羊免疫布鲁菌病疫苗(S2株)免疫抗体长期监测结果的试验

苏胜杰,马立峰,戴晓光,申 捷,萨茹拉,郭少平,赵心力

(1.内蒙古自治区动物疫病预防控制中心,内蒙古 呼和浩特 010010;2.内蒙古阿拉善盟动物疫病预防控制中心,内蒙古 阿拉善 750306)

布鲁菌病,是由布鲁菌引起人、家畜和多种野生动物共患的一种慢性细菌性传染病,简称布病。本病呈全球流行具有重要的公共卫生意义,给世界经济造成巨大损失[1]。布鲁菌是该病病原,该病主要经过消化道、皮肤黏膜和呼吸道等途径侵入机体而发生感染和发病,该病主要对动物生殖系统造成严重损害,也会对神经系统和骨骼系统造成损害。布鲁菌主要寄生于网状淋巴组织,造成免疫系统病理进程。对于布病流行严重地区,疫苗接种是控制该病的重要手段,目前,国内主要用布鲁菌活疫苗S2、A19、M5对易感动物进行免疫[2]。其中使用最为广泛的是S2疫苗。但这些疫苗免疫均存在一个共同弊端,均不能通过血清学方法区分自然感染和疫苗免疫抗体,从而影响对该病的诊断和防控。为探究布病S2疫苗免疫绵羊和山羊抗体长期消长规律,我中心对S2疫苗免疫羊监测一年的基础上,又进行了两年的免疫抗体监测结果研究,为布病疫苗临床应用、布病实验室检测和科学防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验疫苗 布鲁菌病活疫苗(S2株),购自中牧实业股份有限公司。

1.2 检测试剂 布鲁菌虎红平板凝集抗原、布鲁菌试管凝集抗原及布鲁菌阴、阳性血清,均购自中国兽医药品监察所。

1.3 实验动物 选取非免疫区阿拉善盟阿拉善左旗经布鲁菌虎红平板凝集试验、布鲁菌试管凝集试验检测均为阴性试验羊,分组情况见表1。

表1 试验羊分组

1.4 免疫方法 灌服免疫,免疫剂量100亿CFU组绵羊、山羊在一免后360 d、720 d分别进行1次加强免疫,口服免疫剂量200亿CFU组绵羊、山羊只免疫1次。

1.5 免疫抗体检测 在免疫前、一免、二免、三免后对所有试验羊进行采血分离血清,采用虎红平板凝集试验、试管凝集试验检测免疫抗体水平。实验操作按照GB/T18646-2002进行。

1.6 选取试验过程中抗体 一直阳性或抗体转阳后转阴又转阳持续2个月以上羊只进行剖检,观察病理变化,并进行细菌培养。

2 结果

2.1 100 亿CFU免疫剂量组绵羊、山羊检测结果

100 亿CFU免疫剂量组绵羊一免后20 d时血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,一免后150 d血清抗体阳性率降至0%,一免后180 d～360 d抗体阳性率处在较低水平(0% ～4%);二免后30 d血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,二免后150 d血清抗体阳性率降至2.8%,二免后180 d～330 d抗体阳性率有高有低,二免后360 d抗体阳性率降至2.5%;三免后60 d血清抗体阳性率又达到最高峰,之后一直呈现下降趋势,三免后360 d抗体阳性率降至2.6%,空白对照组抗体检测均为阴性;100亿CFU免疫剂量组山羊一免后20 d时血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,一免后90 d～三免后360 d抗体阳性率时高时低,规律不明显,空白对照组抗体检测均为阴性,检测结果见图1。

图1 100亿CFU免疫剂量组绵羊、山羊抗体消长曲线

2.2 200 亿CFU免疫剂量组绵羊、山羊检测结果200亿CFU免疫剂量组绵羊免疫后20 d时血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,免疫后150 d血清抗体阳性率降至0%,免疫后180 d～1 080 d抗体阳性率有高有低。空白对照组抗体检测均为阴性;200亿CFU免疫剂量组山羊一免后20 d时血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,免疫后90 d～免疫后360 d抗体阳性率时高时低,规律不明显,空白对照组抗体检测均为阴性,检测结果见图2。

