ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67在乳腺癌中的表达及临床病理意义分析

王娟 黄炳臣 吴雪铭 苏群英 林洁 黄小英 龙喜带

【摘要】 目的 探讨雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、原癌基因人类表皮生长因子受体-2（Her-2）、血管内皮生长因子（VEGF）、p53基因（p53）和增殖细胞核抗原（Ki67）在乳腺癌中的表达及临床病理意义分析。方法 收集乳腺癌根治术标本213例，通过免疫组织化学法检测ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67在乳腺癌组织中的表达，探讨这些免疫组化指标与临床病理特征之间的关系。结果 （1）ER、PR和Ki67与组织学分级及临床分期有关（P<0.05）。（2）Her-2与组织学分级及组织学分类有关（P<0.05）。（3）p53与组织学分级及是否存在淋巴结转移有关（P<0.05）。（4）VEGF与肿瘤组织学分级、临床分期及是否存在淋巴结转移有关（P<0.05）。进一步Pearson相关分析显示，ER和PR与乳腺癌组织分化程度呈负相关（r=-0.221，r=-0.258，P<0.05）;Her-2、p53、Ki67和VEGF与乳腺癌组织分化程度呈正相关（r=0.231，r=0.288，r=0.063，r=0.217，P<0.05）。

结论 通过检测ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67多项免疫组化指标的表达情况，可为临床有效判断乳腺癌患者的恶性程度及转移情况提供参考依据。

【关键词】 乳腺癌;免疫组化;病理分析

中图分类号：R737.9 文献标志码：A DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2019.03.002

【Abstract】 Objective To investigate the analysis on expressions and clinicopathological significance of estrogen receptor（ER），progesterone receptor（PR），human epidermal growth factor receptor-2（Her-2），vascular endothelial growth factor（VEGF），p53 gene（p53） and Ki67 antigen（Ki67）.Methods A total of 213 specimens of radical mastectomy were collected.And then，immunohistochemistry was used to detect the expressions of ER，PR，Her-2，VEGF，p53 and Ki67 in breast cancer，and relationship between these immunohistochemical parameters and clinicopathological features was explored.Results （1）ER，PR and Ki67 were associated with histological grade and clinical stage（P<0.05）.（2） Her-2 were related to histological grade and histological classification（P<0.05）.（3） p53 was significantly associated with histological grade and lymph node metastasis（P<0.05）.（4） VEGF was associated with tumor histological grade，clinical stage and lymph node metastasis（P<0.05）.Further Pearson correlation analysis showed that ER and PR were negatively correlated with the differentiation degree of breast cancer（r=-0.221，r=-0.258，P<0.05）;Her-2，p53，Ki67 and VEGF were positively correlated with the differentiation of breast cancer（r=0.231，r=0.288，r=0.063，r=0.217，P<0.05）.

Conclusion By detecting the expressions of multiple immunohistochemical indexes including ER，PR，Her-2，VEGF，p53 and Ki67，it can provide a reference basis for effectively judging the malignant degree and metastasis of breast cancer patients.

【Key words】 breast cancer;immunohistochemistry;pathological analysis

乳腺癌作为一种激素依赖性和异质性肿瘤，是女性最常见的癌症，其发病率逐年上升且呈年轻化的趋势[1～3]。尽管相关研究取得了大量实质性的研究成果，有望改善乳腺癌的化疗、放疗以及手术治疗的疗效，然而乳腺癌细胞仍然会扩散和转移到机体的其他部位，这对于研究人员而言或许是一大挑战。相关研究表明乳腺癌的发病机制是多基因、多因素和多阶段演变的过程[4]。目前，对于雌激素受体（Estrogen receptor，ER）、孕激素受体（Progesterone receptor，PR）、原癌基因人类表皮生长因子受体-2（Human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、p53基因（p53 gene，p53）和增殖细胞核抗原（Ki67 antigen，Ki67）等肿瘤标志物在乳腺癌中的研究受到学者的关注。本研究通过探讨ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67在乳腺癌中的表达及临床病理意义，为临床有效判断乳腺癌患者的恶性程度及转移情况提供參考依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

