非小细胞肺癌中EML4-ALK融合基因的检测及临床意义

邓婉芳　罗承东　邢世江　黄丽云　曾维斌　李新　许家健

【摘要】 目的：为了对非小细胞肺癌的治疗提供参考依据，分析ALK融合基因的检测及临床意义。方法：根据随机原则的相关要求从2015年1月-2018年6月在笔者所在医院治疗的非小细胞肺癌患者中抽取60例作为研究对象，所有患者均通过二代测序技术（NGS）检测病理标本中的EML4-ALK融合基因，探讨EML4-ALK融合基因表达与各病理特征及临床指标的关系。结果：研究数据显示，60例患者中EML4-ALK融合基因阳性表达率为13.33%（8/60），而且阳性表达率在病理组织类型、既往吸烟史及肿瘤分化程度间比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：在非小细胞肺癌患者中EML4-ALK融合基因存在过度表达的情况，这与肿瘤的发生、发展密切相关，临床应重视对其检测。

【关键词】 非小细胞肺癌; EML4-ALK融合基因; 肿瘤

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.11.027 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2019）11-00-03

Detection and Clinical Significance of ALK Fusion Gene in Non-small Cell Lung Cancer/DENG Wanfang，LUO Chengdong，XING Shijiang，et al.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（11）：-65

【Abstract】 Objective：To provide reference for the treatment of non-small cell lung cancer，and to analyze the detection and clinical significance of EML4-ALK fusion gene.Method：According to the relevant requirements of random principle，60 patients with non-small cell lung cancer treated in our hospital from January 2015 to June 2018 were selected as the research subjects.All patients were detected ALK fusion gene in pathological specimens by second generation sequencing（NGS），and the relationship between ALK fusion gene expression and pathological characteristics and clinical indicators was discussed.Result：The data showed that the positive expression rate of ALK fusion gene was 13.33%（8/60） in 60 patients，and there were significant differences in histopathological type，smoking history and tumor differentiation（P<0.05）.Conclusion：Overexpression of ALK fusion gene exists in NSCLC patients，which is closely related to the occurrence and development of tumors.Clinical detection of ALK fusion gene shall be emphasized.

【Key words】 Non-small cell lung cancer; ALK fusion gene; Tumor

First-authors address：Zhongshan Xiaolan Peoples Hospital，Zhongshan 528415，China

近年来，肺癌在我国的发病率有明显增加的趋势，对人类健康和生命安全造成了严重的威胁，肺癌在男性癌症患者中发病率最高，在女性癌症患者中发病率位居第二。究其原因，可能是由于男性肺癌患者吸烟、酗酒等不良生活习惯较多，而女性较少，因此男性患病的概率更大。相比西方国家，我国居民的肺癌发病率和死亡率相对偏高，且正在呈逐渐上升状态。根据相关统计发现，在2018年我国共有23万人发生了肺癌，而造成肺癌发生的原因，临床上尚无最终定论，但根据学者和专家的深入研究分析，发现肺癌的发生机制与多种因素有关，包括遗传、环境、不良生活习惯和饮食习惯，如吸烟、酗酒等。肺癌主要分为非小细胞癌和小细胞癌两大类，肺癌患者中有一半以上的属于非小细胞肺癌。有报道显示，70%左右的非小细胞肺癌患者确诊时已属于中晚期，常规的放化疗虽然能够取得一定的疗效，但是预后并不令人满意[1]，这样的治疗方法不仅需要承受巨大的痛苦和一系列化疗不良反应，其家庭也承受着巨大的经济压力和心理负担，患者因此会出现不良心理情绪，进而影响治疗。因此，國内外的相关专家学者们十分重视对肺癌的治疗和诊断满意提升肺癌非小细胞癌患者的生存质量，降低死亡率。在近些年发现，肺癌患者中不仅具有EGFR、KRAS、BRAF等常见的肿瘤驱动突变基因，同时还发现存在间变型淋巴瘤激酶ALK等基因融合的情况。伴随临床对肿瘤研究的深入，副反应轻、特异性高的分子靶向治疗越来越受到关注[2]。国外报道发现，肿瘤的发生和发展和某一个或者某一部分活化癌基因即驱动基因密切相关，不同肿瘤间的驱动基因不尽相同，其中在非小细胞肺癌中间变淋巴瘤激酶（ALK）比较常见[3-4]。为了更好地指导临床对非小细胞肺癌的治疗，笔者所在医院随机从2015年1月-2018年6月治疗的非小细胞肺癌患者中抽取60例作为研究对象，并通过二代测序技术（NGS）检测病理标本中的EML4-ALK融合基因，以此来探讨EML4-ALK融合基因表达和各病理特征及临床指标间的关系，取得一定的研究结果，现将结果总结报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

