结直肠癌AIM2和血清CEA表达水平及其临床意义

赵建峰 李记彬 石刚 乔鋆 张睿

结直肠癌是恶性程度较高的消化道肿瘤，近年来结直肠癌的发生率和死亡率不断上升，临床也对结直肠癌的防治研究加强了重视［1］。如今肿瘤标志物在癌症患者的早期诊断和疗效评估上受到了关注。癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）是结直肠癌诊断与预后评估的重要实验室指标，近期研究表明其在结直肠癌的发生、发展中扮演重要角色［2-4］。黑色素瘤缺乏因子2（absent in melanoma 2，AIM2）作为IFI20X_IFI16蛋白家族成员之一，在黑色素瘤、前列腺癌、结直肠癌、肝癌等均有异常表达。国外学者研究指出，AIM2的表达缺失与结直肠癌病例的预后不良存在密切关系［4］。为此，本研究探讨了CEA和AIM2在结直肠癌中的表达及其临床意义，现报道如下。

资料与方法

一、临床资料

118例结直肠癌及其50例癌旁正常组织标本（距离肿瘤外缘5 cm）取自我院2010年1月～2013年3月收治的结直肠癌患者。其中男性74例，女性44例，年龄24～85岁，平均（68.3±9.5）岁，依据AJCC肿瘤分期标准术后TNM分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期53例，Ⅲ期49例。纳入标准：①所有患者术后均经病理学确诊为结直肠癌；②术前未进行化疗、放疗及免疫治疗；③自愿加入试验者。排除标准：①自身免疫性疾病患者；②感染性疾病患者。

二、实验方法

采用免疫组织化学法测定组织中AIM2的表达：手术中切除标本立即常规福尔马林固定，取材，常规石蜡包埋，制片。切片经脱蜡水化后，滴加3%过氧化氢，在含有煮沸的柠檬酸修复液的修复盒中进行抗原修复，封闭液37 ℃湿盒孵育30 min。滴加一抗，于4 ℃冰箱过夜，次日加入生物素标记的二抗，置于37 ℃保温箱20 min。PBS缓冲液冲洗，经DAB显色，苏木精复染、脱水透明和中性树胶封片。组织染色的结果依据染色强度以及阳性细胞百分比进行评定：（1）依据阳性细胞百分比：0级（阳性细胞≤5%）、1级（阳性细胞5%～25%）、2级（阳性细胞25%～50%）、3级（为阳性细胞50%～75%）、4级（阳性细胞＞75%）；（2）依据染色强度：0级（无褐色染色）、1级（浅棕色）、2级（棕色）和3级（深棕色）。最后由阳性细胞百分比和染色强度分数共同决定，两者相乘即为最终染色评分：（阴性0）、＋（1～4）、＋＋（5～8）和＋＋＋（9～12）。-和＋代表低表达，＋＋以及＋＋＋代表高表达。兔抗人多克隆抗体 AIM2（ab93015）购自美国Abcam公司；浓缩型DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

术前通过电化学发光法（ECUA）测定的血清CEA水平：所有研究对象均于清晨空腹抽取静脉血3 mL，置于凝血酶促凝生化管，分离血清后，采用ECUA法，通过罗氏e411电化学发光分析仪测定血清CEA水平。所有操作均严格根据标准流程进行。血清CEA≥6.50 ng/mL即阳性。

三、观察指标

回顾性搜集患者临床病理参数，包括患者的年龄、性别、肿瘤大小、部位、浸润深度、TNM分期、分化程度、淋巴结转移。分析癌组织中AIM2表达水平和血清CEA水平的相关性，并分析两种指标与临床病理参数的关系。

收集患者的总生存时间，即手术治疗日期至末次随访日（2018年5月30日）或死亡时间。

四、统计学分析

研究所得数据均采取SPSS 22.0统计软件分析。其中，计量资料用（）的形式表示，应用独立样本t检验，计数资料组间比较应用χ2检验，Spearman等级相关分析对AIM2表达与血清CEA水平进行相关性分析，采用Kaplan-Meier法进行生存分析，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

结 果

一、结直肠癌组织AIM2和血清CEA表达

本次研究结果中，有42例（35.59%）肿瘤组织AIM2呈高表达，有39例（78.0%）癌旁正常组织AIM2呈高表达，差异具有统计学意义（χ2=25.295，P＜0.05）。见表1。结直肠癌患者术前血清CEA阳性率为44.07%（52/118）。Spearman等级相关性分析结果显示，结直肠癌组织AIM2和血清CEA表达呈负相关（r=-0.660，P＜0.001）。