入选标准如下：经病理诊断确诊为乳腺癌的患者、术前无放疗与化疗者、具有完整的临床病历资料、具有可供研究的合适组织样本、患者本人同意参加本次研究。排除标准为：未经病理组织诊断确认者、术前有放化疗史者、资料不完整者、无可用于研究分析的合适样本者、不同意参加者。根据以上标准，共收集符合要求的213例乳腺癌病例，收集所有研究对象的石蜡组织标本用于检测乳腺癌中ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67的表达，且均具有完整的临床病历资料;组织学分级根据改良Bloom-Richardson半定量组织学分级判定。213例乳腺癌患者中，乳腺浸润性导管癌203例、乳腺浸润性小叶癌9例、乳腺髓样癌1例，有淋巴结转移109例、无淋巴结转移104例。

1.2 研究方法

采用组织病理切片：用10%中性福尔马林对标本进行固定、常规脱水、石蜡包埋、切片厚度为4 μm，HE染色，镜下观察。IHC法：实验组所用一抗分别为ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67;对照组使用PBS缓冲液替代一抗作为阴性对照。抗体和试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司，所有操作步骤均按照说明书进行。

1.3 免疫组织化学结果判断

免疫组化指标阳性结果判断标准：ER、PR、p53及Ki67定位为癌细胞核，阳性表达即细胞核有淡黄、棕黄色或者棕褐色颗粒，在随意5个高倍镜下观察阳性细胞的比例[5]：阳性细胞比例不足10%为阴性，超过10%为阳性;Her-2定位于细胞膜，阳性表达时其细胞膜有棕黄色颗粒;VEGF染色的癌细胞胞浆呈棕褐色。

1.4 统计学方法

所有数据均采用统计软件SPSS 23.0进行统计分析，免疫组化指标表达的差异比较采用卡方检验;采用Pearson进行相关性分析，检验水准：α=0.05，双侧检验。

2 结果

2.1 乳腺癌组织免疫组化指标阳性率比较

ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67在乳腺癌组织免疫组化阳性率分别为61.97%（132/213）、55.87%（119/213）、58.69%（125/213）、53.52%（114/213）、46.01%（98/213）、73.71%（157/213），各免疫組化指标阳性率相比，差异有统计学意义（χ2=37.749，v=5，P<0.001）。见表1;免疫组化阳性表达定位情况见图1。

2.2 乳腺癌组织中ER、PR及Her-2表达与临床病理特征关系分析

ER、PR与临床分期及组织学分级有关（P<0.05），与患者的年龄、肿瘤的大小、组织学类型及是否存在淋巴结转移均无相关性（P>0.05）;Her-2与组织学分级及组织学类型有关（P<0.05），与患者的年龄、临床分期、肿瘤的大小及是否存在淋巴结转移均无相关性（P>0.05）。见表2。

2.3 乳腺癌组织中VEGF、p53和Ki67表达与临床病理特征关系分析

Ki67与组织学分级和临床分期有关（P<0.05），与其他无相关性（P>0.05）;p53与组织学分级及是否存在淋巴结转移有关（P<0.05），与其他无相关性（P>0.05）;VEGF与肿瘤组织学分级、临床分期及是否存在淋巴结转移有关（P<0.05），与其他无相关性（P>0.05）。见表3。

2.4 ER、PR、Her-2、p53、Ki67和VEGF表达与组织分化程度相关性分析

通过Pearson分析，免疫组化指标与组织分化程度的相关性分析结果显示：ER和PR与乳腺癌组织分化程度呈负相关（r=-0.221，r=-0.258，P<0.05）;Her-2、p53、Ki67和VEGF与乳腺癌组织分化程度呈正相关（r=0.231，r=0.288，r=0.063，r=0.217，P<0.05）。见表4。

3 讨论

近年来，乳腺癌的发病率逐年上升，有关乳腺癌发生过程中的关键节点是什么、哪些分子发挥着重要的作用以及有关乳腺癌的免疫逃逸疗法尚未得到阐明。因此，如何早期诊断乳腺癌、有效评价治疗效果、准确判断预后和早期发现复发病例等已成为临床关注的热点问题[6]。