根据随机原则的相关要求从2015年1月-2018年6月在笔者所在医院治疗的非小细胞肺癌患者中抽取60例作为研究对象。入组患者均有明确的病理诊断结果且影像资料明确。详细记录入组患者的临床资料，包括年龄、性别、既往吸烟史、是否出现淋巴结转移、病理组织类型及临床分期等。其中病理组织分类以世界卫生组织最新拟定的肿瘤组织学分类标准为准;临床分期参考最新版的《肿瘤学》中拟定的癌症TNM分期标准。纳入标准：（1）符合非小细胞肺癌的诊断标准[5];（2）临床资料完整。排除标准：（1）肝肾功能严重异常;（2）精神状态异常。

1.2 方法

使用Illumina 公司的NextSeq500，通过二代测序技术（NGS）检测病理标本中的ALK融合基因。

1.3 统计学处理

运用SPSS 19.0的统计学软件处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

60例患者中检出EML4-ALK融合基因阳性共8例，陽性表达率为13.33%。EML4-ALK融合基因与临床病理参数的统计分析提示：EML4-ALK融合基因在不同病理组织类型、既往吸烟史及肿瘤分化程度间差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

3 讨论

肺癌的发生和发展受到多种因素的影响，是一个十分复杂的过程。其中基因和环境是造成肺癌发生的主要原因[6-7]。除此之外，遗传因素、不良饮食习惯和生活习惯也在潜移默化的增加了肺癌的发生率[8]。肺癌分为两大类，包括非小细胞癌和小细胞癌，根据相关数据统计，肺癌患者中有80%的患者为非小细胞癌，临床上十分重视对非小细胞肺癌的相关诊断和治疗[9]。近年来，肺癌在我国的发病率有日益增加的趋势，而且就诊时多已属于中晚期，传统的化疗方案治疗效果并不令人满意[10]。目前，临床上主要通过手术、化疗、放疗的方式治疗肺癌[11]。但是随着各种专家学者们对肺癌的发病机制和分子生物学的不断研究，人们逐渐发现采用融合基因的靶向药因具有较高的特异性和较低的不良反应的优势，因此受到医学界的重视。在临床中，发现克唑替尼对于存在ALK、ROSI融合基因的肺癌患者具有较好的治疗效果，不仅如此，临床上逐步展开了以小分子酪氨酸酶抑制剂为代表的靶向药的实验，靶向药的出现对于非小细胞癌的治疗有着十分重要的意义[12-13]。所以，检测肺癌患者的融合基因，有助于提升肺癌患者的生存率，降低死亡率。

ALK是一种跨膜受体的酪氨酸激酶，属于胰岛素受体家族。与ALK发生融合的主要有棘皮动物微管相关蛋白，EML4结构中的N末端碱基区在肿瘤的发生过程中有着重要的影响。由于2号染色体短臂发生的到位，造成了EML4与ALK激酶区域的融合，因此造成EML4和ALK的融合。EML4融合之后能够驱动EML4-ALK转录活化因子，进而增加融合蛋白的表达，活化后的ALK造成细胞转向恶化。目前临床上一经发现了超过10种的融合方式，其中最常见的主要包括V1和V3变体。ALK融合基因是近年来新发现的驱动基因，其除了对ALK有特异性靶向抑制作用外，还对C-MET和ROS1等信号通路有抑制作用。本次研究显示60例患者中ALK融合基因阳性表达率为13.33%，而且阳性表达率在病理组织类型、既往吸烟史及肿瘤分化程度间比较差异有统计学意义（P<0.05），这和多数临床报道相一致[14]。国内外大量研究发现，EML4-ALK融合基因是NSCLC的一个潜在治疗靶点，是在2007年由SODA等首次从NSCLC肿瘤组织中扩增出的，变异ALK基因和伴侣基因EML4融合，激发ALK的强表达，引起细胞过度增殖，这也提示临床明确ALK基因和伴侣基因是否融合对指导患者个体化治疗具有重要参考价值[15]。驱动基因的编码蛋白和肿瘤细胞的生长、浸润及转移密切相关，有报道指出，如果灭活驱动基因则肿瘤细胞凋亡率明显增加。而且伴随非小细胞肺癌发生率的增加，临床对驱动基因的研究越来越多，与此相关的靶向药物也在临床得到推广和普及[16]。ALK与伴侣基因EML4融合阳性和细胞增殖关系密切，能够明显促进肿瘤细胞的恶性增殖过程，是目前得到公认的肺癌常见诱导基因，在NSCLC患者中具有较高的阳性表达率。作为一种新型的检测技术，NGS能够对相应的突变区域进行同时的高深度测序，通过生物学信息，对融合变异类型进行最终的确认，并不断地发现新的融合分子类型，以便于临床上治疗非小细胞肺癌时能够选择最佳的分子靶向药物进行治疗，且对容易耐受的药物进行规避，NGS研究结果发现可用于临床检测非小细胞癌，有助于非小细胞肺癌患者的早期诊断和治疗，促进患者早日康复，具有十分重要的临床意义和价值。

总之，在非小细胞肺癌患者中ALK融合基因存在过度表达的情况，这与肿瘤的发生、发展密切相关，临床应重视对其检测。

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