HPLC法测定平糖散中五味子甲素、五味子乙素含量

2019-07-16 08:07邓丽莹
亚太传统医药 2019年6期
关键词:乙素甲素五味子

邓丽莹

(阜新市检验检测认证中心,辽宁 阜新 123000)

平糖散为辽宁省阜新市糖尿病医院的医院制剂,由五味子、山药、肉桂及枸杞子四味中药组成,具有养阴生津、温肾补肾的功效,主治口渴多饮、口燥咽干、多食以饥、小便频数、腰痠腿软、头晕气短、疲乏无力、夜寐困难等症状。方中五味子为君药,性温,味酸、甘,归肺、心、肾经,具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效[1]。现代研究发现五味子可应用于中枢神经系统、心血管系统、消化系统类疾病的治疗。除此之外,其还有降血糖、肝保护、抗糖尿病慢性并发症、增强免疫功能等作用。五味子所含有的五味子甲素、五味子乙素是平糖散的主要有效成分。目前该制剂现行质量标准未进行含量测定质量控制, 故本文采用高效液相色谱法,同时测定五味子甲素和五味子乙素两种成分的含量。建立的测定方法准确、灵敏度高、重复性良好,适用于平糖散的质量控制,为进一步提高其质量标准提供了科学依据。

1 仪器与试药

1.1仪器

Waters e2695型高效液相色谱仪(Waters e2489检测器,Waters工作站);BP211D 型电子分析天平(德国赛多利斯公司)。

1.2 试药

五味子甲素对照品(批号0764-200006)、五味子乙素对照品(批号110765-200306)均购自中国食品药品检定研究院;平糖散(辽宁省阜新市糖尿病医院提供,批号:20170907、20170910、20171015、20180312,规格:4 g/袋);甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(72∶28);检测波长∶254 nm;流速:1.0 mL·min-1;进样量:20 μL。理论塔板数以五味子甲素峰计算不少于2 000。色谱见图1。

1:五味子甲素(Deoxyschizandrin);2:五味子乙素(Schisandrin B)

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 取五味子甲素对照品4.47 mg,置于50 mL量瓶中,五味子乙素2.74 mg,置于25 mL量瓶中,分别加入甲醇至刻度,摇匀,即得五味子甲素对照品溶液(0.089 4 mg·mL-1) ,五味子乙素对照品溶液( 0.109 6 mg·mL-1) 。精密移取五味子甲素对照品溶液13 mL,五味子乙素对照品溶液10 mL于同一50 mL 量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,即得混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取平糖散3袋,研细,取2.0 g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,称定重量,加热回流1 h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.2.3 阴性对照溶液 按平糖散处方比例及制法,制得不含五味子的阴性样品,取不含五味子的阴性样品,按照“2.2.2”项下方法制备即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 系统适应性考察 将对照品溶液与供试品溶液及阴性对照溶液用0.45 μm 微孔滤膜过滤后,分别进样,记录色谱图(色谱图见图1)。五味子甲素与五味子乙素均能达到基线分离,阴性对照无干扰。

2.3.2 线性关系考察 精密吸取混合对照的溶液1 mL、2 mL、5 mL、8 mL、10 mL,分别置于10 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。按上述色谱条件进样20 μL,测定峰面积。以浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),得回归方程为:五味子甲素Y=3 848 754.912 4X-20 101.387 8,R2=1.000 0;五味子乙素Y=3 104 070.15X-59 413.360 5,R2=1.000 0。结果表明,五味子甲素和五味子乙素在0.023 244~0.232 44 μg·mL-1和0.021 92~0.219 2 μg.mL-1浓度范围内与其各自的峰面积呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度考察 精密吸取混合对照品溶液20 μL,重复进样6次,测定五味子甲素与五味子乙素的峰面积,结果五味子甲素与五味子乙素峰面积的RSD(n=6)分别为0.8%和1.2%,表明仪器进样精密度良好。

2.3.4 重复性试验 取同一批号平糖散(批号20170907)供试品6份,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,测定五味子甲素和五味子乙素的含量,结果五味子甲素与五味子乙素的平均含量为0.195 4 mg·g-1和0.553 3 mg·g-1,RSD(n=6) 分别为1.2%和0.6%。表明方法的重复性良好。

2.3.5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(批号:20170907) 20 μL,分别于配制 0、2、4、8、16、24 h 后进样,测定峰面积,结果五味子甲素、五味子乙素峰面积的RSD(n=6)分别为0.7%、0.5%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.3.6 加样回收试验 精密称取已知含量的同一批次( 批号:20170907) 样品6份,每份约1.0 g,置于具塞锥形瓶中,分别精密加入五味子甲素和五味子乙素浓度为7.75 μg·mL-1和21.92 μg·mL-1的混合对照品溶液25 mL,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按照“2.1”项下色谱条件测定,计算2种成分的回收率,结果见表1。

表1 回收率测定结果 (n=6)

2.3.7 样品含量测定 取平糖散样品3批,按照“2.2”项下方法制得供试品溶液,按上述色谱条件下分别进样20 μL,测得峰面积,计算五味子甲素和五味子乙素的含量。结果见表2。

表2 样品测定结果 (mg·g-1,n=3 )

3 讨论

五味子为平糖散的主要成分之一。已有大量研究表明,五味子具有显著的保肝利肝作用[2]。笔者针对平糖散质量标准中五味子含量测定的空白,建立了HPLC同时测定平糖散中五味子两种有效成分的方法,为平糖散的质量控制提供了科学依据。

在供试品溶液的制备中,考察以甲醇、乙醇为溶剂,超声处理15、20、30、60 min以及加热回流30 min、1 h的提取条件,结果表明,以甲醇为溶剂,加热回流1 h时待测成分可提取完全,且操作简单。

对于流动相的选择,参考有关文献,考察了甲醇-水、乙腈-水体系,其中甲醇-水(72∶28)对五味子甲素和五味子乙素的分离效果较好,在检定波长处基线无干扰。高效液相色谱法测定中,分别考察了220 nm、236 nm、250 nm、254 nm的检测波长,结果表明,选用254 nm分离效果较为理想,无杂质干扰。

采用建立的方法测定了3批平糖散,结果表明,不同批次样品中五味子甲素和五味子乙素的含量存在差异,这可能与原料五味子的品质有关。五味子作为平糖散的重要有效成分,应保证其原料质量的稳定性,更应确保平糖散中五味子含量的稳定性,建议在质量标准中增加五味子甲素和五味子乙素的含量测定,以反映五味子的含量,使平糖散的质量得到全面控制。

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