基因多态性与卵巢癌患者化疗疗效及预后的关系

王瑛，于娟，陈鹏，张建好

郑州市第一人民医院1妇产科，2检验科，郑州 450000

3郑州大学第一附属医院介入科，郑州 450000

病程较长或者临床分期较晚的卵巢癌患者，其远期生存情况较差[1-2]。紫杉醇脂质体或紫杉醇注射液等药物可以通过促进肿瘤细胞的凋亡、增加肿瘤细胞的坏死程度等促进肿瘤的萎缩，并抑制远期转移的发生。基因水平的改变能够通过影响药物代谢的稳定性，从而干预肿瘤细胞对于药物的排泄等，进而影响化疗效果。Ephrin A型受体4（ephrin typeA receptor 4，EPHA4）基因多态性能够通过影响基因表达蛋白的空间结构、磷酸化修饰水平等，进而改变卵巢癌细胞内的紫杉醇等化疗药物的浓度，从而影响紫杉醇对卵巢癌患者的化疗效果[3]。本研究通过探讨EPHA4基因多态性与卵巢癌化疗效果及患者预后的关系，旨在为卵巢癌的临床治疗提供参考依据，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2015年2月至2016年2月郑州市第一人民医院收治的146例卵巢癌患者作为研究对象。纳入标准：①经组织病理学检查确诊；②TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期；③同意接受以紫杉醇为基础的联合化疗方案；④预计生存期＞3个月。排除标准：①合并其他原发性肿瘤；②接受过其他化疗，且化疗结束时间＜3个月；③合并心、肝、肾等重要脏器功能不全。患者的年龄为45～62岁，平均年龄为（55.43±9.84）岁；产次≥2次者38例，产次为1次者87例，产次为0次者21例；浆液性腺癌89例，子宫内膜样癌57例；病灶直径为1.00～2.95 cm，平均病灶直径为（1.84±0.70）cm。全部患者及家属均对本研究知情同意并签署知情同意书，且本研究获得医院医学伦理委员会的审核通过。

1.2 基因多态性的检测

采用第二代基因测序技术检测基因的多态性。采用30%丙烯酰胺溶液制备PAGE凝胶，将配好的PAGE凝胶溶液沿凹形玻璃平口处缓慢倒入至距平口7 mm处，倒入过程中避免气泡产生；吸取1 μl的溴酚蓝溶液，根据聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）产物分子量吸取适量的样品，调节电压至300 V，电泳90 min（电泳时间根据PCR产物分子量进行适度调整）。采用染色剂进行染色，提胶，显影，拍照。Biomek NX自动化工作站购自美国贝克曼库尔特公司。EPHA4引物序列：上游引物为 5′-TTTGGCTCTGACCATTCTGT-3′；下游引物为5′-GTCCTCACCTGAGGGACCCC-3′。

1.3 化疗方法

静脉滴注75 mg/m2的紫杉醇注射液，第1天。化疗过程中持续性给予水化、补液、保肝、解毒等对症治疗，并观察化疗的不良反应发生情况。每天保持液体的输入量在3000 ml以上，维持尿量在1500 ml以上；出现严重的不良反应时，应立即停止化疗。21天为1个疗程，总化疗周期为6个疗程。

1.4 评价标准及随访

根据世界卫生组织（WHO）实体瘤疗效评价标准[4]对患者的临床疗效进行评价：完全缓解（CR），病灶完全消失超过1个月；部分缓解（PR），肿瘤最大直径及最大垂直直径的乘积缩小达到50%以上，维持时间超过1个月；疾病稳定（SD），肿瘤最大直径及最大垂直直径的乘积缩小＜50%，或增大＜25%，维持时间超过1个月；疾病进展（PD），患者出现新病灶或肿瘤最大直径及最大垂直直径的乘积增大≥25%。其中，治疗缓解率=（CR+PR）例数/总例数×100%。对患者的生存情况进行随访，随访时间为0～48个月，随访截至2019年2月；随访方式为电话随访。

1.5 统计学方法

采用SPSS 19.0软件对数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验。样本代表性采用Hardy-Weinberg平衡定量检验。生存曲线采用Kaplam-Meier法绘制，组间比较采用Log-rank检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EPHA 4基因rs17348202位点的基因型分布情况

EPHA4基因rs17348202位点有CC、CT和TT 3种基因型。146例卵巢癌患者中，CC基因型患者20例，CT基因型患者57例，TT基因型患者69例。经Hardy-Weinberg平衡检验，EPHA4基因rs17348202位点的各基因型分布符合遗传平衡定律（χ2=2.105，P＞0.05）。

