高危型HPV感染患者Th1/Th2平衡与中医体质相关性研究

宁波市中医院 宁 波 315010

高危型人乳头瘤病毒（high-risk human papillomavirus，HR-HPV）感染是宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）和宫颈癌的主要病因[1]，严重威胁着女性健康。感染HR-HPV的女性往往无明显临床症状，一旦出现性交出血等临床症状时，可能已经出现严重病变。随着生活水平的提高，人们对疾病的预防越来越重视，目前人们可以通过接种HPV疫苗等方式预防几种常见的HPV感染，但HPV种类繁多，接种疫苗并不能预防所有类型的HRHPV。中医体质学说认为，体质决定着是否发病，并决定着疾病的倾向、临床证候以及传变[2]。有研究表明，阴道局部Th1/Th2比例失衡，导致抗感染以及抗肿瘤的细胞免疫水平降低，促进宫颈病变的发生[3]。了解HPV感染者阴道局部Th1/Th2平衡情况与中医体质的相关性，有助于依据中医“体质学说”理论对易感染HPV的高危人群进行体质调节，从而达到“治未病”的目的。本研究通过检测宫颈HR-HPV感染患者阴道局部白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、γ-干扰素（interferon-γ，IFN-γ）、白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）、白细胞介素-10（（interleukin-10，IL-10）水平，并依据“体质学说”理论对其进行体质辨识，旨在探讨宫颈HR-HPV感染患者阴道局部Th1/Th2失衡情况，以及与中医体质的相关性。

1 资料和方法

1.1一般资料 选择2016年11月至2017年10月于宁波市中医院妇科就诊的患者，将符合纳入标准的60例宫颈HR-HPV感染患者设为感染组，并选取同一时间宫颈HR-HPV阴性的健康女性60例，设为对照组。经正态性检验，两组年龄均为非正态分布，故用中位数和四分位数间距M（Q）表示，感染组年龄23～56岁，M（Q）：37（14）岁；对照组年龄 21～64 岁，M（Q）：32（8）岁。经秩和检验，两组年龄分布无统计学差异（Z=-1.947，P=0.052）。本研究经本院伦理委员会审查并批准。

1.2纳入及排除标准

1.2.1纳入标准 （1）年龄20～65岁，有性行为；（2）HPV分型检测提示HR-HPV及疑似HR-HPV阳性；（3）就诊前2周内未行经阴道给药治疗；（4）就诊前3d内未同房；（5）同意配合完整填写调查问卷。

1.2.2排除标准 （1）不符合HR-HPV感染检测标准者；（2）先天性无阴道等各种生殖器畸形或无性生活者；（3）年龄＞65岁或因病行全子宫切除术后者；（4）妊娠期或哺乳期女性；（5）患有各种免疫性疾病、艾滋病、恶性肿瘤或使用免疫抑制剂等导致免疫功能低下者；（6）合并其他心脑血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病者；（7）合并精神、神经系统疾病者，以及拒绝或无法配合检查者。

1.3检测方法

1.3.1HR-HPV DNA检测 检查于非月经期进行，使用专用细胞采集刷于宫颈移行带区按相同时针方向旋转3～5圈，放入装有固定液的专用保存管中，密封后当天送检本院检验科。采用PCR-反向点杂交法检测，由专业检验医师出具报告。

1.3.2阴道灌洗液细胞因子 IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10检测 在非月经期进行阴道灌洗液细胞因子检测。以无菌0.9%氯化钠注射液5mL充分冲洗阴道壁上1/3及宫颈阴道部，于后穹窿吸取灌洗液4mL，室温下2 000r/min离心5min，取上清液分装后-80℃保存备用；以酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法检测上清液中 IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的水平，操作严格按照试剂盒说明书进行，所有试剂盒均购于南京建成生物科技有限公司（批号：H003、H025、H005、H009）。

