复方五仁醇胶囊、五酯胶囊对他克莫司血药浓度影响及肝损伤保护作用的比较

蔡卫华， 张 琳， 张 劢， 窦志华∗， 王建新， 卢朝德， 吴建军， 肖 旭

（1.南通大学附属南通第三医院，江苏 南通226006；2.苏州市中医医院，江苏 苏州226006）

目前，终末期肝、肾疾病最根本的治疗手段是器官移植，但由于移植异体器官存在排异反应，患者术后必须终身进行免疫抑制治疗。他克莫司是一种大环内酯类强效免疫抑制剂，为肝、肾移植受者主要免疫抑制剂［1-2］，但临床应用过程中也发现一些问题： （1） 口服吸收率低、不完全、不规则， 导致其生物利用度较低 （平均仅为25%［3］）； （2） 价格昂贵，患者长期用药经济负担重；（3） 本身具有肝肾毒性［4］，长时间服用会引起严重肝损害［5］。因此，探索通过联合用药提高他克莫司生物利用度，减少用药剂量和毒副作用，减轻患者经济负担是近年来研究热点［6］。

临床研究表明，华中五味子乙醇提取物制成的制剂五酯胶囊、五酯片与他克莫司联合应用后能提高后者血药浓度［7-8］，活性物质为五味子类木脂素［9］，是五味子科植物的特征性成分［10］，五味子（五味子干燥成熟果实） 中其含有量明显高于南五味子 （华中五味子干燥成熟果实）中［11］；复方五仁醇胶囊是一种以五味子乙醇提取物为主，配伍三七、叶下珠、柴胡制成的复方制剂，治疗慢性肝炎疗效确切［12］。课题组前期研究发现，复方五仁醇胶囊、五酯胶囊联合他克莫司后，大鼠血浆中他克莫司Cmax分别提高1.9、1.5 倍，AUC 分别提高3.4、2.2 倍，前者优于后者；本实验比较了两者联合他克莫司后对后者血药浓度影响及肝损伤保护作用，以期为临床应用提供指导。

1 材料

1.1 动物 SD 大鼠（SPF 级），雄性，体质量201～255 g，由南通大学动物实验中心提供，动物使用许可证号SYXK（苏）2012-0030。

1.2 试药 他克莫司胶囊（普乐可复，批号IE210 A），由安斯泰来制药（中国） 有限公司生产；五酯胶囊（批号150103，所含主要五味子类木脂素五味子醇甲、五味子酯戊、当归酰戈米辛H、戈米辛G、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子酚、安五脂素、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素含有量分别为0.040 3、0.201 8、0.120 9、0.182 5、8.745 6、2.189 2、1.046 1、3.590 2、10.946 5、0.812 4、0.167 4 mg／g，合计28.042 8 mg／g），由四川禾正制药有限责任公司生产；复方五仁醇胶囊（批号150512，所含主要五味子类木脂素五味子醇甲、戈米辛D、五味子醇乙、当归酰戈米辛H、戈米辛G、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子酚、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素含有量分别为6.431 2、0.357 2、1.087、1.079 2、0.238、0.275 4、0.823 6、0.217 1、1.036 3、3.034 8、0.375 6 mg／g，合计14.955 4 mg／g），由南通大学附属南通第三医院制剂室生产（苏药制字Z04001984）。

1.3 仪器 ARCHITECT 普乐可复测定试剂盒、ARCHITECT i2000sr 全自动免疫分析仪 （美国Abbott 公司）；AU2700 全自动生化分析仪（日本Olympus 公司）。

2 方法

2.1 分组及给药 72 只大鼠随机分成他克莫司组、他克莫司+复方五仁醇胶囊组、他克莫司+五酯胶囊组、空白对照组，每组18 只，灌胃前禁食8 h，自由饮水，给药剂量分别为1.2 mg／kg（胶囊内容物的0.5%CMC-Na 混悬液）、1.2 mg／kg+0.1 g／kg、1.2 mg／kg+0.05 g／kg、等容量0.5%CMC-Na 溶液，每天1 次。在第7、14、21 天给药4 h 后大鼠禁食禁水，每组随机抽取6 只，腹腔注射10%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，取0.5 mL 置于EDTA 抗凝管中，供血药浓度测定用；取4 mL 置于普通采血管中，供ALT 水平测定用，取血后处死。