2.2 不同基因型卵巢癌患者临床特征的比较

不同基因型卵巢癌患者的年龄、肿瘤直径、病理类型比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表1）

表1 不同基因型卵巢癌患者的临床特征

2.3 不同基因型卵巢癌患者化疗效果的比较

TT基因型患者的化疗缓解率为68.12%（47/69），高于CC基因型40.00%（8/20）和CT基因型患者的 43.9%（25/57）（χ2=5.192、7.499，P＜0.05）；CC基因型和CT基因型患者的化疗缓解率比较，差异无统计学意义（χ2=0.090，P＞0.05）。

2.4 不同基因型卵巢癌患者中位PFS的比较

随访截至2019年2月，TT基因型卵巢癌患者无删失，CC基因型卵巢癌患者删失7例，CT基因型卵巢癌患者删失2例。TT基因型患者的中位无进展生存期（progression-free survival，PFS）为36.12个月（95%CI：30.46～43.33），长于CC基因型和CT基因型的21.98个月（95%CI：16.74～27.33）和21.59个月（95%CI：17.31～26.72），差异有统计学意义（χ2=67.363、42.293，P＜0.05）。

3 讨论

卵巢癌的发生主要考虑与卵巢生发上皮细胞的持续性病变有关。卵巢癌本身容易早期发生淋巴结或者血行转移，导致患者出现盆腔淋巴结或者腹腔内器官的转移，从而增加患者的病死率[5-6]。以紫杉醇为基础的静脉化疗药物的应用，在中晚期恶性肿瘤或者围手术期的新型辅助化疗等过程中均发挥了重要的作用。但是，一项包含了333例样本量的回顾性研究显示，在部分人群中，对紫杉醇化疗药物耐药的比例仍然超过了15%以上[7]。特别是在既往具有相关化疗病史或者存在潜在转移风险的人群中，紫杉醇耐药的发生情况更为普遍。

紫杉醇化疗耐药的发生已越来越成为威胁卵巢癌患者远期生存预后的重要因素。紫杉醇耐药的发生主要考虑与下列两个方面的因素有关[8-10]：①卵巢癌细胞对紫杉醇药物的吸收作用下降，从而导致紫杉醇化疗效果的不足；②紫杉醇受到卵巢癌患者局部肿瘤微环境的影响，其有效半衰期可明显下降，同时药物的代谢速度明显加快，导致药物的治疗效果明显下降。

EPHA4基因是影响下游肿瘤相关转录调控蛋白的重要因素，EPHA4基因的异常表达能够影响卵巢癌细胞膜上ATP泵的活性，促进肿瘤细胞对于紫杉醇药物的排泄，导致耐药的发生；EPHA4基因多态性的变化能够在翻译蛋白修饰或者蛋白羧基末端的磷酸化等过程中，加快紫杉醇化疗药物的分解速度[11-12]。

本研究中，通过对EPHA4相关基因多态性分布情况的分析发现，CT亚型、TT基因型的分布较多，所占的比例明显高于CC基因亚型。同时，EPHA4基因rs17348202位点的基因型分布符合遗传平衡定律，提示本研究中纳入的病例具有明显的代表性，排除了因资料选择偏倚而导致的基因多态性研究结论的差异。在不同的年龄、病灶直径、病理类型中，可以发现EPHA4基因rs17348202位点的基因型多态性表达的差异并不明显，提示一般性的临床特征并不会影响基因多态性的表达，基因多态性表达的差异主要考虑与自身性遗传因素或者卵巢生发上皮的细胞来源等有关。

本研究发现，TT基因型患者的化疗缓解率为68.12%，高于CC基因型和CT基因型患者（P＜0.05），提示同一位点基因多态性的变化能够显著影响紫杉醇化疗效果。从机制方法看，TT基因型患者化疗效果的改善可能与下列几个方面的因素有关：①TT基因型患者肿瘤微环境的恶化较为明显，局部卵巢癌组织的氧化应激反应或者炎性反应较为剧烈，从而导致化疗效果不佳；②TT基因型患者紫杉醇的药物作用时间较短，同时，其ATP酶依赖性药物的外排功能较为亢进，导致肿瘤细胞内药物浓度的下降。有研究通过探讨不同的基因位点的多态性对于卵巢癌化疗效果的影响发现，TT基因亚型的改变能够在发挥多种病理和生理性的作用中，促进紫杉醇耐药的发生[13-14]。

综上所述，EPHA4基因rs17348202位点的多态性与卵巢癌紫杉醇化疗疗效有一定的关系，其对预测紫杉醇对卵巢癌的化疗效果可能具有一定的参考价值。