梅花猪猪肺炎支原体母源抗体对疫苗免疫抗体影响的研究

胡鸿惠，南文金，黄健强，吴静波 ，彭国良 ，钟 澜,2

（1.韶关学院 粤北生猪生产及疫病防控协同创新发展中心，广东 韶关512005；2.韶关市畜牧研究所，广东 韶关 512026）

梅花猪是我国地方种猪“基因库”中的宝贵品种资源，是培育优质、高产“专门化品系”和高档特色品牌猪肉的良好素材.资料记载梅花猪原产于广东省乐昌市，以乐昌梅花镇命名，分布于韶关各县市区、湖南宜章以及广东的英德、清远、佛岗等县市，具有繁殖力高、母性好、肉质优良、适应性强、抗病性好等独特的品质［1］.猪呼吸系统疾病，是地方猪种的常见疾病，以猪支原体肺炎和猪传染性胸膜肺炎较为常见.猪支原体肺炎，又称“喘气病”，一年四季、任何年龄段的猪均可感染，全球阳性率约在70%～80%之间，发病率在40%以上，哺乳仔猪和保育猪的感染率、发病率、病死率较高［2-3］.大多数情况下，猪感染支原体后会破坏呼吸道纤毛，引起免疫抑制，且容易继发其他病原感染，从而带来非常严重的损失.有研究表明猪肺炎支原体母源抗体在体内的持续时间较长，会干扰疫苗的免疫效力［4］.本研究对梅花猪保种猪场进行猪肺炎支原体抗体检测，通过监测抗体水平的变化规律，研究母源抗体对疫苗免疫的影响，为合理制定该保种场的免疫方案提供数据支撑，为同类地方猪场的科学养殖和免疫提供借鉴.

1 材料

7、14、28、35、42、56、70、86 日龄梅花猪血清样品，采自韶关某梅花猪保种猪场.

猪支原体肺炎灭活疫苗，购自硕腾动物保健品有限公司.猪肺炎支原体抗体检测试剂盒，购自美国IDEXX公司.

全波长酶标仪（型号为MULiskan Go）、台式冷冻离心机（型号为Fresc017），购自美国Thermo公司；单道及多道移液器，购自德国Brand公司；恒温培养箱（型号为303A-4），购自上海申安医疗器械厂.

2 方法

2.1 免疫

选择分娩时间相差1 d的4窝仔猪进行母源抗体监测，每窝仔猪随机选择4头仔猪，7日龄肌肉注射猪支原体肺炎灭活疫苗，每头2 mL.

2.2 采样

分别于出生 7（首免前）、14、28、35、42、56、70、86 日龄前腔静脉采血 3～5 mL，4℃冰箱静置过夜，待血液凝固析出血清后，8 000 rpm离心5 min，移取血清置于1.5 mL灭菌EP管中，-80℃保存.

2.3 检测

按照美国IDEXX公司试剂盒使用说明书进行血清样品的检测.检测前将样品、试剂盒恢复至室温，试剂盒反应置于25℃恒温培养箱中进行.

2.4 结果判定

猪肺炎支原体抗体检测试剂盒：S/P＜0.30，为阴性；0.30≤S/P≤0.40，为可疑；S/P＞0.40为阳性.S/P=(阳性样品A650值-阴性对照平均A650值)/（阳性对照平均A650值-阴性对照平均A650值）

3 结果

3.1 猪肺炎支原体抗体检测结果

检测结果表明，出生7 d和14 d仔猪的猪肺炎支原体抗体合格率均为100%，出生21～35 d抗体水平逐渐下降，28 d时抗体合格率为68.75%，但下降幅度增大，至35 d下降到最低水平，仅25%的抗体合格率，详见表1.