2.2 指标测定 全自动免疫分析仪测定他克莫司血药浓度，全自动生化分析仪测定ALT 水平。

2.3 统计学分析 通过SPSS 20.0 软件进行处理，数据以表示，组内比较采用单因素方差分析，组间比较采用LSD 检验。以P＜0.05 为有显著差异。

3 结果

3.1 复方五仁醇胶囊和五酯胶囊对他克莫司血药浓度的影响 表1 显示，与他克莫司组比较，给药7、14、21 d 后他克莫司+复方五仁醇胶囊组、他克莫司+五酯胶囊组他克莫司血药浓度显著升高（P＜0.05，P＜0.01）。

±s，n=6）

表1 复方五仁醇胶囊和五酯胶囊对他克莫司血药浓度的影响（ng／mL，x

3.2 复方五仁醇胶囊和五酯胶囊对ALT 水平的影响 表2显示，与空白对照组比较，给药7、14、21 d 后他克莫司组ALT 水平显著升高（P＜0.01）；与他克莫司组比较，给药后他克莫司+复方五仁醇胶囊组其水平显著降低（P＜0.05，P＜0.01），而他克莫司+五酯胶囊组无显著差异（P＞0.05）；与他克莫司+五酯胶囊组比较，给药7 d 后他克莫司+复方五仁醇胶囊组其水平显著降低（P＜0.01），而给药14、21 d 后无显著差异（P＞0.05）。

表2 复方五仁醇胶囊和五酯胶囊对ALT 水平的影响

表2 复方五仁醇胶囊和五酯胶囊对ALT 水平的影响

注：与空白对照组比较，∗∗P＜0.01；与他克莫司组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与他克莫司+五酯胶囊组比较，△△P＜0.01

组别 7 d 14 d 21 d空白对照组 30.33±2.58 31.17±0.75 31.00±2.10他克莫司组 44.50±4.76∗∗ 59.00±8.29∗∗ 52.80±15.90∗∗他克莫司+五酯胶囊组 45.50±5.43 53.50±8.39 48.33±8.41他克莫司+复方五仁醇胶囊组 35.17±4.26##△△ 46.40±6.35## 41.00±6.13#

4 讨论

他克莫司用于肝移植抗排异的推荐剂量为0.10 ～0.30 mg／kg［1］，折算成大鼠等效剂量为0.63～1.89 mg／kg，故实验取其中间值1.2 mg／kg。由“1.2” 项可知，复方五仁醇胶囊和五酯胶囊中木脂素类成分含有量比例约为1 ∶2，目前临床患者用药后者与他克莫司联合应用的剂量通常为每天2 次， 每次1 粒， 换算成大鼠等效剂量约为0.05 g／kg，故本实验中两者剂量分别设定为0.05、0.1 g／kg，即木脂素类成分剂量相等。结果表明，在木脂素类成分剂量相等的情况下，复方五仁醇胶囊提高他克莫司血药浓度的效果优于五酯胶囊，即对他克莫司引起的肝损伤具有保护作用，而五酯胶囊效果不明显，与文献［6］报道一致。

他克莫司是CYP3A 底物，主要由其代谢，同时也是P-gp底物，经其跨膜转运吸收［13］，而五味子类木脂素也是两者底物［14］，与该药物联合应用时竞争性地作用于两者，抑制它们对其代谢和外排，从而提高其血药浓度和生物利用度［9］。尽管复方五仁醇胶囊的原料五味子和五酯胶囊的原料南五味子均含五味子类木脂素，但种类不尽相同，前者代表性成分为五味子醇甲、五味子醇乙、五味子乙素五味子［15］，而后者为五味子甲素、五味子酯甲［16］，该类成分对CYP450 活性的影响有构效关系［17］，如五味子醇乙提高他克莫司血药浓度和生物利用度的作用最强［14］，它在五味子中的含有量明显高于在南五味子中。同时，复方五仁醇胶囊中含有三七，其总皂苷对大鼠肝脏CYP3A 活性有明显抑制作用［18］，并具有P-gp 底物转运特性及抑制P-gp 底物外排作用［19］，同时该制剂还含有叶下珠、柴胡，同样具有保肝作用［20-21］，3 味药材可能对五味子提高他克莫司血药浓度、抗肝损伤发挥协同作用。另外，本实验还发现随着给药时间延长，他克莫司血药浓度逐渐下降，其原因不明，还有待进一步分析。