基于板蓝根中(R,S)-告伊春含量研究板蓝根加工方法

王 林，金传山,2,3，张 伟,2,3，郑晓倩，朱月健

(1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012；2.中药复方安徽省重点实验室，安徽 合肥 230012；3.中药饮片制造新技术安徽省重点实验室，安徽 合肥 230012；4.安徽普仁中药饮片有限公司，安徽 亳州 236800)

板蓝根为十字花科植物菘蓝IsatisindigoticaFort.的干燥根，有清热解毒、凉血利咽之功效[1]。板蓝根作为传统抗病毒中药之一，2015年版《中华人民共和国药典》即以(R,S)-告伊春作为含量测定项，现代药理研究表明，(R,S)-告伊春是板蓝根水提液中明确的抗病毒活性成分[2]。而(R,S)-告伊春是由芥子苷类物质(表原告伊春和原告伊春)在加热或其他条件下发生降解反应转化而得到的。因为芥子苷类物质并无生物活性，只有被降解后才具有抗病毒的活性[3-4]。

课题组前期产地调研时发现，黑龙江产板蓝根在产地加工过程中存在两个问题：一是在产地加工过程中，以晒干为主要干燥方式，这种模式获得的板蓝根药材中(R,S)-告伊春的含量仅能达到《中华人民共和国药典》规定的下限，品质较差；二是中成药加工中，直接将产地晒干的板蓝根药材破碎为粗颗粒投料使用，这种生产模式不符合优质药材生产优质饮片，进而生产优质中成药的指导原则。

因此，本研究以黑龙江大庆、齐齐哈尔等生产的板蓝根为研究对象，共收集4批新鲜板蓝根药材以及15批晒干药材，采用高效液相色谱法测定板蓝根中(R,S)-告伊春含量，对比板蓝根烘干品与晒干品、板蓝根药材软化切制形成饮片与板蓝根药材直接破碎成颗粒之间的质量差异，以期通过工艺优化提升板蓝根质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪(G1312C二元泵，G1316B二极管阵列检测器)：美国安捷伦公司；DZKW-S-4型电热恒温水浴锅：上海科恒实业发展有限公司；Sartorius BSA224S 万分之一电子天平：赛多利斯科学仪器北京有限公司；Sartorius ME5百万分之一电子天平：德国Sartorius公司；电热鼓风式干燥箱：上海博迅实业有限公司。

1.2 试药 (R,S)-告伊春对照品(批号Z27M8X36933，纯度≥98%)：上海源叶生物科技有限公司；甲醇(色谱级)；纯净水：杭州娃哈哈公司。

19批药材均于2017年10月采自黑龙江省大庆市及齐齐哈尔市等地，采收信息见表1。所采样品经安徽中医药大学俞年军教授鉴定为十字花科植物菘蓝IsatisindigoticaFort.干燥根。

2 方法与结果

2.1 (R,S)-告伊春含量测定

2.1.1 供试品制备 取本品粉末(过4号筛)约1 g，精密称定，置圆底瓶中，精密加入水50 mL，称定质量，煎煮2 h，放冷，再称定质量，用水补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.2 对照品制备 取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为40.70 μg/mL的对照品溶液，即得。

2.1.3 色谱条件 Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱；以甲醇-0.02%磷酸溶液(7∶93)为流动相；检测波长为245 nm。理论板数按(R，S)-告依春峰计算应不低于5 000。

2.2 板蓝根烘干药材与晒干药材(R,S)-告伊春含量比较

2.2.1 不同温度干燥对板蓝根中(R,S)-告伊春含量的影响 取S16新鲜板蓝根样品，洗净，平摊至表面无水珠。选择粗细均匀的板蓝根，置于敞口式烘干机，烘干组按照40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃、90 ℃不同温度梯度设置，直至烘干；晒干组置于空旷地方晒干，干燥程度以掰断有清脆响声即可。依据2015年版《中华人民共和国药典》板蓝根项下(R,S)-告伊春含量测定法进行测定，不同烘干温度对板蓝根中(R,S)-告伊春含量的影响见表2。

表1 板蓝根药材样品信息

表2 不同温度干燥对板蓝根(R,S)-告依春含量的影响(n=3)

