白芷川芎鼻腔给药制剂质量标准研究

高丽新，王丕明

(山西药科职业学院，山西 太原 030031)

白芷川芎鼻腔给药制剂是以都梁丸[1]为原方，由白芷和川芎两味中药经制剂工艺加工而成，用于风寒瘀血阻滞脉络所致的头痛。白芷主要化学成分为香豆素类成分，具有广泛的生理和药理作用[2]，香豆素类成分主要为欧前胡素、异欧前胡素。笔者根据处方中白芷的化学成分特点，研究制定了白芷的定性鉴别方法及欧前胡素、异欧前胡素的含量测定方法，以便更好地控制制剂的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

电子天平(沈阳龙腾电子称量仪器有限公司)；AB204-N型精密分析天平(METTLER TOLEDO上海衡器有限公司)；101A-2 干燥箱(上海市实验仪器总厂)；TDE5-WS 多管架自动平衡离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)；939 薄层制板仪(重庆南岸贝尔德仪器技术厂)；CAMAG TLC SCANNER 3 薄层色谱扫描仪(卡玛公司)；Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)。

1.2 试药

欧前胡素(中国食品药品检定研究院，批号：110826-201013)；异欧前胡素(中国食品药品检定研究院，批号：110827-201008)；白芷对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：120984-200602)；白芷、川芎(安徽省亳州市中信中药饮片厂)；白芷川芎鼻腔给药制剂(自制)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；含量测定所用试剂均为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 白芷的薄层色谱鉴别[3]

2.1.1 供试品溶液制备 取白芷川芎鼻腔给药制剂2.5 mL，水浴挥干，残渣加2 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液制备 精密称取欧前胡素对照品4.98 mg、异欧前胡素对照品4.67 mg置10 mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，用甲醇定容到10 mL，即得混合对照品溶液。另取混合对照品溶液1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.1.3 对照药材溶液制备 称取白芷对照药材0.5 g，加乙醚10 mL，加热回流1 h，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为对照药材溶液。

2.1.4 阴性对照溶液制备 除白芷外，按处方比例称取药材适量，按照白芷川芎鼻腔给药制剂的制备方法制备缺白芷阴性对照样品。取2.5 mL缺白芷的阴性对照样品，水浴挥干，残渣加2 mL甲醇溶解，即得缺白芷的阴性对照溶液。

2.1.5 薄层鉴别 按照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液各20 μL，对照品溶液、对照药材溶液各10 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以石油醚(30～60 ℃)-乙醚(3∶2)为展开剂，在25 ℃下展开，取出，晾干，置紫外灯366 nm下检视。结果：供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。结果见图1。

1.缺白芷阴性对照品；2.欧前胡素、异欧前胡素对照品；

2.2 欧前胡素、异欧前胡素含量测定[4]

2.2.1 色谱条件 色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(5 μm，4.6 mm×250 mm)；填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇-水(70∶30)；流速为1 mL/min；检测波长为254 nm；柱温25 ℃；样品进样量为10 μL；理论塔板数按欧前胡素计算应不低于3 000。

2.2.2 溶液制备 欧前胡素对照品溶液制备：取欧前胡素对照品5 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，用甲醇定容至刻度，摇匀，得到储备液。精密量取储备液1 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得欧前胡素对照品溶液。异欧前胡素对照品溶液制备：取异欧前胡素对照品5 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，用甲醇定容至刻度，摇匀，得到储备液。精密量取储备液1 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得异欧前胡素对照品溶液。供试品溶液制备：精密量取2.5 mL白芷川芎鼻腔给药制剂(相当于原药材1 g)，水浴挥至尽干，残渣用甲醇少量多次转移至25 mL容量瓶中，超声30 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。

2.2.3 方法学考察 阴性样品干扰试验：取缺白芷的鼻腔给药制剂2.5 mL，水浴挥至尽干，残渣用甲醇少量多次转移至25 mL容量瓶中，超声30 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得缺白芷阴性样品溶液。取欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液、供试品溶液、缺白芷阴性样品溶液，按上述色谱条件分别进样分析，结果在该色谱条件下，缺白芷阴性样品溶液对欧前胡素、异欧前胡素含量的测定无干扰，色谱见图2、图3、图4、图5。

图2 欧前胡素色谱

图3 异欧前胡素色谱

图4 供试品色谱

图5 缺白芷阴性对照色谱

线性关系：①分别精密量取欧前胡素对照品储备液(0.498 mg/mL)0.3 mL、0.6 mL、0.9 mL、1.2 mL、1.5 mL、1.8 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。按上述色谱条件进行测定，记录峰面积。以对照品溶液浓度(C)为横坐标X，峰面积(A)为纵坐标Y，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=33 178X+2.676 4，R2=0.999 9。结果见表1、图6。

表1 欧前胡素线性关系试验结果

图6 欧前胡素标准曲线

结果表明欧前胡素在0.0059～0.0358 mg/mL浓度范围内，线性关系良好。

②分别精密量取异欧前胡素对照品储备液(0.467 mg/mL)0.3 mL、0.6 mL、0.9 mL、1.2 mL、1.5 mL、1.8 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。按上述色谱条件进行测定，记录峰面积。以对照品溶液浓度(C)为横坐标X，峰面积(A)为纵坐标Y，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=249 21X+0.666 7，R2=0.999 8。结果见表2、图7。

表2 异欧前胡素线性关系试验结果

图7 异欧前胡素标准曲线

结果表明异欧前胡素在0.005 6～0.033 6 mg/mL浓度范围内，线性关系良好。

精密度试验：分别取欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样5次进行测定，记录峰面积，结果表明精密度良好。见表3。

稳定性试验：取供试品溶液在室温下放置，分别在0、4、8、12、16、24 h后按上述色谱条件进行测定，记录峰面积，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。见表4。

表3 精密度试验结果

表4 稳定性试验结果

重复性试验：取同一批白芷川鼻腔给药制剂按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，按上述色谱条件进行含量测定，记录峰面积，结果表明重复性良好。见表5。

表5 重复性试验结果 (mg/mL)

回收率试验：精密量取同批已知含量的白芷川芎鼻腔给药制剂(欧前胡素含量为0.248 mg/mL，异欧前胡素为0.152 mg/mL)6份，每份4 mL，分别精密加入欧前胡素对照品储备液(0.498 mg/mL)2 mL、异欧前胡素对照品储备液(0.467 mg/mL)1 mL，混匀。按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行含量测定，记录峰面积，并计算回收率。结果见表6、表7。

表6 欧前胡素回收率试验结果

表7 异欧前胡素回收率试验结果

结果表明，本方法欧前胡素的回收率范围为97.99%～101.00%，其平均回收率为99.46%，RSD为1.05%；异欧前胡素的回收率范围为97.86%～101.07%，其平均回收率为99.43%，RSD为1.14%，表明本方法回收率良好。

2.2.4 白芷川芎鼻腔给药制剂样品测定 取三批样品分别按含量测定方法进行含量测定，记录峰面积，按外标法以峰面积计算欧前胡素、异欧前胡素的含量。结果见表8。

表8 三批样品测定结果 (mg/mL，n=3)

3 讨论

本研究根据白芷药材中有效成分的性质，采用TLC和HPLC分别制定了白芷川芎鼻腔给药制剂的定性鉴别和含量测定的方法，可更好地控制制剂的质量。