提高肉羊同期发情及胚胎移植效果的技术研究

刘学峰 朱贵 李信涛 佟桂芝 李鲁蒙 海龙 王伟霞 郭立宏

摘要：针对我国肉羊良种化和繁殖技术水平低的现状，采用现代繁殖生物技术是提高优质肉用种羊利用率、缩短生产周期、加速良种肉羊扩繁、促进肉羊产业化发展的必经之路。把肉羊胚胎移植过程中的同期发情、超数排卵、腹腔镜输精等关键技术进行了创新，并与传统方法效果进行了对比分析，提高了良种供体母羊的利用率，降低了胚胎移植技术的成本，突破了肉羊胚胎移植成功率低的技术瓶颈，促进了肉羊胚胎移植产业化。

关键词：肉羊;同期发情;超数排卵;腹腔镜输精

中图分类号：S826.3     文献标识码：A

文章编号：2095-9737（2019）04-0006-02

近年来，由于炒种热的降温和胚胎移植技术水平的提高，肉羊胚胎移植收费标准趋于理性化，胚胎移植技术正在向产业化挺进。过去每获得1只胚胎移植断奶羔羊大致需支出人民币4000元左右，而现在只需1000元左右，同市场上纯种肉羊每只5000～8000元价格比，有很大的经济优势。再加上一只供体母羊一次超排可获5只羔羊，一个繁殖季节超排4次以上，可获羔羊20只以上，是肉用种羊原种迅速扩繁的最有效途径。特别是冷冻胚胎移植，解决了鲜胚移植半径小和保存时间短的难题。通过胚胎移植集成技术，即为良种扩繁与新品种（品系）选育奠定了基础，企业也收到了很好的经济效益，同时也创造了极大的社会效益。因此，肉羊胚胎移植应用于生产，在我国进行产业化发展前景广阔。

1 材料

1.1 供体羊

选取2～3岁繁殖性能正常的经产纯种杜泊羊母羊作为供体羊，统一饲养管理，

1.2 药品

注射用血促性素（孕马血清，PMSG）购自宁波第二激素厂;氯前列烯醇购自上海市计划生育科学研究所;阴道海绵栓、胚胎保存液、O-FSH 超数排卵药、冲胚液全部为新西兰进口。

1.3 器械

主要器械有外科手术器械、手术保定架、体视显微镜、腹腔镜、冲卵管、检卵针、移植管等。

2 方法

2.1 诱导同期发情技术

在非繁殖季节内母羊处于乏情期，不表现明显的发情症状，受体母羊同期发情效果差， 直接影响胚胎移植效果。采用预饲养技术+VE+CIDR（阴道激素缓释装置）+PMSG（孕马血清）法，对乏情期受体母羊进行诱导同期发情。

2.2 超数排卵技术

根据不同季节、日照时间和供体母羊营养状况，对不同品种供体母羊采用预饲养技术+VE+CIDR+ FSH（垂体促卵泡素）+LH（垂体促黄体生成素）法，采用FSH四天递减注射超排方案，供体母羊排卵数、回收胚胎数和可用胚胎数（10.4±2.1）均高于常规的三天等量注射法可用胚胎数（4.0±5.2），超排效果显著。

2.3 供体羊腹腔镜输精

取栓的第2天对供体羊进行试情， 对发情母羊于发情当天分别进行子宫颈输精及腹腔镜输精。

2.4 冲胚

以开始配种日为第0天，于配种后的第6天或第7天通过手术法子宫角冲出胚胎。冲胚液和短期保存液均为加拿大进口产品，手术前置于38℃的水浴中预热。在一侧子宫角基部用钝钳刺透子宫壁，然后将8#～10#冲卵管从此孔导入子宫角大弯处，给冲卵管气囊充气（充气量2～5 mL），拔出冲卵管内芯，用20 mL 注射器与针头连接，并由此向子宫腔内注入冲卵液。注入沖卵液的方法为：先注入冲卵液20～25 mL，对超排反应好的供体可再重复冲一次，然后注入空气5～10 mL，此方法可保证胚胎的有效回收。用Φ9 cm培养皿接收冲卵液。最后用手指轻轻压挤子宫角，让冲卵液尽量回收完全，然后气囊放气，用同样的方法冲另一侧子宫角。每侧子宫角约需40 mL冲卵液。

