卵巢癌患者血清HK10、DJ-1的表达及意义

任晓兵，李阳，陈广福，朱彤，白筱，冯静

(1西安高新医院，西安 710075；2西北妇女儿童医院)

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，发病隐匿，早期无特异临床症状和体征，多数患者确诊时已近中晚期，手术切除和化疗后患者5年生存率仅20%～30%[1,2]。人激肽释放酶-10(HK-10)为人激肽释放酶家族成员，通过与细胞外基质、生长因子等结合而介导细胞凋亡、血管生长及肿瘤的发生发展[3]，研究[4]显示，HK-10在卵巢癌患者中表达上调，且表达水平越高，患者预后越差。DJ-1蛋白由PARK7基因编码，在人体中具有促进细胞转化和抑制细胞凋亡等功能。研究[5,6]发现，DJ-1与肺癌、胃癌等恶性肿瘤的发病密切相关。关于HK-10、DJ-1与卵巢癌发病的关系，目前相关研究证据尚不足。2016年8月～2018年8月，我们检测了卵巢癌患者血清中HK-10、DJ-1水平，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年8月～2018年8月西安高新医院住院手术治疗的卵巢癌患者97例(卵巢癌组)，纳入标准：①组织标本经病理学活检确诊为卵巢癌；②既往未接受过手术切除，或放、化疗治疗者；③Karnofsky(KPS)评分超过60分；④患者及家属知情同意，并在知情同意书上签字；⑤符合医学伦理学要求。排除标准：①妊娠期及哺乳期妇女；②心脏功能不全者；③肝、肾功能障碍者；④急、慢性感染性疾病患者；⑤自身免疫性疾病及凝血功能障碍者；⑥其他系统恶性肿瘤患者。患者年龄37～78(57.28±5.17)岁；根据国际妇产科联盟(FIGO)手术-病理分期标准进行分期，Ⅰ～Ⅱ期56例，Ⅲ～Ⅳ期41例；肿瘤直径2～6(4.12±1.26)cm；病理分型：黏液性腺癌33例，浆液性腺癌49例，内膜样腺癌15例；肿瘤分化程度：低分化42例，中、高分化55例；有淋巴结转移38例，无淋巴结转移59例。同期随机选取85例经病理活检证实为良性卵巢肿瘤患者为良性卵巢肿瘤组，年龄32～70(55.97±6.20)岁。50例其他良性妇科疾病患者为对照组，年龄31～76(58.64±5.73)岁，盆腔炎23例，子宫内膜炎17例，宫颈糜烂10例。三组年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 血清HK-10、DJ-1检测 入院后抽取各组空腹肘静脉血5 mL，室温下静置1 h，3 000 r/min离心5 min，离心半径9 cm，留取血清标本置于-70 ℃冰箱中保存。采用酶联免疫吸附法检测血清HK-10、DJ-1水平，其中HK-10检测试剂盒由北京方程嘉鸿科技有限公司提供，DJ-1检测试剂盒由武汉博士康生物工程有限公司提供。使用美国Thermo公司生产的酶标仪进行检测，检测波长为450 nm处的光密度(OD450)，绘制标准曲线求出对应的浓度值。整个操作过程严格按照试剂盒说明进行。

2 结果

2.1 三组血清HK-10、DJ-1水平比较 三组血清HK-10、DJ-1水平比较差异有统计学意义(F分别为12.368、16.813，P均<0.05)，两两比较，卵巢癌组、良性卵巢肿瘤组血清HK-10、DJ-1水平高于对照组，且卵巢癌组血清HK-10、DJ-1水平高于良性卵巢肿瘤组，差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表1。

表1 三组血清HK-10、DJ-1水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05；与良性卵巢肿瘤组比较，#P<0.05。

2.2 卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平与临床病理特征的关系 FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤细胞低分化、有淋巴结转移的卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平高于Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移者(P均<0.05)；不同年龄、肿瘤直径、病理分型卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平差异无统计学意义(P均>0.05)。见表2。

2.3 卵巢癌患者血清HK-10与DJ-1的相关性 Pearson积矩相关分析结果显示，卵巢癌患者血清HK-10与DJ-1呈正相关(r=0.728，P<0.05)。

2.4 血清HK-10、DJ-1对卵巢癌的诊断价值 绘制的血清HK-10、DJ-1诊断卵巢癌的ROC曲线见图1。血清HK-10、DJ-1联合检测对卵巢癌的诊断价值最高，AUC为0.944(95%CI：0.889～0.992)，灵敏度、特异度分别为0.93、0.97，准确度为0.96。见表3。

