应用UGRP1预测Graves病患者碘131治疗发生甲减风险

朱 莉，官伟宁，杜丹丹，李 俊，左春林

格雷夫斯病(graves' disease，Graves病，GD)是一种常见的自身免疫性甲状腺疾病，临床上针对GD有三种治疗方法，即抗甲状腺药物，碘131(131I)及手术治疗[1]。相比另两种疗法，131I治疗有方便、经济、治愈率高的特点，但永久性甲状腺功能减退症(甲减)是其难以回避的副作用。针对引起甲减的相关因素，目前研究结果多不一致。Yang et al[2]提出其与甲状腺24 h碘摄取量、治疗时碘总剂量、游离甲状腺素水平、甲状腺质量以及抗甲状腺药物的使用相关。filigoj et al[3]研究表明年龄是其独立影响因素。子宫球蛋白相关蛋白1(uteroglobin-related protein 1，UGRP1)是一种功能尚未完全明确的分泌蛋白，在正常甲状腺组织有少量表达[4]。UGRP1基因位于GD的易感区段内，且是甲状腺转录因子的下游靶基因，可能参与GD的发病过程[5]。该研究通过针吸GD患者甲状腺细胞分析UGRP1的表达情况，观察其与131I治疗后发生早期甲减风险的相关性，旨在探究GD患者131I治疗后甲减发生风险的预测指标。

1 材料与方法

1.1 病例资料招募2017年3月～2018年3月安徽医科大学第一附属医院内分泌科首次接受131I治疗女性GD住院患者共38例，所有患者符合放射碘治疗指征[6]。每例患者在接受131I治疗前均行甲状腺细针穿刺细胞学检查，留取切片两张，分别行苏木精-伊红染色及UGRP1免疫组化染色。本研究通过安徽医科大学第一附属医院伦理委员会批准，所有入组患者知悉检测内容并签署知情同意书。

1.2 主要试剂一抗：兔抗人UGRP1多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司；二抗：PV6000山羊抗兔IgG/HRP聚合物、DAB试剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 实验步骤(Envision二步法)-20 ℃冰箱保存标本，37 ℃烤箱孵育30 min，使用3%过氧化氢封闭内源性过氧化物酶活性及0.3% TRIton-X100溶解细胞膜和核膜的脂质；滴加兔来源的UGRP1抗体(1 ∶500)覆盖切片，4 ℃孵育过夜；滴加即用型二抗，37 ℃烤箱孵育30 min，滴加适量新鲜配置的DAB显色液，显微镜下观察控制显色时间；苏木精染液染色20 s，纯水冲洗10 min充分蓝化，自然风干后，中性树脂封片。

1.4 实验结果判定标准在光镜下分析，排除非特异性染色前提下，细胞膜上或细胞质内有黄色、棕黄色或棕褐色颗粒的细胞为阳性细胞。本研究样本均由两名具备病理检验资质的医师进行阅片。

2 结果

2.1 GD患者131I治疗前的资料根据UGRP1的表达的情况，将38例患者分为UGRP1阳性表达组和UGRP1阴性表达组，131I治疗前两组GD患者的年龄、病程、血常规、肝功能、血清中三碘甲状腺氨酸(triiodothyronine，TT3 )、甲状腺素(thyroxine，TT4)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone，TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody，TPOAb)、抗甲状腺球蛋白抗体(anti-thyroglobulin antibody，ATG)、甲状腺球蛋白(thyroglobulin，Tg)和促甲状腺激素受体抗体(thyroid stimulating hormone receptor antibody，TRAb)等组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组治疗前临床资料的比较(n=38)

2.2 UGRP1在GD甲状腺细胞中的表达GD患者的甲状腺细针穿刺细胞学可见甲状腺滤泡细胞片样排列，周围可见吸收空泡，部分核大，细胞质较宽。背景可见胶质，淋巴细胞少量。UGRP1抗原呈棕黄色或棕褐色，定位于甲状腺滤泡细胞的细胞质中。通过免疫组化的检测，其中有20例患者甲状腺细胞中UGRP1阳性表达，阳性率为52.6%，见图1A、1B、1C；而18例患者甲状腺细胞中UGRP1阴性表达，阴性率为47.4%，见图1D、1E、1F。

