利用高效液相色谱法区分纤维笔与签名章形成字迹的探究

宋朝阳

（安徽公安职业学院 安徽合肥 230031）

目前，纤维笔越来越多的被用于签署文件、书写信函、修改文字材料等[1]。用签名章伪造形成签名笔迹属于新兴的签名笔迹伪造方法，由于鉴定人对这种新兴的签名笔迹造假手段和伪造方法认识不清，缺乏检验经验和检验技能，在笔迹检验实际案例中，出现了签名章盖印签名字迹与纤维笔书写形成的签名字迹混淆不清的情况，这是造成鉴定意见出现分歧的一个原因。目前为止，还没有针对签名章与纤维笔形成字迹的区分方法进行的研究，为了解决鉴定意见分歧，笔迹检验鉴定实践急需在这一方面进行研究，以提供一个可供大家参考的检验技术指导。

高效液相色谱法的特点是：分离效能高、灵敏度高和样品用量少[2]，因此在区分油墨种类方面倍受关注。本实验研究了高效液相色谱法区分纤维笔油墨印迹和光敏签名章油墨印迹、纤维笔油墨印迹和原子签名章油墨印迹的实验方法和分析条件，并在此条件下分析了高效液相色谱法区分纤维笔油墨印迹和光敏签名章油墨印迹、纤维笔油墨印迹和原子签名章油墨印迹的可行性。

一、实验部分

（一）实验样品

10种不同牌号、生产厂家或生产批次的纤维笔（如表1所示）；7枚光敏签名章，7种不同牌号、生产厂家或生产批次的光敏印章油（如表2所示）；2枚原子签名章，2种不同牌号、生产厂家或生产批次的原子印章油（如表3所示）。

表1 纤维笔样品表

表2 光敏印油样品表

表3 原子印油样品表

（二）实验仪器

日立L-7200液相色谱仪，L-7420紫外检测器，L-7300柱温箱，D-7000型高效液相色谱管理系统，真空泵。

（三）实验试剂

甲醇；N，N-二甲基甲酰胺；乙酸。

（四）实验条件

色谱柱：Nova-Pak?C18 60A 4um 3.9×150（mm）

柱温：35℃

检测波长：580nm

流动相：甲醇：10%甲醇的水溶液（v/v）（80：20）

甲醇：水：冰乙酸：碱（70：30：1.5/100：0.5/100）

流速：0.9m l/min

（五）实验过程

在避光的条件下，在有纤维笔油墨、光敏油墨和原子油墨的复印纸上制备相应的油墨印迹样品。用洁净的剪刀剪取包含油墨色痕的印迹适量，小心剪取后放入容器中，清洗剪刀，擦拭干净后制备下一个油墨印迹样品，重复上述步骤，直至制备完成所有的油墨印迹样品。滴入适量的浓度为100%的甲醇，震荡均匀后静置提取30分钟，用取样针取10ul上清液待高效液相色谱分析。

二、结果与讨论

（一）条件优化实验

1.提取剂的选择。提取剂的选择至关重要，不仅跟提取样品的效果有关，跟流动相的选择也密不可分[3]。在提取剂的选择方面，试验了N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙酸的提取效果。N，N-二甲基甲酰胺的提取效果最好，甲醇的提取效果次之，乙酸的提取效果最差。根据实验室的条件，选择了甲醇做流动相，因而选择了甲醇作为提取剂。用甲醇做提取剂，30min后提取剂颜色几乎全部发生变化。

2.温度的选择。试验了20-35℃柱温条件，发现温度的变化对结果基本没有影响，最终选择了常温35℃，实验过程用恒温柱温箱保持此温度，以保证实验结果的稳定性。

3.检测波长的选择。纤维笔油墨色痕提取液均为有色溶液，故选择在可见光区进行分析。纤维笔油墨色痕提取液有蓝色、淡紫色、淡红色、灰色等几种颜色，通过在240nm紫外光波长和580nm可见光波长条件下的测定分析，确定检测波长为580nm可见光波长。

4.流动相的选择。在色谱分离中选择理想的流动相，可提供所需的选择性、柱效能，并在最短时间内完成分析。流动相的选择与待测物质的结构和性质有关。HPLC对流动相的基本要求有：高纯度且不与固定相反应；对样品有适当溶解度；满足检测器要求，当使用紫外检测器时，流动相不能有紫外吸收；粘度小。本实验选择了5种流动相体系，即：Ⅰ：甲醇-10%甲醇的水溶液（90：10）；Ⅱ：甲醇-10%甲醇的水溶液（80：20）；Ⅲ：甲醇-10%甲醇的水溶液（70：30）；Ⅳ：甲醇-水-酸（85：15：250ml/200m l）；Ⅴ：甲醇-水-冰乙酸-碱（70：30：1.5/100：0.5/100）。分别取纤维笔油墨字迹色痕样品、光敏签名章油墨字迹色痕样品和原子签名章油墨字迹色痕样品的提取液，在上述5种流动相条件下进样、分析，结果发现，甲醇-水-冰乙酸-碱（70：30：1.5/100：0.5/100）体系、甲醇-10%甲醇的水溶液（80：20）体系和甲醇-水-酸（85：15：250m l/200m l）体系各对一部分样品分离度较好且分析时间短。因而，确定出最佳流动相体系为：甲醇-水-冰乙酸-碱（70：30：1.5/100：0.5/100）、甲醇-10%甲醇的水溶液（80：20）和甲醇-水-酸（85：15：250m l/200ml）体系。

