德阳地区丙型肝炎患者基因型调查分析

王秀 徐志红 文强 曹桂群

（德阳市人民医院生殖遗传科 四川 德阳 618000）

丙型肝炎病毒(HCV)感染是导致慢性肝脏疾病的的主要原因之一，全球HCV的感染率约为2.8%，约1.85亿人感染HCV，每年因HCV感染导致的死亡病例约35万[1-3]。由于丙型肝炎病毒复制所依赖的聚合酶缺乏校对功能，HCV 基因组序列容易发生变异，呈现高度的异质性。根据HCV 基因组核苷酸序列的差异，可将HCV 分为6 种基因型大约80 余种亚型[4-5]。不同HCV基因型感染者的临床表现、肝病严重程度及慢性化病程进展均有差异，抗病毒治疗的效果也不同，基因型检测可为HCV患者个体化抗病毒治疗方案提供依据[6]。为了解德阳地区丙型肝炎患者HCV基因型分布情况，对471例丙肝患者HCV基因型检测结果及与HCV病毒载量相关性进行统计分析，现报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

收集2013年1月－2016年12月在德阳市人民医院门诊及住院部就诊的，471例检测HCV～RNA水平＞1.0×104的IU/ml的同时进行HCV基因型检测的丙肝患者为研究对象。其中男226例，女245例；年龄范围为20岁至78岁。丙肝诊断参照2004年中华医学会《丙型肝炎防治指南》诊断标准[7],患者此次就诊前均未进行过抗病毒治疗。

1.2 样本采集和处理

空腹静脉采血3ml，3000r/min离心10min；分离血清立即检测或置于1.5ml。

经高温高压灭菌处理的EP管内，放置于～20%冰箱保存1周内检测。

1.2 主要仪器和试剂:

丙肝病毒核酸定量检测试剂盒购自凯杰生物（深圳）有限公司；HCV 基因分型检测试剂盒购自泰普生物有限公司，均采用罗氏LightCycler480 II实时荧光定量PCR仪进行检测，操作严格按照试剂说明书进行。

1.3 检测方法

血清HCV-RNA定量检测：样本核酸提取纯化采用二氧化硅吸附分类法，采用RT-PCR方法结合荧光探针扩增检测技术，对血清标本进行HCV-RNA定量检测。

HCV 基因分型：采用RT～PCR方法结合荧光探针扩增检测技术，检测HCV5种基因型（1b、2a、3a、3b、6a）。

1.4 统计学方法

数据采用SPSS20.0统计软件进行统计学分析，计数资料采用率（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（±s）表示，进行t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1 德阳地区丙型肝炎患者基因型分布情况：471例丙肝患者共检出7种基因型，1b型检出率高占92.36%（435/471）、其余依次为3b型占3.40%（16/471）、6a型占2.33%（11/471）、2a型占0.85%（4/471）、3a型占0.64%（3/471）、检出两例混合型（2a/3a、2a/3a各1例）各占0.%（1/471）；见表1。

表1 德阳地区丙型肝炎患者基因型构成情况

2.2 丙肝病毒基因型与病毒载量的相关性

由于1b 型占92.36%，为本地区主要基因型，因此采取对1b 型组和非1b 型组之间HCV～RNA载量进行比较，结果1b 类型的HCV～RNA载量平均值为6.03±1.26（log10 拷贝/ml）， 高于非1b 类型的平均值5.43±1.42（log10 拷贝/ml），t=2.718，P＜0.05。两者病毒载量差异有统计学意义，1b 型患者HCV～RNA 载量高于非1b 型患者；见表2。

表2 1b型与非1b型血清病毒载量的比较

3.讨论

本研究依据Simmonds命名法将HCV遗传变异性分为6种基因型，每种基因型又分为若干亚型[8]。HCV基因型呈现地域性分布，不同地区HCV基因型构成存在一定的差异[9]。本调查结果显示：德阳地区HCV基因型以1b型为主占比高（93.26%），其次是3b型占3.40%、6a型占2.33%、2a型少占0.85%、存在少量混合感染2a型合并3a、3b各1例。与林江[10]报道川南地区1b、3b 和6a为优势基因型的现象一致，但构成比1b型高达93.26%占绝对优势，高于全国平均水平；与毗邻乐山地区以1b和2a为主不同[11]；文献[12]报道的在西部和南部地区，基因1型比例低于全国平均比例，西部基因2型和3型比例高于全国平均比例，混合基因型少见(约2.1%)，多为基因1型混合2型，与德阳地区存在较显著差异。综上，德阳地区HCV基因分布表现出1b型优势显著，亚型种类丰富的突出特点。

HCV基因分型对丙肝个体化治疗至关重要，达到持续病毒学应答(SVR)是治疗HCV 感染的目的,也是最重要的治疗目标。由于HCV不同基因型具有迥异的致病性和药物敏感性，不同基因型感染的患者的病毒学应答率差距明显，如2、3及6型患者较易获得持续病毒学应答（SVR），而1和4型应答较差，属于难治性丙型肝炎，其利巴韦林的用药剂量和用药时间有显著差别，选择的抗病毒治疗药物和疗程也应不同[13]。由于德阳地区1b类型患者比例高，1b型导致的丙型肝炎在临床上为难治类型，因此研究1b型与非1b型之间的病毒载量差异,通过独立样本t检验，比较1b型与非1b型患者血清HCV-RNA 载量，结果显示1b型患者HCV-RNA载量高于非1b型患者,t=2.718，P＜0.05，两者病毒载量差异有统计学意义。从患者血清病毒载量方面反映德阳地区1b类型的丙型肝炎病人的病情要比非1b 类型的严重，与临床上1b型为难治型和易形成慢性肝炎的临床特点相符[14]。

本次研究，通过了解德阳地区丙型肝炎患者HCV基因型分布情况和分析丙肝病毒基因型与病毒载量的相关性，显示德阳地区丙肝防治形势依然严峻，同时为德阳地区丙型肝炎患者个体化抗病毒治疗方案提供依据。