表1 抗体检测结果

3.2 猪肺炎支原体抗体变化规律

猪支原体肺炎疫苗免疫的仔猪母源抗体效价变化规律显示，该场梅花猪仔猪母源抗体在出生时抗体水平较高，并随日龄逐渐下降，但不同猪群出生时的母源抗体S/P值差距显著.受测试的4窝仔猪，有3窝均在35日龄达到抗体水平的最低值，有1窝整体水平持续下降，但在35日龄时也出现一个低峰后升高，见图1.

4 讨论

图1 抗体变化规律

猪支原体肺炎可以通过气溶胶进行传播，并很容易继发感染其他呼吸道的疫病，患有支原体肺炎的猪容易与其他病毒或细菌发生混合感染，增加猪群的死亡率，患病猪出现生长发育不良，料肉比增大，饲料转化率降低，造成生产率和生长速度大大下降［4］.在实际生产中，猪支原体肺炎多呈区域性流行，很多猪场从保育阶段开始呼吸道疾病相对严重，而注射过呼吸道相关疾病疫苗的猪场，呼吸道症状则多发生于中大猪.国内有不少学者开展过猪支原体肺炎的区域流行病学调查，结果表明不同地区猪群抗体阳性率存在一定差异，多处于45.78%～62.5%之间，赵卫永等［5］调查表明山东蓬莱地区猪肺炎支原体抗体阳性率为56.48%，师丽敏等调查海口市及周边地区育肥猪猪支原体肺炎感染率在93.3%以上，哺乳仔猪和幼龄猪的发病率最高，育肥猪和种猪、后备猪多呈隐性感染，不表现出明显的临床症状，但可检测到血清阳性.同时，也有研究表明该病抗体阳性率不仅与地理环境有关，与猪的品种也存在一定的关系，嵇辛勤等［6］调查某地方猪种香猪的猪肺炎支原体抗体阳性率为41.67%，而本场杂交猪的阳性率为28.57%.

基于猪支原体肺炎的感染率较高，且在地方猪种中发病率相对较高，本研究旨在研究仔猪母源抗体的变化规律，及疫苗免疫对母源抗体的影响，以求用数据指导疫苗免疫和猪场疾病防控.本研究中检测的大部分梅花猪7日龄未免疫前抗体阳性率为100%；28日龄抗体合格率为68.75%；35日龄时抗体合格率仅25%，这与母源抗体随日龄增加而下降相关，而免疫抗体产生量不足.同时，实验结果表明，受检的四窝猪群7日龄母源抗体S/P值相差较大，大部分猪只在35日龄达到抗体水平的最低值，母源抗体水平影响猪群的疫苗免疫效果.其中母源抗体最高的一窝，其母源抗体整体下降速度高于其他三窝，母源抗体越高的猪只疫苗免疫效果越差，可能与首次免疫的时间选择不合理相关，也可能是个体差异，还需要进一步研究证实.此外，本研究与师丽敏等［7］报道猪肺炎支原体抗体在40日龄段达到最低有所不同，这可能跟猪的品种、养殖地域、养殖状况等因素相关.

虽然猪肺炎支原体的免疫保护效果与体液免疫、细胞免疫之间的相关性并没有研究清楚，其免疫保护机制也仍在研究中.但免疫接种依旧是猪场预防猪支原体肺炎的重要措施之一，通过母源抗体消长规律选择最佳免疫接种时间，可以发挥猪支原体肺炎疫苗免疫的最大效果，提高猪场疫病防控能力，大幅度地降低猪群疾病的发病率和死亡率［8-9］.

近年来，研究发现梅花猪特有的品种优势正在退化、特别是繁殖和生长性能方面，这与养殖环境、疾病控制和品种选育有着一定的相关性，而猪场呼吸道疾病的控制对高效生产举足轻重.因此，在梅花猪品种资源保护和开发利用的历程中，更需要科学、合理的实施疫苗免疫，同时也考虑结合整批断奶和部分清群控制技术进行猪群的呼吸道疾病控制.

5 结论

本研究中，猪支原体肺炎疫苗免疫后，大部分梅花猪在35日龄时抗体达到最低值，而母源抗体越高对疫苗免疫影响越大.