图2 200亿CFU免疫剂量组绵羊、山羊抗体消长曲线

3 讨论

3.1 100 亿CFU免疫剂量组绵羊在一免后20 d时,血清抗体阳性率达到最高峰为82%,之后呈下降趋势,免疫后150 d,抗体阳性率降至0%,此后,直到免疫360 d抗体阳性率维持在0% ～4%之间;二免疫后30 d血清抗体阳性率达到最高峰为47.5%,直到二免后150 d血清抗体阳性率降至3%,二免后180 d～330 d血清抗体阳性率时高时低,阳性率维持在14%～30%之间,二免后360 d抗体阳性率又降至3%;三免后60 d血清抗体阳性率又达到最高峰为87.2%,三免后90 d～360 d抗体阳性率呈现下降趋势;100亿CFU免疫剂量组山羊在免疫后20 d时,抗体阳性率达到最高峰为100%,免疫后90 d～330 d抗体阳阳性率时高时低,处于10% ～25%之间,免疫后360 d抗体阳性率降至5%,二免后和三免后抗体消长规律基本与一免后抗体消长规律一致;200亿CFU免疫剂量组绵羊在免疫后20 d时,血清抗体阳性率达到最高峰为92%,免疫后150 d,抗体阳性率降至0%,免疫180 d～360 d抗体阳性率处于0%～8%之间;200亿CFU免疫剂量组山羊在免疫后20 d时,抗体阳性率达到最高峰为100%,免疫后90 d～360 d抗体阳阳性率时高时低,处于18% ～35%之间。田素梅研究表明,绵羊经S2疫苗免疫,免疫15 d抗体达到最高值,至9个月仍然可以检测到凝集抗体[3],高红霞研究表明,羊经S2疫苗免疫后,一个月时凝集抗体达到最高峰[4],党富德研究表明,奶山羊经S2疫苗免疫后25 d,抗体阳性率达到最高峰,在以后不同时间段抗体阳性率也出现时高时低现象[5],通过本研究证实,无论是多次免疫或一次免疫绵羊组和山羊组,在免疫后30 d左右,抗体阳性率均达到最高峰,之后在不同时间段均出现抗体阳性率时高时低的现象。

3.2 通过100亿CFU、200亿CFU免疫剂量组试验羊抗体阳性率来看,两组试验羊阳性率并无明显差异,所以对疫苗免疫后的检测进行评价时,无需考虑免疫剂量大小的影响。

3.3 通过试验羊抗体转阳率看,山羊组免疫抗体阳性率较同时期绵羊抗体阳性率普遍偏高,且升降幅度较大,这可能与山羊对疫苗免疫敏感性较高有关,有待于进一步研究。

3.4 通过多次免疫试验羊抗体转阳率看,无论绵羊组和山羊组,在首次免疫、二免和三免后30 d左右抗体阳性率均达到最高峰,但绵羊二免后、山羊二免和三免后试验羊抗体阳性率最高值较首次免疫低,可能与多次免疫造成试验羊对疫苗敏感性降低有关,有待于进一步研究。

3.5 通过100亿CFU、200亿CFU免疫剂量组绵羊抗体转阳率看,在免疫后150 d,抗体阳性率已降至0%,但后期有出现个别试验羊抗体转阳现象,选取4只抗体阴转阳的试验羊进行剖检,并未发现剖检羊脏器出现病理变化,同时进行细菌培养,未见布鲁菌菌落,说明抗体转阳的羊不是布鲁菌自然感染,可能与疫苗免疫有一定关系,也可能由其他因素引起,需进一步研究。

3.6 通过绵羊组抗体转阳率发现,在一免后150 d和二免后150 d虎红平板凝集试验检测抗体转阳率为0%,初步摸索了羊经3次免疫布鲁菌S2株疫苗后血清抗体规律,为鉴别绵羊自然感染和疫苗免疫抗体消长规律提供参考。

3.7 通过一次免疫试验羊抗体阳性率发现,在免疫后390 d和740 d抗体阳性率均出现较小幅度升高,可能与多次免疫羊混群饲养,羊群互相舔舐及吸入环境中疫苗有关,同时一次免疫组试验羊在免疫较长时间后,仍然能够检测到阳性动物。

3.8 通过虎红平板凝集试验和试管凝集试样两种检测方法对所采集样品的检测结果看,虎红平板凝集试验检测样品阳性率较试管凝集试验高,也证实虎红平板凝集试验敏感性较高,而试管凝集试验特异性较高。在日常布病监测工作中,先进行虎红平板凝集试验筛选,同时对检测阳性样品进行试管凝集试验,有助于更准确判定羊的感染状况。