5.提取剂的影响。在每一个流动相体系下，对油墨印迹样品进行高效液相色谱分析前，先对甲醇提取液进行高效液相色谱分析。实验结果表明，甲醇提取液对纤维笔油墨、光敏油墨和原子油墨的色谱峰基本不产生干扰，如图1、图2、图3所示。

图1 甲醇提取剂在甲醇-10%甲醇的水溶液（80：20）体系下的高效液相色谱图

图2 甲醇提取剂在甲醇-水-冰乙酸-碱（70：30：1.5/100：0.5/100）体系下的高效液相色谱图

图3 甲醇提取剂在甲醇-水-酸（85：15：250m l/200m l）体系下的高效液相色谱图

（二）实验结果

由于不同的样品所含溶剂、着色剂、表面活性剂和其它添加剂等成分不同，因而对提取剂的反应也不同。部分样品经甲醇提取后上清液颜色不同。纤维笔油墨印迹经甲醇提取后上清液呈现蓝色、淡紫色、淡红色、灰色等颜色，光敏签名章油墨印迹经甲醇提取后上清液呈现蓝色、灰色等颜色，原子签名章油墨印迹经甲醇提取后上清液颜色不发生变化。因而从上清液颜色变化上能对实验用部分纤维笔和部分光敏签名章、纤维笔和原子签名章进行初步区分。

采用上述HPLC分析条件，得到纤维笔油墨印迹、光敏签名章油墨印迹和原子签名章油墨印迹的色谱图。通过色谱图分析可知，纤维笔油墨印迹、光敏签名章油墨印迹和原子签名章油墨印迹样品之间的主要色谱峰个数、保留时间均不一样。纤维笔油墨印迹样品之间、光敏签名章油墨印迹样品之间和原子签名章油墨印迹样品之间的主要色谱峰个数、保留时间也有差别。对纤维笔油墨印迹和光敏签名章油墨印迹、纤维笔油墨印迹和原子签名章油墨印迹进行多谱图分析，根据油墨印迹的主要色谱峰个数和保留时间特征，可以对纤维笔油墨印迹和光敏签名章油墨印迹、纤维笔油墨印迹和原子签名章油墨印迹进行种类区分。

8号纤维笔油墨印迹、9号纤维笔油墨印迹和1号光敏签名章油墨印迹、2号光敏签名章油墨印迹、4号光敏签名章油墨印迹、5号光敏签名章油墨印迹、6号光敏签名章油墨印迹和7号光敏签名章油墨印迹在HPLC流动相为甲醇：10%甲醇的水溶液（v/v）（80：20）的条件下能进行种类区分，如图4所示。

10号纤维笔油墨印迹和3号光敏签名章油墨印迹在HPLC流动相为甲醇：水：冰乙酸：碱（70：30：1.5/100：0.5/100）的条件下能进行种类区分，如图5所示。

1号至10号纤维笔油墨印迹和1号原子签名章油墨印迹、2号原子签名章油墨印迹能在HPLC流动相为甲醇-水-酸（85：15：250ml/200m l）的条件下能进行种类区分，如图6所示。

图4 纤维笔油墨印迹和光敏签名章油墨印迹在甲醇-10%甲醇的水溶液（80：20）体系下的高效液相色谱图

图5 纤维笔油墨印迹和光敏签名章油墨印迹在甲醇-水-冰乙酸-碱（70：30：1.5/100：0.5/100）体系下的高效液相色谱图

图6 纤维笔油墨印迹和原子签名章油墨印迹在甲醇-水-酸（85：15：250m l/200m l）体系下的高效液相色谱图

三、结论

（一）高效液相色谱法为纤维笔与签名章形成字迹的区分提供了一种有效的检验方法。

（二）从上清液颜色变化上能对部分纤维笔和部分光敏签名章、部分纤维笔和部分原子签名章进行初步区分。

（三）根据色谱图中的主要特征峰和保留时间，可以对纤维笔油墨印迹和光敏签名章油墨印迹、纤维笔油墨印迹和原子签名章油墨印迹进行种类区分。