1.4中医体质辨识方法 根据2009年4月9日起实施的《中医体质分类与判定》[4]中的中医体质分型标准及其诊断表述依据，将体质分为平和质和偏颇体质，其中偏颇体质包括气虚质、阳虚质、阴虚质、痰湿质、湿热质、血瘀质、气郁质、特禀质。应用KY3H中医体质辨识软件对研究对象进行分析，通过《KY3H中医体质辨识表》总结出相关体质倾向。

1.5统计学分析 采用 SPSS 19.0统计软件进行统计学分析。符合正态分布的计量资料以±s表示，组间比较采用独立样本t检验；非正态分布计量资料采用中位数和四分位数间距M（Q）表示，组间比较采用秩和检验。计数资料以频数、构成比表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1两组研究对象中医体质类型分布比较 在体质类型中，感染组中偏颇体质患者更多，差异有统计学意义（χ2=17.877，P＜0.05）。见表 1。

2.2两组研究对象阴道灌洗液细胞因子水平比较两组间比较，感染组 Th1细胞因子（IL-2、IFN-γ）水平明显低于对照组，Th2细胞因子（IL-4、IL-10）水平明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。见表2。

表1 两组研究对象中医体质类型分布比较[例（%）]

表2 两组研究对象阴道灌洗液细胞因子水平比较（±s，pg·mL-1）

表2 两组研究对象阴道灌洗液细胞因子水平比较（±s，pg·mL-1）

组别 例数 Th1细胞因子 Th2细胞因子IL-2 IFN-γ IL-4 IL-10感染组对照组t值P值60 60 24.65±8.96 29.89±10.37-2.961 0.004 14.65±5.85 23.25±7.10-7.246＜0.01 33.61±1 1.96 26.00±9.37 3.880＜0.01 21.1 4±7.61 13 .28±5.85 6.344＜0.01

2.3两组研究对象中偏颇体质人群阴道灌洗液细胞因子水平比较 两组研究对象中偏颇体质人群比较，感染组IL-2、IFN-γ水平低于对照组，其中IL-2水平差异无统计学意义（P＞0.05），IFN-γ水平差异有统计学意义（P＜0.01），IL-4、IL-10 水平高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。见表 3。

表3 两组研究对象中偏颇体质人群阴道灌洗液细胞因子水平比较（±s，pg·mL-1）

表3 两组研究对象中偏颇体质人群阴道灌洗液细胞因子水平比较（±s，pg·mL-1）

组别 例数 Th1细胞因子 Th2细胞因子IL-2 IFN-γ IL-4 IL-10感染组对照组t值P值38 15 25.02±9.28 2 8.64±11.1 9-1.2 06 0.234 14.41±5 .86 24.29±7.65-5.057＜0.01 32.74±12.3 3 24.71±7.70 2.3 43 0.023 20.66±7.51 12 .88±5.43 3.644 0.001

2.4两组研究对象中偏颇体质人群Th1/Th2细胞因子比值比较 两组研究对象中偏颇体质人群Th1/Th2细胞因子比值比较，感染组IL-2/IL-4、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10 比值均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 两组研究对象中偏颇体质人群Th1/Th2细胞因子比值比较（±s）

表4 两组研究对象中偏颇体质人群Th1/Th2细胞因子比值比较（±s）

组别 例数 IL-2/IL-4 IL-2/IL-10 IFN-γ/IL-4 IFN-γ/IL-10感染组对照组t值P值38 15 0.91±0.56 1.3 4±0.82-2.1 60 0.036 1.49±1.10 2 .85±2.40-2.848 0.006 0.59±0.59 1.03±0.35-2.732 0.009 0.92±0.85 2.3 4±1.60-4.232 ＜0.01