2.2.2 不同产地板蓝根晒干品与60 ℃烘干品(R,S)-告伊春含量比较 取3批不同产地新鲜板蓝根样品，洗净，平摊至表面无水珠。将烘干组板蓝根置于敞口式烘干机，60 ℃烘干；将晒干组板蓝根置于空旷地方晒干，测得不同工艺下板蓝根(R,S)-告伊春含量。结果表明，60 ℃烘干工艺能够明显提升板蓝根中(R,S)-告伊春含量。见表3、图1。

2.3 板蓝根饮片与板蓝根药材粗颗粒中(R,S)-告伊春含量比较

2.3.1 板蓝根饮片软化切制工艺正交实验优选 取S16板蓝根晒干药材，除去杂质，净选粗细均匀的板蓝根药材300 g，平行9份，以浸润用水量(A)、浸润时间(B)、饮片厚度(C)和烘干温度(D)为考察因素，采用L9(34)正交试验表优选软化切制工艺，将9份平行样置于托盘中，均匀摆放，每隔1 h喷淋1次，润透，取出，切片，烘干。取出放凉，置于塑封袋中，备用。见表4、表5。

表3 不同产地板蓝根晒干品与60 ℃烘干品(R,S)-告伊春含量比较(n=3)

注：1.(R,S)-告伊春对照品；2.板蓝根60 ℃烘干药材；3.板蓝根晒干药材

图1 板蓝根晒干品与60 ℃烘干品(R,S)-告伊春含量对照色谱图

表5 板蓝根饮片软化切制工艺优选正交试验(n=2)

由表5直观分析可知，影响板蓝根软化切制的主次因素依次是D、A、B、C，软化切制最佳工艺组合为A1B1C2D2，即0.6倍水浸润12 h，饮片厚度为3 mm，60 ℃烘干。

2.3.2 板蓝根粗颗粒与板蓝根饮片(R,S)-告伊春含量比较 按照同一组样品平行对照原则，采用“2.3.1”项中优选出的最佳软化切制工艺对15批不同来源的板蓝根进行加工，得到软化切制前后板蓝根中(R,S)-告伊春含量。结果表明，软化切制过程能明显提升板蓝根中(R,S)-告伊春的含量。见表6、图2。

表6 板蓝根药材及软化切制后饮片(R,S)-告伊春含量测定(n=3)

图2 (R,S)-告伊春对照品(1)、板蓝根饮片(2)

3 讨论

在烘干工艺研究中，60 ℃烘干所得板蓝根(R,S)-告伊春含量最高。对比同一批新鲜板蓝根药材以60 ℃烘干和晒干两种工艺获得的(R,S)-告伊春含量，发现60 ℃烘干制得的板蓝根药材中(R,S)-告伊春含量明显高于晒干者，且烘干法干燥药材大约需要12～14 h，晒干法则需要15 d左右。烘干板蓝根不仅有效成分(R,S)-告伊春含量得到提升，而且加工周期短，因此建议产地加工以烘干法代替晒干法，以提升黑龙江产板蓝根的质量。

在软化切制研究中，利用正交设计试验法优选出最佳的软化切制工艺为0.6倍水，喷淋12 h，切片厚度3 mm，60 ℃烘干。通过比较板蓝根粗颗粒与板蓝根饮片(R,S)-告伊春含量，发现经过软化切制再烘干的工艺过程能明显提升板蓝根中(R,S)-告伊春含量。但由于板蓝根烘干成本较高，故难以在产地全面推广烘干法代替传统的晒干法，软化切制工艺研究表明，若使用产地晒干品药材作为中成药投料，需要采用软化切制后的饮片，以确保中成药的质量。

(R,S)-告伊春是一对对映体，分别为R-告伊春和S-告伊春，现有文献研究表明，R-告伊春是板蓝根抗病毒的有效成分[2]，而S-告伊春具有致甲状腺肿大的不良反应[5]。本研究表明，烘干工艺及软化切制工艺均能使板蓝根中(R,S)-告伊春含量升高，而其提升的是R-告伊春还是S-告伊春则有待进一步研究，从而更加科学地评价两种工艺的合理性。

[安徽省高校科研创新平台团队(中药饮片产地加工与炮制一体化关键技术研究创新团队)对本课题给予了支持，谨致谢意！]