黄健中 陈冬萍 石艳 肖建民
在脂质代谢中,载脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)作为配体与LDL受体(ApoE受体)结合,可影响血脂水平,尤其是LDL-C的重要遗传因素之一[1]。但不同人群和个体,在控制血脂水平方面,存在着明显的差异[2]。这种差异可能与不同个体间药物受体基因多态性、药物转运蛋白基因多态性、药物代谢酶基因多态性有关[3]。近年来,关于ApoE不同基因亚型对调脂药物相关性研究有很多,特别针对他汀类药物[4]。本研究拟观察不同ApoE基因型高脂血症患者,在应用阿托伐他汀前后的血脂水平的变化程度,以探讨ApoE基因多态性对阿托伐他汀调脂作用的影响,为未来个体化治疗方案建立供一定的理论依据。
入选标准:入选对象选自2017年3月—2018年3月在东莞市第五人民医院心血管内科门诊或住院患者301例,符合《中国成人血脂异常防治指南(2016年修订版)》[5]中的诊断标准,并符合以下条件之一:空腹血清检查总胆固醇(TC)≥5.18 mmol/L或低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)≥3.37 mmol/L。
(1)近3月内服用过降脂药物;(2)家族性高胆固醇血症者或药物引起的高脂血症者;(3)存在内分泌相关疾病;(4)严重的肝、肾功能损害;(5)严重高血压不能控制和/或未控制的糖尿病;(6)妊娠或准备怀孕、哺乳期妇女;(7)过敏体质及急性炎症期患者;(8)有严重烟、酒嗜好者。
所有研究对象采集个人信息如:年龄、性别、体质量、身高、家庭住址、联系方式等,对患者病史资料进行问询如:高血压病史、冠心病病史、糖尿病病史、吸烟史等资料。
首次抽采外周血后开始服用阿托伐他汀钙片,每次20 mg,每晚1次,饭后服。治疗期间维持低脂饮食。
所有研究对象均在空腹8 h后次日早晨抽采外周静脉血6 mL。3 mL立即送化验室应用全自动生化分析仪测定总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)低密度脂蛋白-胆固醇(Low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C),并于第12周末空腹8 h抽采外周静脉血3 mL复查上述指标。3 mL置于乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA)管中,送中心实验室于低温冰箱中保存,3天内分离血清后用基因分型芯片法测定ApoE基因并分型。主要仪器及试剂:ApoE基因分型芯片法检测试剂盒(珠海赛乐奇生物);聚合酶链锁反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增仪(ABI2720);基因芯片阅读仪(Sinochips-PGA,珠海赛乐奇生物技术)。根据ApoE基因表型分型的结果进行分组。
基因芯片可检测出6种ApoE基因表型,本研究依据各基因表型的碱基对应位点将各基因表型分三组做比较,即为ε2(E2/2+E2/3)、ε3(E2/4+E3/3)和ε4(E3/4+E4/4)。
采用SPSS 23.0软件进行统计分析,所有计量资料采用(s)表示,两组间计量资料比较采用t检验,三组间计量资料采用ANVOA法分析比较,计数资料采用χ2检验,以P<0.05表示差异具有统计学意义。
301名高脂血症患者中ApoE基因型分布如下:E2/2型2例,E2/3型50例,E3/3型205例,E2/4型8例,E3/4型34例,E4/4型2例。各基因表型基因频率分布如下:E2/2型为0.66%,E2/3型为16.61%,E3/3型为68.11%,E2/4型为2.66%,E3/4型为11.30%,E4/4型为0.66%,见表1。通过计算,ApoE各等位基因ε2、ε3、ε4样本数分别是52、213、36;等位基因频率分别是:17.3%、70.8%、11.9%,见表2。ApoE基因表型E3/3占总数的68.11%,等位基因ε3比例为70.8%,分别为最常见的基因表型及等位基因型。
