史，严格按照2015年中华医学会《慢性乙型肝炎防治指南》[5]诊断标准，并排除其他疾病，筛选126例为研究对象，其中男64例，女62例，年龄19～83岁，平均48岁。在本研究HBV-DNA载量分组中，HBV-DNA水平＜1.0E+3IU/ml为低水平组；HBV-DNA水平＜1.0E+7IU/ml且≥1.0E+3IU/ml为中水平组；HBV-DNA水平≥1.0E+7IU/ml为高水平组。

1.2 检测方法使用达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒核酸定量试剂盒及DA7600仪检测HBVDNA水平，最低检测下限1.0E+2IU/ml；使用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）和科华KHBST-360酶标仪测定样品中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和白细胞介素17（IL-17）的水平，试剂有效线性范围分别为0.1～20ng/ml和0.5～100ng/L。

1.3 统计学方法采用SPSS 19.0统计学软件，计量资料采用表示，使用非参数检验分析变量之间相关性，使用单因素ANOVA 分析组内之间差异性。

2 结果

2.1 HMGB1检测数据呈偏态分布极差14.40，中位数 0.00，均值（0.89±2.11）ng/ml，处在0.00值的频数为87个，占比69.0%。

2.2 IL-17检测数据呈偏态分布极差56.09，中位数 0.00，均值（2.44±7.75）ng/L，处在0.00值的频数为93个，占比73.8%。

2.3 HMGB1水平、IL-17水平与HBV-DNA相关性HMGB1水平与IL-17之间有显著相关性，且呈正相关；HMGB1、IL-17与HBV-DNA之间无相关性，见表1。不同水平HBV-DNA载量中HMGB1含量差异无统计学意义，见表2。

表1 HMGB1、IL-17与HBV-DNA相关性

表2 不同水平HBV-DNA载量组HMGB1水平比较

3 讨论

高迁移率族蛋白1存在于真核细胞核内染色体DNA上，作为非组蛋白，广泛存在于哺乳动物的组织细胞中，在淋巴组织、胸腺、睾丸及新生儿的肝脏中高表达。1999年Wang等首次认识到HMGB1作为一种炎症因子具有的重要意义，HMGB1作为DAMPs家族成员之一与多种病毒性疾病的发病机制有关，HMGB1在DNA修复、复制、重组及基因转录中起重要作用，细胞外HMGB1与细胞分化、迁移、增殖、凋亡及介导炎症反应等密切相关，它可由坏死细胞被动释放，也可由被激活的单核细胞或巨噬细胞主动分泌，在细胞外介导炎症反应，HBV感染与炎症因子的关系密切，且HMGB1在肝脏中高表达，而HMGB1在乙型肝炎发病过程中可能起重要作用，肝病病情轻重与其肝组织中HMGB1表达水平高低密切相关[6]。此外，研究显示，HMGB1在新生儿窒息及小儿心脑损伤、成人慢阻肺、癫痫、牙周炎、原发性肾病综合征、高血压脑出血、HLH、血浆置换治疗活动性血管炎性肾损伤等疾病中与其他细胞因子密切相关，联合检测对疾病早期诊断及预后判断起到重要作用。在肺癌、宫颈肿瘤及甲状腺乳头状癌中，参与了细胞自噬、细胞凋亡、肿瘤所处的炎性微环境及细胞外激酶的激活[7]，在肿瘤的出现和进展过程中起到重要作用。此外还有研究显示，通过检测HMGB1的表达，判定甘氨酸对SAP肺组织具有一定的保护作用、甲基化转移酶抑制剂zebularine对人子宫内膜癌ECC-1细胞系增殖、迁移有抑制作用，还可以证明HO-1的过表达对缓解急性肝衰竭、肝脏损伤有一定作用。通过阻断高迁移率族蛋白-1诱导丝裂原活化蛋白激酶信号通路，减少炎症反应，为治疗退行性腰椎间盘疾病提供了新的方向和思路[8]。在刘妍等[6]研究中，5例肝移植供肝肝组织和20例慢性轻度乙型肝炎肝组织均无HMGB1表达。20例慢性中度乙型肝炎肝组织有4例HMGB1阳性，与本研究126例慢性乙型肝炎（CHB）中处于阳性值占比31.0%的研究结果较相似，处于0.00值占比69.0%，均值（0.89±2.11）ng/ml，HMGB1在CHB中表达水平偏低。

IL-17是一种前炎症细胞因子，它的家族包括6个成员的配体（IL-17A、B、C、D、E、F）和5个受体（IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD和SEF），其中发挥主要作用的为IL-17A，即IL-17。IL-17是T细胞诱导的炎性反应的最早启动细胞因子，对白细胞有强大的化学趋化作用[9]。IL-17有多种来源，可以特异性产生IL-17的CD4+T细胞，即Th17细胞，但其不是唯一分泌IL-17的细胞，NK细胞、肥大细胞、iNKT及中性粒细胞等多种固有免疫细胞均可产生IL-17[10]。在慢性乙型肝炎中，HBV持续感染，肝组织损害的关键点在于宿主免疫功能紊乱，免疫异常与细胞因子及细胞因子网络有关，细胞因子网络是由致炎和抗炎因子组成，是肝组织中的致炎动力，两者过度表达所致的炎性过程即是CHB的发生发展过程。IL-17则介导抗病毒反应清除病毒，但会造成肝细胞严重受损，加重病情，原理是中性粒细胞趋化、参与炎症反应、放大炎症反应。有学者研究，在CHB轻、中、重度组血清IL-17的水平均高于健康对照组，且均依轻、中、重分型逐渐升高[10]，本研究中，只对总体IL-17分布和处于0.00值占比进行统计，提示IL-17在CHB中有一定的表达。

HBV-DNA载量作为评估HBV复制状态的“金标准”，被认为是HBV具有活动性和传染性的重要标志，HBV-DNA载量检测有利于明确感染者所处的时期与状态、是否进行抗病毒治疗及方案的选择。本研究中HBV-DNA与血清中IL-17和HMGB1水平均无相关性，三组不同HBV-DNA载量与HMGB1水平之间也均无相关性，这表明两个细胞因子水平变化与病毒复制无关，与齐育英等[11]研究类似，进一步证明嗜肝DNA病毒并没有直接导致感染细胞的病变，而是通过激发宿主免疫反应及细胞因子共同作用于肝脏，IL-17和HMGB1有很好相关性，参与了类似Th1细胞免疫功能，有利于肝细胞内的病毒被清除，但却增强了肝组织的炎性反应，使肝组织受损严重，在126例CHB中，IL-17和HMGB1水平都很低，也印证了乙肝慢性化，致使病毒长期存在，所以在CHB中除监测HBV-DNA载量，还要关注IL-17和HMGB1水平，其增高提示疾病处在活动期，病情加重。综上，在CHB中，HMGB1与IL-17之间有很好的相关性，HMGB1与HBV-DNA之间无相关性。