LC/MS/MS法测定白酒中氨基甲酸酯类农残研究

何开蓉，程铁辕，张莹，夏于林

（1.食品安全检测四川省重点实验室，四川 成都 610000；2.国家酒类检测重点实验室，四川 宜宾 644000）

中国白酒是中华民族传统饮品，历史悠久，质量可靠，深受国内民众喜爱。随着社会发展和民众关注健康意识以及食品安全意识的日益提升，无论是政府监管机构，或是高校等科研院所，还是白酒生产企业，均对白酒质量安全比以往更加重视，加大了对白酒产品在安全卫生方面的研究力度，有很多研究成果呈现[1-6]。农药残留是食品安全检测分析领域重点关注方向，液相色谱串联质谱联用仪是目前较为先进的检测仪器，当前采用液相色谱串联质谱法检测食品中农药残留相关研究较多[7-20]，农药残留中的氨基甲酸酯类农药因高效广谱选择性强而在农作物中应用广泛，本文通过建立液相色谱三重四极杆串联质谱联用仪测定白酒中氨基甲酸酯类8 种农药残留定量分析方法，以期能够更好的掌握白酒产品在上述8 种氨基甲酸酯类农药残留方面的质量安全情况。

1 试验材料与方法

1.1 样品、仪器和试剂

1.1.1 样品

选取宜宾市售白酒3 个厂家不同批次的样品共10 份。

1.1.2 试验仪器

Agilent6410 三重四级杆串联质谱仪（配电喷雾离子源）：美国安捷伦公司；2K15 离心机（4 000 r/min）：德国SIGMA 公司；Turbo Vap LV 氮吹仪：德国 Biotage；WH-3 涡旋混合仪：沪析分析仪器厂有限公司。

1.1.3 试剂

8 种农药标准品：德国Dr.Ehrenstorfer 公司，纯度大于99%；甲醇、乙酸均为色谱纯：迪马公司。

混合标准工作溶液的制备：吸取适量体积的每种标准储备液于一个容量瓶中，用甲醇稀释成10 μg/mL的混合标准工作中间溶液，避光冷藏保存。

标准工作液的制备：吸取适量的混合标准工作中间液，分别配制成浓度为 25、50、100、200 ng/mL 的标准系列。

1.2 试验方法

蒸馏酒样品过0.22 μm 滤膜后直接进样上机。

1.3 试验条件

1.3.1 色谱条件

色谱柱：Agilent C18，1.8 μm，50 mm×4.6 mm（内径）

流速：0.4 mL/min；

子空间投影方法的关键问题是要找到干扰子空间的一组基。因为只需分析得出张成干扰子空间的基，所以除了传统的利用数据协方差矩阵特征分解来求解之外，还有其它更为简便的子空间分析方法。

进样量：5 μL。

流动相：A：0.1%乙酸；B：甲醇；流动相梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序Table 1 Gradient elution procedure

1.3.2 质谱条件

离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正离子模式；检测方式：多反应监测；离子源温度：350 ℃；毛细管电压：4 000 V；雾化器流量：11 L/min；雾化器压力：35 psi；雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；监测离子对（m/z）和其他参考条件见表2。

1.3.3 液相色谱-质谱确证

样品在上述液相色谱-串联质谱条件下进行测试，如果检出的色谱峰保留时间与标准溶液中某种目标物相一致，并且所选择的两对离子对及丰度比一致，则可判定为样品中存在这种农药残留。定性确证时相对离子丰度的最大允许误差见表3。

表2 质谱参数Table 2 Mass parameters

1.3.4 定量测定

本方法采用定量离子碎片的峰面积外标标准曲线法定量测定。

表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差表Table 3 Maximum allowable misalignment of the relative ion abundance in the qualitative confirmation

1.3.5 结果计算和表述

式中：x 为试样中被测组分的含量，mg/kg；c 为从标准曲线上得到的被测组分溶液浓度，μg/mL；v 维生素C 样品溶液最终定容体积，mL；m 为样品溶液所代表的试样质量，g。

2 结果与讨论

2.1 测定条件的优化

2.1.1 液相梯度洗脱程序的建立

建立梯度洗脱程序时，通过调整洗脱时间，同时对流动相甲醇和0.1%乙酸的比例进行优化，尽量使得8 种化合物的分离效果最好，最终确定的梯度洗脱程序见表1。

2.1.2 质谱条件的选择

在确定了液相色谱的条件后，为进一步提高灵敏度和分离效果，采用电喷雾离子源，在正离子监测模式下，逐一优化离子源温度（Gas Temp），雾化器流量（Gas Flow），监测[M+H]+和[M+Na]+，使之响应值达到最佳。在确定上述条件后，在多反应监测模式下，再分别优化每一种目标物的碎裂电压和碰撞电压，从而得到最强的离子碎片信息。具体结果见表2。

2.2 方法的线性关系及检出限

在上述试验条件下，混合标准工作系列溶液进行测试，以组分峰面积对其质量浓度做图，得到各组分的标准曲线方程，各组分在0.025 mg/kg～0.2 mg/kg 范围内线性关系良好。各组分保留时间、相关系数、检出限见表4。

2.3 氨基甲酸酯类农药加标回收率、精密度试验

分别在白酒样品中添加一定浓度的8 种农药混标，使各样品中农药含量均为20μg/L，且重复做5 次，按照前述的分析条件进行回收率试验。回收率和精密度见表5。

表4 氨基甲酸酯类农药及其他农药保留时间、标准曲线方程与检出限Table 4 The retention time，the standard curve equation and the detection limit of the amino acid ester pesticides and other pesticides

表5 蒸馏酒样品加标回收率和精密度试验测定结果Table 5 Experimental results of recovery rate and accuracy of distilled liquor sample

由表5可知，在蒸馏酒中的回收率为87.6 %～100.0%，精密度为0.89%～5.6%。回收率和精密度数据表明：本测试方法可以满足克百威等8 种氨基甲酸酯类农残的检测要求。

2.4 仪器的精密度

为考察该仪器精密度，将浓度为80 μg/L 的混合标准溶液重复进样8 次，测试各标样化合物峰面积和保留时间的重现性，试验结果见表6。由表6可知：测试过程中，仪器精密度良好，能够满足试验要求。

2.5 方法的应用

该分析方法建立后，采用此方法测试了10 份宜宾地区所产的浓香型白酒样品，测试结果显示上述8 种农残均是未检出，这说明酒企对酿酒原料中上述8 种农残控制的非常好，也可能是经过白酒发酵蒸馏过程之后，上述8 种农残量损失变少，可以通过对同一批次酿酒专用粮及蒸馏出的白酒进行分析验证。

表6 精密度测试结果Table 6 Precision test results

3 结论

本文首次建立了同时检测蒸馏白酒中8 种氨基甲酸酯类农药（抗蚜威、恶虫威、克百威、仲丁威、甲萘威、扑灭威、多菌灵、灭多威）农药残留的液相色谱三重四极杆串联质谱联用仪定性鉴别和定量测试方法，8 种农药残留的方法检出限为 0.5 μg/kg～10 μg/kg。8 种农药残留在蒸馏白酒中加标回收率为87.6%～100.0%，精密度为0.89%～5.6%，方法的精密度、准确度均能满足测试要求。为深入研究酿酒专用粮中农药残留在浓香型白酒发酵过程中的迁移变化规律建立了方法基础。