表1 ApoE基因表型分布
表2 ApoE等位基因分布
表3 各基因组合临床资料比较
表4 各组治疗前后血脂水平比较(mmol/L,
表4 各组治疗前后血脂水平比较(mmol/L,
组别 TC TG LDL-C HDL-C 0周 12周 0周 12周 0周 12周 0周 12周ε2(52)ε3(213)ε4(36)F值P值5.52±0.38 5.21±0.43 5.37±0.35 3.08 0.214 9 4.03±0.21 5.12±0.25 4.29±0.23 529.76 0.000 0 2.26±0.17 2.42±0.19 2.33±0.19 0.99 0.610 3 1.97±0.14 2.11±0.13 2.08±0.14 303.11 0.000 0 3.20±0.22 4.22±0.25 3.57±0.23 1.48 0.476 0 2.32±0.17 3.95±0.21 2.65±0.18 33.40 0.000 0 1.59±0.11 1.55±0.10 1.48±0.10 0.79 0.672 4 1.91±0.13 1.65±0.11 1.68±0.12 107.62 0.000 0
入选的高胆固醇血症患者共301例,其中男性136例,女性165例,平均年龄(65.31±12.56)岁。各基因组合间的年龄、性别、BMI、高血压、糖尿病等,差异均无统计学意义(P>0.05),见表3。
所有研究对象治疗前血脂水平差异均无意义(P>0.05)。经12周阿托伐他汀治疗后:(1)TC:ε2组优于ε3组、ε4组优于ε3组,数据对比差异存在统计学意义(P<0.05),ε2组与ε4组间对比差异无统计学意义(P>0.05);(2)LDL-C:ε2组优于ε3组、ε4组优于ε3组,数据对比差异存在统计学意义(P<0.05),ε2组与ε4组间对比差异无统计学意义(P>0.05);(3)HDL-C:ε2组优于ε3组、ε2组优于ε4组,数据对比差异存在统计学意义(P<0.05),ε3组与ε4组对比差异无统计学差异(P>0.05);(4)TG治疗后各组间数据比较均无统计学意义(P>0.05)。见表4。
高脂血症为临床常见疾病,任意原因引起的胆固醇含量增高或甘油三酯含量增高,都称之为高脂血症[6]。高脂血症可发展为动脉粥样硬化,动脉粥样硬化可引发心脑血管疾病。载脂蛋白E(ApoE)为一种主要在肝脏与大脑中合成的富含精氨酸的碱性蛋白,其主要参与人体脂质代谢、神经元重塑/修复、神经元突触生长[7-8]。其在机体内分布较广,外周血浆中ApoE由肝脏、肾脏、骨骼、卵巢、巨噬细胞合成,中枢神经系统中则由星形胶质细胞合成[9]。ApoE基因多态性与心脑血管疾病的可能发病机制为ε4基因携带组增加了脑淀粉样病理改变,继而引发心脑血管疾病[10]。
本研究结果提示ApoE3/3及ε3为最常见的基因表型和等位基因,这与目前其他研究显示的基因频率是相符合的[11]。本研究结果还发现,治疗前各基因型组合间血脂水平差异无统计学意义。经12周阿托伐他汀治疗后,ε3组TC均值水平高于其他2组;ε3组LDL-C均值水平同样高于ε2组和ε4组;ε2组HDL-C均值水平高于其余2组。提示治疗后携带ε3等位基因的患者血脂水平高于非携带ε3等位基因的患者,尤其表现在TC和LDL-C的血脂水平上。并通过对治疗前后血脂变化程度的观察中,我们可以发现治疗前后TC、HDL-C、LDL-C的变化程度存在差异,ε2在降低TC、LDL-C的水平以及升高HDL-C方面,均优于ε3组。Gar cí a-o tí n AL等[12]发现,携带ε2等位基因的欧洲人群,服用阿托伐他汀后LDL-C下降较明显,提示ApoE基因ε2与阿托伐他汀降脂效果有关。
综上所述,他汀具有良好的调脂作用,其效果在一定程度上受到ApoE基因多态性的影响。若能明确这些基因与药物疗效差异的关联性,对今后临床用药将具有指导意义,更好地为动脉粥样硬化患者,尤其心脑血管疾病患者,起到早期针对性用药,取得更好地疾病预防及治疗作用。