图1 UGRP1在GD甲状腺细胞中的表达 IHC×200A、B、C：UGRP1阳性表达组；D、E、F：UGRP1阴性表达组

2.3 UGRP1阳性与阴性表达组的甲状腺功能差异不干预治疗过程，所有患者在行131I治疗后12周随访甲状腺功能，其中UGRP1阳性表达组的TT3与TT4水平均低于UGRP1阴性表达组，而TSH水平明显高于UGRP1阴性表达组，两组间TT3与TSH水平差异有统计学意义。见表2。

表2 131I治疗后12周两组间甲状腺功能的比较(n=38)

2.4 GD患者131I治疗甲减发生预测因素分析本研究中，对GD患者131I治疗后出现甲减的临床及检验因素进行分析。结果显示，在众多因素中，UGRP1阳性表达与否同GD患者131I治疗后甲减的发生显著相关，在UGRP1阳性的患者中，发生甲减的概率显著增加(P<0.01)。见表3。

3 讨论

131I治疗GD患者的主要并发症是甲状腺功能减退。目前的研究显示，绝大多数患者131I治疗后发生早期甲减，通常发生在131I治疗后的前3～6个月内[7]，若诊断不及时或未及时给予甲状腺激素替代治疗，可能会导致甲减加重，甚至需永久性使用甲状腺激素改善机体情况，因此早期识别甲减的发生概率对指导临床治疗具有重要意义。

表3 131I治疗后12周各组间甲减发生情况的比较[n(%)]

UGRP1基因区域已被证实含哮喘易感位点及编码多种辅助性T细胞2型细胞因子，具有潜在的抗炎作用[8]。2009年Song et al[5]利用TagSNP技术，采用定位克隆策略，率先识别出UGRP1基因为GD的易感基因之一。但到目前为止，UGRP1如何促进甲亢的发生尚不清楚。研究[9]显示，UGRP1基因敲除小鼠接受卵清蛋白诱导时，表现出加重的肺部炎症。另外，UGRP1可能通过调节胸腺活化调节趋化因子17和趋化因子受体4途径发挥抗炎活性[10]。早期研究[11-13]表明，UGRP1可能通过激活或抑制某些细胞因子的活性而发挥抗炎作用，如白介素-5(interleukin-5，IL-5)、IL-9、IL-10等。

本研究结果显示，在UGRP1阳性的GD患者中，131I治疗后甲减的发生率为75%，在UGRP1阴性的GD患者中，131I治疗后甲减的发生率为33%，UGRP1与GD患者131I治疗后甲减发生显著相关，且治疗前两组患者的年龄，身高，体质量，病程，抗甲状腺药物治疗时间，血常规，肝功能，甲状腺激素及抗体水平等因素均无明显差异。另外本研究仅显示UGRP1与GD患者131I治疗后甲减发生率相关，而患者的年龄，体质量指数，病程，抗甲状腺药物治疗时间，白细胞，中性粒细胞，谷丙转氨酶，谷草转氨酶，TPOAb，ATG，Tg，TRAb等因素均与甲减发生无关，因此无其他因素共同纳入进行下一步多因素回归分析。本研究为首次在GD患者临床样本中检测UGRP1表达，并探究UGRP1蛋白表达水平及其它临床因素与131I治疗后甲减发生的相关性，结果表明UGRP1对于GD患者行131I治疗后发生甲减的概率可能有预测作用。根据现有的研究结果，推测UGRP1可能本身是一个抗炎因子，或可能为炎症反应过程中的重要调节因子，从而参与机体炎症反应，影响GD的致病过程及转归。UGRP1抑制炎症反应的具体机制，影响GD致病过程及转归的具体途径，是否还有其他的受体尚需进一步的研究证实。

综上所述，本研究表明GD患者行131I治疗后发生甲减可能与UGRP1在甲状腺细胞中的高表达有关，UGRP1高表达是否作为GD患者131I治疗后甲减发生的有效预测因子，将有赖于多中心、大样本的临床研究。同时本研究为GD患者选择合适的治疗方式，在提高其治愈率同时尽可能降低甲减的发生率提供了一条新思路。