3 讨论

HR-HPV感染是CIN及宫颈癌发生的重要原因。研究发现，在年轻女性中HR-HPV的感染率可高达40%[5]，然而并不是所有感染HR-HPV的女性都最终发展成为CIN或宫颈癌，相反在感染者中存在一定的HPV自然清除率，文献显示年轻女性中HPV自然清除率可高达77.42%[6]。由此可见，女性接触HRHPV后是否发生感染以及感染后病情是否进一步进展，可能与其机体本身相关。《灵枢·五变》曰：“肉不坚，腠理疏，则善病风……五脏皆柔弱者，善病消瘅……粗理而肉不坚者，善病痹。”古人明确提出了中医体质的偏颇决定了机体对不同疾病的易感性[7]。王琦教授[8]提出了中医体质学说，将人的体质分为九种，并且认为不同体质影响疾病的发生、发展与转归。本研究结果显示，在中医体质分布中，感染组中偏颇体质占主导，且比例明显高于对照组，由此推测偏颇体质女性可能更容易感染HR-HPV。

HR-HPV感染在中医学中无专门论述，患者多见阴道分泌物量多、色黄、性交接触性出血，因此临床上多将其归入“带下病”进行研究。带下病其病机为任脉损伤、带脉失约，而“湿”邪为其主要致病因素，湿邪既可外感亦可内生。偏颇体质患者更易出现脏腑功能失调，如阳虚质、气虚质、湿热质、痰湿质等患者常可见肺、脾、肾三脏运化疏布水液功能失调，进而出现或加剧内湿的形成，日久导致正气不足。中医学认为“正气存内，邪不可干”“邪之所凑，其气必虚”“阴平阳秘，精气乃生”。所谓内外相因，同气相求，HR-HPV作为外感湿热邪毒，更易乘虚侵袭偏颇体质患者，因此偏颇体质患者更易感染HR-HPV。

人体的免疫功能包括细胞免疫以及体液免疫两方面，两者共同作用以抵抗外界病原体的侵袭。阴道细胞可分泌多种细胞因子，而阴道局部免疫更与宫颈病变发生关系密切[3]。辅助性T细胞根据其分泌的细胞因子类型分为Th1和Th2两种亚型[9]。Th1细胞主要表达IL-2、IFN-γ等，主要介导细胞免疫应答，在抗病毒、杀伤肿瘤过程中发挥重要作用[10]；Th2细胞主要表达IL-4、IL-10等，参与体液免疫应答。正常状态下，Th1/Th2处于动态平衡，是维持机体正常免疫功能的重要因素，在清除病毒，诱导免疫耐受等方面起着重要作用，并且影响到感染性疾病、肿瘤性疾病等的发生、发展和预后[11]。当Th1/Th2平衡被打破，向Th2发生漂移时，机体清除病毒及抗肿瘤能力下降[12]，且Th2型炎症促进感染HPV的宫颈细胞向宫颈癌逐渐发展[13]。本研究结果显示，感染组IL-2、IFN-γ水平明显低于对照组，IL-4、IL-10明显高于对照组，差异均有统计学意义，说明以IL-4、IL-10为代表的Th2型细胞因子水平增高，机体对病毒的抵御能力下降。

进一步对两组研究对象中的偏颇体质人群进行研究，结果显示感染组IL-2、IFN-γ水平低于对照组，其中IL-2差异无统计学意义，IFN-γ差异有统计学意义，IL-4、IL-10水平高于对照组，差异均有统计学意义。偏颇体质人群Th1/Th2细胞因子比值比较，感染组 IL-2/IL-4、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10比值均低于对照组，差异有统计学意义。该结果提示偏颇体质的HR-HPV感染患者中Th1/Th2平衡向Th2漂移，由此进一步说明了Th2漂移在宫颈HR-HPV感染的发展过程中起着重要作用。

综上所述，本研究提示偏颇体质女性更易感染HR-HPV，且在HPV感染患者中Th1/Th2平衡向Th2漂移。《素问·四气调神大论》云：“圣人不治已病治未病。”[14]“治未病”理论的重要理念之一就是体质调控[7]。依据研究结果，未来可以应用中医药对偏颇体质女性进行体质调控，对阴道局部免疫Th1/Th2平衡进行调节，从而预防HPV感染，进而达到“治未病”的目的[2]。