冲胚完毕后，用25～30℃的生理盐水将子宫及卵巢冲洗干净，然后送回腹腔，将子宫复位，并向腹腔倒入250 mL消毒液。分别对腹膜、肌肉和皮肤进行缝合。供体母羊创口采用两层缝合法。即腹膜与肌肉进行缝合，皮肤进行结节缝合。针脚间距1 cm。在肌肉与皮肤间撒适量青霉素粉，以防创口感染。术后注射青霉素80万IU，链霉素100万IU。腹腔镜微创术回收肉羊体内胚胎技术利用腹腔镜对肉羊供体母羊实施微创手术，借助自制的冲胚针和回卵管，对供体母羊进行非开放性腹腔内冲胚，从而有效回收肉羊体内胚胎技术。腹腔镜微创术回收肉羊体内胚胎技术利用腹腔镜对肉羊供体母羊实施微创手术，借助自制的冲胚针和回卵管，对供体母羊进行非开放性腹腔内冲胚，从而有效回收肉羊体内胚胎技术。

2.5 数据分析

试验数据采用 SPSS 19.0 统计软件进行统计分析和显著性检验。

3 结果与分析

3.1 诱导同期发情技术

小尾寒羊非繁殖季节采用生殖激素进行诱导肉羊发情，在不同季节母羊发情率（97.0%、77.5%、87.5%）之间及受胎率（97.44%、87.10%、91.43%）之间存在显著差异（P<0.05），秋季效果最好，春季次之，夏季最次（详见表1）。

3.2 不同超排方案的效果对比

采用FSH四天递减注射超排方案，供体母羊排卵数、回收胚胎数和可用胚胎数（10.4±2.1）均显著高于常规的三天等量注射法可用胚胎数（4.0±5.2），超排效果显著（P<0.05），见表3。

4 讨论与结论

4.1 诱导同期发情、两年三产高频繁殖技术

通过诱导同期发情技术、胚胎移植及羔羊早期断奶技术，实现一年两产或两年三产，一年两产可使母羊的繁殖率提高90%～100%，生产效益提高40%～50%，其核心是母羊发情调控、胚胎移植、羔羊早期断奶和早期妊娠检查。两年三产体系，比一年两产体系增加40%，其核心是母羊的多胎处理、发情调控和羔羊早期断奶，强化育肥。小尾寒羊非繁殖季节采用生殖激素进行诱导肉羊发情，在不同季节母羊发情率（97.0%、77.5%、87.5%）之间及受胎率（97.44%、87.10%、91.43%）之间存在显著差异（P<0.05），秋季效果最好，春季次之，夏季最次。

在非繁殖季节内母羊处于乏情期，不表现明显的发情症状，受体母羊同期发情效果差，直接影响胚胎移植效果。采用预饲养技术+VE+CIDR+PMSG法，对乏情期受体母羊进行诱导同期发情。

4.2 利用腹腔镜定时输精技术

采用在肉羊供体母羊撤栓后48 h，利用腹腔镜子宫内一次定时输精法，不仅提高了胚胎受精率、而且降低了胚胎的退化率。对于超排肉羊来说，明显好于常规子宫颈口人工授精和自然交配效果;在超排肉羊中自然交配或子宫颈输精时肉羊子宫颈的卷绕结构使精液很难精确到位，常出现不受精的现象。另外，同期发情和超数排卵处理本身对精子通过宫颈运输也有一定干扰作用，这对受精率和可移植胚胎的数量有一定影响。项目组改变了传统的子宫颈口输精方法，采用腹腔内窥镜输精技术，将精液直接输到两侧子宫角前端，突破了超排羊人工授精胚胎受精率低和优质胚胎率低的技术难题。

4.3 超数排卵技术

根据不同季节、日照时间和供体母羊营养状况，对不同品种供体母羊采用预饲养技术+VE+CIDR+ FSH+ LH，采用FSH四天递减注射超排方案，供体母羊排卵数、回收胚胎数和可用胚胎数（10.4±2.1）均高于常规的三天等量注射法可用胚胎数（4.0±5.2），超排效果显著。重复超排将比一次超排获得胚胎更多，根据不同供体母羊上一次超排效果，调整超排方法，制定个体羊超排方案，可以获得供体羊最好的超排效果。