内蒙地区罕见cis-AB01/ O01血清学与基因分型研究——附1例报告

王春海，王文梅，黄华亮

(1.内蒙古包钢医院输血科,内蒙古包头 014010；2.内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院重症医学科,内蒙古包头 014010)

ABO血型系统抗原的基因位于第9条染色体上，基因名为ABO,其DNA链长为19.5 kb，是被人类发现的第1个血型系统[1]。而ABO血型亚型是由ABO基因变异形成，A基因变异形成A亚型，B基因变异形成B亚型，O基因变异形成新的O等位基因，ABO亚型包括A3、Ax、Ael、Aw、Am、B3、Bx、Bel、Bw、cisAB、B(A)。通常情况下，AB型个体一条染色体携带A基因，另一条染色体携带B基因，称为反式AB型。但顺式AB型(cisAB型)是一种独特的ABO表型，A基因和B基因位于同一条染色体上遗传给子代[2]。这种特殊遗传方式常常造成ABO正反定型不符，降低了输血的有效性和安全性，因此，正确鉴定cisAB血型是保证安全输血的前提[3]。

现将本院1例cisAB血型患者的血型血清学与基因分析结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 患者，男，61岁，右髋骨疼痛，活动受限2年，拟行择期手术，既往有输血史，常规备血，Ortho AutoVuet全自动血型及配血分析系统鉴定结果：正定型AB，反定型A，正反定型不符，进一步作血型血清学检查，同时重新采集患者样本，外送江苏中济万泰生物医药有限公司诺贝尔奖研究院做ABO基因分型及测序(样本号W126)。

1.2仪器与试剂 Ortho AutoVuet全自动血型及配血分析仪、台湾贝索离心机、水浴箱； 抗-A、抗-B、RhD(IgM)血型定型试剂、筛选红细胞、抗-H试剂、抗-A1试剂，上海血液医药生物有限公司；ABO反定型，长春博德生物技术有限责任公司；抗A,B试剂 法国；ABO基因分型试剂盒：人类红细胞ABO血型基因分型试剂盒(荧光PCR)批号20180226，江苏中济万泰生物医药有限公司，以上所有试剂均在效期内使用。

1.3方法

1.3.1ABO血型血清学试验 ABO血型鉴定、抗-H测定、抗-AB、抗体筛选、唾液试验等血型血清学检测,均严格按照文献[4-5]操作。

1.3.2ABO基因分型及测序 由江苏中济万泰生物医药有限公司诺贝尔奖研究院鉴定。

2 结 果

2.1ABO血型结果 该例患者正定型AB型(B抗原表达强度较弱，呈混合视野),反定型为A型，正反定型不符，初判定为AB亚型产生了抗-B或B抗原减弱伴同种抗体；同时正定型与抗-A1为0、与抗-AB为++++、与抗-H为+++，反定型与B细胞为+，说明该抗体可能为抗-B抗体，结合病史，疑似cisAB型，需做基因检测进行确定。结果见表1。

表1 ABO血型血清学鉴定结果

注:mf为混合外观,0为无反应性

2.2抗体筛选试验 盐水试管法结果呈阴性，抗人球蛋白法结果呈阴性；反定型3个献血者B细胞均为+，3个献血者O细胞均为阴性。两个试验结合起来分析可以看出患者抗体并非ABO以外的同种抗体，而是不规则抗-B。

2.3唾液试验结果 结果显示为分泌型，唾液中含有A、H物质和弱分泌B物质。

2.4ABO基因分型结果 该例患者标本(W126)的荧光PCR分型，Type A出现阳性条判断为A,非A205;Type OT、Type O01出现阳性条判断为O01(见图1)。ABO基因分型结果为：A/O01。

注：蓝色框框为内参，红色框框为阳性条

图1基因分型结果

2.5ABO基因测序结果 该例患者标本(W126)的基因测序结果在外显子6的297A/A未有突变，261处缺失G，形成261前面连续出现套峰，这两点属于O01基因特征性序列。而在外显子7又出现467C>T、803G>C两处突变,符合cis-AB01型基因特征。依据测序结果推出该例标本的基因型为cisAB01/O01。ABO基因全测序结果见图2、3。

