表没食子儿茶素没食子酸酯对病毒性心肌炎小鼠的心肌保护作用

曾 闵, 陈 智, 易世江, 王野峰, 王 勋

(1. 湖南省儿童医院 心血管内科, 湖南 长沙, 410007; 2. 桂林医学院, 广西 桂林, 541001)

病毒性心肌炎是主要由嗜心肌性柯萨奇病毒感染引起的心脏病，其主要的病理表现为心肌的变性、坏死及炎性细胞的浸润。该疾病致死率较高，临床可表现为严重的心律失常、心源性休克甚至猝死[1]。目前该病的发病机制尚不明确，可能与氧化损伤、免疫损伤以及自噬有关[2-3]。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶茶多酚的主要活性成分，研究[4]显示其具有抗病毒、抗肿瘤、抗炎及抗氧化等重要的作用。本研究探讨EGCG对病毒性心肌炎是否具有保护作用，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

BALA/C雄性小鼠(SPF级)购自桂林医学院实验动物中心，柯萨奇病毒V3(Nancy 株)购自桂林医学院, EGCG(Sigma), 紫外分光光度仪(产地: 上海; 型号: ZF-7), 肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)试剂盒购自南京建成生物研究所。

1.2 实验方法

选取45只雄性BALA/C小鼠, 6周龄，体质量(21.00±1.80) g, 随机分为正常组、对照组及EGCG组，每组15只。对照组、EGCG组小鼠腹部消毒后腹腔注射0.1 mL柯萨奇病毒B3(CVB3)病毒液。接种成功后, EGCG组予以EGCG 100 mg/(kg·d)灌胃处理，对照组予以同体积的生理盐水灌胃。正常组小鼠腹腔注射同等体积生理盐水。给药持续10 d后摘除眼球并取血，检测血清cTnT、CK-MB的水平。处死动物，取出小鼠心脏，吸水滤纸吸干水后，石蜡包埋，HE染色观察心肌细胞及周围组织变化情况。

1.3 心肌病理观察及评分

将包埋的石蜡心脏组织标本切片HE染色后，由2位有经验的医生阅片，并依据参考文献[1, 5], 根据各心脏切片细胞浸润及心肌坏死百分比评估严重程度，其中0为无病变, +为<所累及心肌的25%;为25%～<50%;为50%～75%;为>75%。

1.4 ELISA检测各组大鼠血清中CK-MB、cTnT的水平

眼球摘除取血后，置于血清管中，室温下静置4 h后, 3 000转/min离心15 min, 吸取上清液，置于-80 ℃冰箱保存。cTnT、CK-MB活性的检测按试剂说明书逐步操作。

1.5 统计学处理

采用SPSS 18.0进行统计处理，计量资料以均数±标准差表示，两组间比较采用t检验，多组间的比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 一般情况观察

正常组小鼠饮食及生活习性无改变，精神良好; 实验小鼠接种CVB3的1 d后出现萎靡不振、拒食、脱毛、毛色灰暗的现象。1周时，对照组小鼠死亡7只，病死率46.6%, EGCG组死亡5只，病死率33.3%, 而正常组无死亡。

2.2 各组小鼠心肌组织切片病理情况

正常组心肌细胞胞浆均匀，细胞形态好，排列规则，未见周围炎性细胞浸润; 实验组可见心肌细胞死亡，大量炎性炎性细胞浸润，细胞排列紊乱，细胞核消失，间质可见纤维组织增生。EGCG组心肌细胞坏死数量明显减少，仅有少量炎性细胞浸润，较对照组明显好转。见表1。

表1 3组小鼠心肌病理评分比较 分

与正常组比较, *P<0.05; 与对照组比较, #P<0.05。

2.3 各组小鼠血清中CK-MB、cTnT水平的比较

正常组中血清CK-MB的水平显著低于对照组及EGCG组(P<0.01), EGCG组中CK-MB的活性水平较对照组的水平显著降低(P<0.05); cTnT在正常组中几乎检测不到，而对照组、EGCG组cTnT的表达显著增高(P<0.01), 但EGCG组cTnT的活性水平显著低于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 小鼠血清中CK-MB、cTnT水平比较

cTnT: 心肌肌钙蛋白T; CK-MB: 肌酸激酶同工酶。

与正常组比较, **P<0.01; 与对照组比较, #P<0.05。

3 讨 论

儿茶素是绿茶中主要的多酚类化合物，包括表没食子儿茶素3-没食子酸酯、表没食子儿茶素、表没食子儿茶素3-没食子酸酯和表没食子酸酯、没食子儿茶素和没食子儿茶素没食子酸酯。EGCG是绿茶中最主要的儿茶素[4]。研究[5-7]显示，EGCG具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗菌的作用。进一步的研究[8-12]发现，EGCG还具有抗流感病毒、乙肝病毒、腺病毒及EB病毒等多种病毒的作用，其机制与抑制病毒的复制有关。本研究将CVB3接种于小鼠，成功建立病毒性心肌炎，分别用生理盐水或EGCG灌胃处理，发现与对照组相比, EGCG组小鼠的成活率显著更高，提示EGCG对柯萨奇病毒具有一定的抑制作用。

cTnT是诊断心肌损伤的一个敏感性指标[13]。有临床研究[14]显示, cTnT联合CK-MB用于诊断病毒性心肌炎具有较高的敏感度和特异度。有研究[15]显示, EGCG可通过抑制病毒复制而改善CVB3诱导的心肌炎。本研究发现，与正常组对比，对照组CK-MB、cTnT的活性水平明显升高，提示CVB3能够导致心肌损伤。EGCG组CK-MB、cTnT的活性水平均较对照组降低，提示EGCG对病毒性心肌炎亦具有一定的保护作用。

综上所述, EGCG对病毒性小鼠心肌炎具有一定的保护作用，并能降低血清cTnT、CK-MB的活性水平，这为EGCG在病毒性心肌炎治疗中的应用提供了理论基础。