表1 肿瘤组织癌旁正常组织与AIM2表达［例（%）］

二、癌组织AIM2及血清CEA与临床参数的关系

癌组织AIM2表达水平在肿瘤的浸润深度、TNM分期以及淋巴结转移上有明显差异（χ2=4.847，7.794，3.961；P＜0.05）。见表2。患者术前血清CEA水平在肿瘤的大小、TNM分期以及分化程度上差异有统计学意义（χ2=17.14，5.779，5.293；P＜0.05）。见表3。

三、结直肠癌AIM2和血清CEA表达水平与预后关系

K-M生存分析显示，AIM2高表达患者5年总生存率（66.67%）明显高于低表达患者（48.68%）；平均生存时间分别为（74.00±3.04）和（63.41±3.39）个月，（t=16.841，P＜0.001）（见图1）。与术前CEA阳性患者总生存率（44.23%）相比，阴性患者的生存率明显更高，为73.08%。CEA阳性和阴性患者平均生存时间分别为（60.40±3.27）和（74.12±3.46）个月，差异有统计学意义（t=21.906，P＜0.001）（见图2）。联合分析结果显示，AIM2高表达联合CEA阴性总生存率（63.16%）明显高于AIM2低表达联合CEA阳性总生存率（39.58%）；平均生存时间分别为（72.51±3.25）和（57.67±3.29）个月，差异有统计学意义（t=20.885，P＜0.001）。见图3。

表2 癌组织AIM2与临床参数的关系［例（%）］

讨 论

结直肠癌起病隐匿，进展快，多数患者入院就诊时已处于中晚期，存在亚临床肿瘤微转移，不利于预后［5-6］。早期诊断，采取有效治疗或干预措施是取得良好预后非常重要的前提。为此，一直以来探寻疗效评估的肿瘤标志物成为了临床研究的焦点。

表3 患者血清术前CEA水平与临床参数的关系［例（%）］

图1 AIM2高表达和低表达组生存曲线

图2 术前CEA阳性和阴性组生存曲线

图3 AIM2高表达联合CEA阴性与AIM2低表达联合CEA阳性生存曲线

AIM2最早在黑色素瘤细胞中发现，是模式识别受体，相关研究表明，AIM2炎性小体可释放IL-1β和IL-18等炎性因子，启动固有免疫应答［7-8］。早期认为，该指标是肿瘤抑制因子，其过表达能够抑制纤维原细胞的增殖。相关研究发现AIM2在口腔鳞状细胞癌、鼻咽癌等、肺腺癌中呈高表达，在肝癌、乳腺癌和前列腺癌中呈低表达。在子宫内膜癌、结直肠癌中存在AIM2基因的移码与错义突变［9］。本研究结果显示，AIM2在结直肠癌组织中的表达率明显低于癌旁正常组织，比较差异具有统计学意义。进一步分析AIM2表达水平与肿瘤的浸润深度、TNM分期以及淋巴结转移相关，提示结直肠癌组织AIM2表达缺失与结直肠癌进展及肿瘤分期有关。在抗肿瘤免疫应答中，胞内DNA 传感通路发挥着重要的作用，AIM2就是其中之一，可视作识别有免疫原性的DNA疫苗，增强抗肿瘤免疫应答［10-11］。

CEA是一种糖蛋白，在促进肿瘤细胞免疫逃避、扩散及转移中扮演着重要的角色［12-13］。如今，血清CEA在结直肠癌的术前评估和预后预测中得到了广泛应用，尤其在肿瘤复发监测方面。本研究结果显示，结直肠癌患者术前血清CEA阳性率为44.07%，术前血清CEA水平与肿瘤大小、TNM分期以及分化程度相关。Spearman等级相关性分析结果显示，结直肠癌组织AIM2和血清CEA表达呈负相关。提示血清CEA水平与结直肠癌发生发展有关。有学者发现CEA促癌作用与TGF-β信号途径存在密切关系，CEA能够抑制TGF-β信号途径［14］。而且相关研究指出CEA能够抑制NK对癌细胞的杀伤并促其凋亡［15］。这些研究结果可能会对结直肠癌的治疗提供参考，现如今CEA基因瘤苗的研制为结直肠癌免疫治疗指明了新方向。本研究中癌组织中AIM2高表达联合CEA阴性者的临床预后明显优于AIM2低表达联合CEA阳性，提示联合分析两个指标有助于评估结直肠癌患者预后。

综上所述，结直肠癌患者AIM2和血清CEA表达可能与结直肠癌的进展有关，并且联合两个指标在评估患者预后具有一定价值。