图2 ABO基因全测序结果

图3 基因突变点截图

2.6最终判定结果 综合血清学和基因检测可以确定为cis-AB，基因分型符合cis-AB01/O01。

3 讨 论

cisAB是一种极为罕见的亚型，在人群中出现的概率非常低，大约是1/580 000～1/170 000。有文献报告，一般在1 000 000例日本人中找到14例，比例为0.0014%，而在112 710例受检AB型中，比例为0.012%[6]。1965年YAMAGUCHI等[7]报道A2B3血型，该家族成员的A2和B3基因在同一染色体上。当一单倍型的A糖苷转移酶基因发生一点或多点突变时或者B糖苷转移酶基因发生一点或多点突变时，造成该基因编码的糖苷转移酶同时催化两种底物分别加到L-岩藻糖上形成A和B抗原，形成的AB型叫cisAB[8]，出现cisAB有2种可能：一是基因的不等交换，使得一条染色体上的A基因与另一条染色体上的B基因组成了新的cisAB基因，并且携带正常的遗传信息；另一种情况是A基因或B基因发生突变，使基因编码产物同时具有A和B抗原。1990年，ABO基因被克隆和测序后，cisAB血型的分子遗传模式逐步被人类研究并揭示。造成cisAB表现型的主要原因和A、B基因7号外显子的点突变有关[2]。

到目前为止，cisAB等位基因一共有8型，分别为01、02、03、04、05、06、07、08型，还有一种cisAB 01var型[9]。cisAB01主要特征是803G>C、467C>T两点突变[10]。该例患者在外显子6的297A/A未有突变，261处缺失G，形成261前面连续出现套峰，这两点属于O01基因特征性序列。而在外显子7又出现467C>T、803G>C两处突变,符合cis-AB01型基因特征[9]。外显子序列符合cisAB01/O01杂合特征，即cisAB01与O01杂合，基因分型及测序应为cis-AB01/O01。cisAB01/O01基因型占cisAB血型基因型总数的66.7%[1]。cisAB/O基因型，一条是单倍型AB型，另一条是单倍型O型，形成cisAB血型的血清学结果具有一定的特点。当cisAB基因与O基因杂合时，血清学常表现为A2B3：(1)cisAB细胞上A抗原虽然经常被认为是A2,但A抗原强度强于A2B,弱于A1B；(2)cisAB细胞几乎无例外地表达弱的B抗原性，类同B3表型；与免疫性A型血清反应较强，与自然发生的血清抗B弱凝集或不凝集；(3)cisAB细胞有很强的H抗原性，与O细胞反应强度相当，达到+++的强度；(4)cisAB人血清中总是有弱抗-B存在[5]。血型血清学试验中：正定型抗-A凝集(++++)，抗-A1不凝集(0)，这是A2抗原的表现；同时抗-B弱反应,并呈混合视野(mf)；反定型中有较弱的抗-B(+)，依据抗体筛选试验、反定型3个献血者B细胞和3个献血者O细胞结果判断，该抗体并非ABO以外的同种抗体，而是不规则抗-B，抗-H明显比正常B型增强,这是B3抗原的表现。该患者标本的血清学特征具有A2B3的特征[5]。

cisAB血清学特征A2B3必须与下列2种情况相区别，(1)与ABx或AxB区别[11]：ABx或AxB常常是因cisAB等位基因与另一正常A或B等位基因杂合时，有抗原剂量效应，而抗-H不增强或较弱，与抗-H反应凝集强度一般弱于O细胞与抗-H的反应程度[12-13]；(2)与获得性B区别：获得性B与疾病有关，只表现在A型红细胞上，在血型鉴定时，出现类似于AB型的反应格局。获得性B抗原的个体血液中只含有抗-B抗体，但不与获得性B细胞反应，获得性B抗原可能减弱A型抗原的抗原性，因此，获得性B消失后，红细胞A抗原性增强[5]。

由于各种因素的影响，根据血清学表现，cisAB血型很难被确定，因为弱抗B的存在会导致ABO正反定型不符，极易导致血型错判。在临床检测过程中往往表现为血型定型和交叉配血困难，输血时，配血不相合，可引起溶血性输血反应，对于该例患者，其血清中有抗-B抗体，故不能输注B型红细胞，以输注O型洗涤红细胞和AB型血浆为佳，或自体输血。考虑到该例患者输血适应症完全符合贮存式自体输血，与手术前3天采集自体血400 mL,术中进行回输，术后无不良反应。

据不完全统计，该例患者cis-AB01/O01亚型属内蒙地区首次报道。鉴于该患者因家庭原因未同意调查其遗传情况，故未做家系调查。

综上所述，依据cisAB的血清学反应格局并不能正确确定cisAB亚型，必须靠分子生物学技术(如ABO基因分型)才能区别，条件允许情况下可以做家系调查，只有准确无误地鉴定cisAB血型，才能做到安全输血，防治输血不良反应的发生。