3.1 ER、PR与乳腺癌

乳腺癌是依赖激素生长的肿瘤，其生长与雌、孕激素的异常有着密切关系。据报道，70%的乳腺癌患者ER呈阳性。Xue等[7]认为降低患者自身雌激素水平或阻断ER介导的细胞信号被认为是乳腺癌治疗的有效方法。本研究发现，ER、PR在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为61.97%（132/213）、55.87%（119/213），与肿瘤大小无显著关系，此结果与余辉等人[8]的研究结果基本一致。此外，本研究发现ER、PR与组织学分级及临床分期有关，表明乳腺癌患者的恶性程度与ER、PR在癌组织中的阳性表达率呈负相关，临床病理分期Ⅰ～Ⅱ期ER、PR的阳性表达率较高，与肿瘤大小和淋巴结转移无相关，与于喜法等[9]的研究结果相一致。目前，有文献表明ER表达阳性者5年生存率较阴性者高，且ER阴性患者肿瘤复发率和远端转移率均较阳性患者高。此外有文献报道ER和PR均为阴性者，肿瘤侵袭性较强、恶性程度高，远端转移概率大且预后较差，故ER和PR表达是判断乳腺癌患者长期预后的重要指标[10]。

3.2 VEGF与乳腺癌

在肿瘤生长过程中，新生毛细血管具有为肿瘤提供营养和协助癌细胞转移等功能。VEGF是肿瘤毛细血管形成的关键因子之一，参与新血管生成。因此，如何抑制肿瘤的新生毛细血管形成是目前肿瘤新的研究方向[11]。王伟等人[12]通过免疫组化法检测50例乳腺癌患者根治手术切除的癌组织标本和癌旁标本中的VEGF表达情况，结果表明VEGF在乳腺癌中阳性表达显著高于癌旁组织，其表达强度与组织学分级、淋巴结转移相关，本研究结果与其基本一致。另外研究发现，VEGF与乳腺癌组织的发生、浸润、转移密切相关[13]，表明VEGF亦是临床判断乳腺癌转移的重要指标之一[14]。综上文献所述，VEGF在乳腺癌发展过程中起着重要作用，与肿瘤的恶性程度、浸润和转移有着密切关系。

3.3 Her-2、p53与乳腺癌

随着学者对Her-2研究的深入，发现其与机体多种恶性肿瘤有着密切的关系，尤其是与乳腺癌的发生、发展有关[15]。研究发现Her-2被认为是判断乳腺癌患者预后和分子靶向治疗的关键标志物[16]，Her-2过表达时乳腺癌预后较差[17]。有文献发现Her-2阳性表达的肿瘤多同步伴随p53基因突变，在肿瘤耐药性方面具有协同效应，共同影响患者的病情、预后及化疗效果[18]。由于当前对p53和Her-2相互协同作用的认识依然有限，尚需进一步深入探讨。本研究结果显示Her-2与组织学分级及组织学类型有关（P<0.05），p53与组织学分级及是否存在淋巴结转移有相关性（P<0.05），组织学分级越高，两者在乳腺癌患者癌变组织中的阳性表达率越高，猜测Her-2、p53是重要的乳腺癌生物学行为及预后评估指标。

3.4 Ki67与乳腺癌

学者将Ki67的表达强度分为低度、中度和高度，以此指导临床治疗[19]。Tobin等人[20]发现Ki67与乳腺癌的发生、发展有关。Denkert等[21]发现组織学分级越高、有淋巴结转移的乳腺癌患者，Ki67阳性表达率越高，其癌细胞增殖活性越高、预后越差，推测Ki67参与了乳腺癌的发生与发展。本研究发现Ki67阳性表达与组织学分级和临床分期有关（P<0.05），组织学分级越高、临床分期越高的乳腺癌患者，其Ki67阳性表达率越高。

综上所述，通过Pearson分析，ER和PR与乳腺癌组织分化程度呈负相关，Her-2、p53、Ki67和VEGF与乳腺癌组织分化程度呈正相关。因此，通过检测ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67多项免疫组化指标的表达情况，可为临床有效判断乳腺癌患者的恶性程度及转移情况提供参考依据。

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（收稿日期：2018-12-26 修回日期：2019-02-26）

（編辑：潘明志）