3 讨论

卵巢癌是女性生殖系统常见的三大恶性肿瘤之一，报道[7]显示，美国是卵巢癌高发国家，仅北美地区，2013年卵巢癌新发病例即高达2万例，死亡病例1.4万例。我国属于卵巢癌高发国家，近年发病率呈逐渐上升趋势。血清糖类抗原125(CA125)是目前临床诊断卵巢癌的常见肿瘤标志物，但研究发现，部分卵巢癌患者CA125无明显表达，而在妇科良性疾病如盆腔炎、子宫内膜异位症等患者血液中可显著表达，说明CA125的灵敏度和特异度较差[8～10]。寻找更为灵敏且能早期诊断卵巢癌，并判断病情严重程度的肿瘤标志物，对临床制定针对性治疗方案有重要意义。

表2 卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平与临床病理特征的关系

图1 血清HK-10、DJ-1诊断卵巢癌的ROC曲线表3 血清HK-10、DJ-1对卵巢癌的诊断价值

指标AUC95%CI截断值灵敏度特异度准确度HK-100.8420.768～0.9151.220.830.790.82DJ-10.8540.772～0.93610.790.850.820.87HK-10+DJ-10.9440.889～0.992-0.930.970.96

HK-10是由KLK10基因编码相对分子质量为30 kD的分泌型丝氨酸蛋白酶，含有276个氨基酸，在细胞外形成胞外生长调节因子或细胞表面受体等介导细胞的生长、凋亡等过程，正常细胞生长过程中，HK-10主要在母乳、脑脊液等生物学液体中表达，而在心脏、胸腺等器官中表达微乎其微，在骨骼肌、肝肾等脏器中不表达[11]。研究[12]表明，HK-10表达异常参与了乳腺癌等内分泌恶性肿瘤的发生发展过程，并与恶性肿瘤细胞的脱落、迁移侵袭过程密切相关，其主要机制可能与雌激素受体、孕激素受体等类固醇激素受体复合物及其同源激素反应元件通过相互作用而促进或抑制人组织激肽释放酶基因10(KLK10)的表达有关。Grzmil等[13]发现，HK-10在前列腺癌患者中表达上调，水平越高，预后越差。马睿等[11]证实，HK-10在卵巢癌组织中的表达明显高于正常卵巢组织，并由此推断其可作为卵巢癌的诊断标志物。DJ-1基因位于染色体1P36，长度为24 kb，DJ-1蛋白单体在人体肾脏、胰腺、肝脏、肌肉组织等不同组织中广泛表达，且其二聚体形式在细胞的转录、相互转化、氧化应激等生理活动中发挥重要作用[14]。Tabata等[15]研究显示，DJ-1蛋白在胆管癌组织中表达升高，且其水平越高，预后越差。李海等[16]对甲状腺癌的研究发现，DJ-1参与了各型甲状腺癌的发病过程，但与其预后无明显关系。Shu等[17]证实，子宫内膜癌组织中DJ-1表达较正常子宫内膜组织明显升高，且与子宫内膜癌发生发展密切相关。农雪萍等[18]发现，DJ-1在非小细胞肺癌组织中异常表达，发生远处转移的肺癌组织中DJ-1表达水平更高，并由此推断DJ-1可作为评估肺鳞癌预后的肿瘤标志物。

本研究结果显示，卵巢癌及良性卵巢肿瘤患者血清HK-10、DJ-1水平高于对照，且卵巢癌患者高于良性卵巢肿瘤患者，差异均有统计学意义，提示卵巢良、恶性肿瘤中HK-10、DJ-1表达上调存在差别，二者可能参与了卵巢癌发病过程，与有关研究结果相似。马睿等[11]发现，HK-10在卵巢癌患者中表达明显高于卵巢良性疾病，且经过TP方案化疗后显著降低。王伟明等[9]证实，DJ-1在卵巢良、恶性肿瘤中表达有显著差别，恶性肿瘤患者表达明显升高。此外，本研究结果显示，血清HK-10、DJ-1与FIGO分期、肿瘤细胞的分化程度及淋巴结转移等临床病理特征密切相关，FIGO临床分期越高、肿瘤分化程度越差及有淋巴结转移的卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平越高，提示HK-10、DJ-参与了卵巢癌的发生发展、侵袭转移过程，且与预后密切相关，二者表达水平越高，预后越差。因此，早期检测血清HK-10、DJ-1有望作为临床评估卵巢癌患者病情严重程度的重要标志物。

Pearson积矩相关分析结果显示，卵巢癌患者血清HK-10与DJ-1呈正相关，两种标志物可能通过表达上调发挥协同作用，参与卵巢癌的发生发展，通过信号通路的交叉，HK-10、DJ-1共同促进肿瘤细胞的侵袭转移。本研究进一步评估血清HK-10、DJ-1对卵巢癌的诊断价值，结果显示HK-10、DJ-1诊断卵巢癌有较好的诊断价值，且联合检测的灵敏度可达0.93，特异度可达0.97，准确度可达0.96，提示早期联合检测可最大化减少漏诊率和误诊率，提高早期诊断卵巢癌的准确率。

综上所述，卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平升高，并与癌细胞的侵袭转移密切相关;二者联合检测有助于卵巢癌的早期诊断。