不同加工方法对女贞子中特女贞苷含量的影响

刘喜玲，赵淑敏，刘红莉，曹望第

（陕西省商洛市药品检验所，陕西 商洛 726000）

女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidumAit．的干燥成熟果实，具有滋补肝肾、明目乌发之功效，用于治疗肝肾阴虚、眩晕耳鸣、腰膝酸软、须发早白、目暗不明、内热消渴、骨蒸潮热[1]。早期发现的主要活性成分为以脂溶性的齐墩果酸、熊果酸等为代表的五环三萜类化合物[2-3]。近年来，陆续分离得到了水溶性的红景天苷和裂环环烯醚萜苷类化合物，包括女贞酸、女贞苷、新女贞苷、特女贞苷和女贞苦苷等，具有较强的生理活性。对于女贞子的质量分析，早期以测定齐墩果酸和熊果酸的含量为主，近年来对红景天苷和裂环环烯醚萜苷类化合物进行了定量分析[4-5]。特女贞苷可抗炎抗菌，降血糖，调血脂，抗衰老，对高糖刺激的肾小球系膜细胞凋亡具有保护作用[6]。以往在中药材的生产和产地加工过程中，往往只注重中药材的产量、效益和药材的外形质量，而对药材有效成分的积累动态和药材的内在品质重视不够[7-9]。本研究中采用高效液相色谱法测定女贞子的特征性成分特女贞苷的含量[10-15]，建立最佳加工方法。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

LC-20A型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；FA1104型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；FW-200D型高速万能粉碎机（天津鑫博得仪器有限公司）；加热回流装置（实验室自行组装）；1HP-10-H型试验用超纯水机（重庆力德高端水处理设备研发有限公司）。

1．2 试药

特女贞苷对照品（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，含量为96．4%，批号为111926-201203）；甲醇（色谱纯，Sigma-Aldrich公司，批号为34851-4L）；乙醇（分析纯，500 mL，天津市天力化学试剂有限公司）；水为自制纯化水；试验所用女贞子药材于2016年冬采集于商洛市商州区，经陕西省商洛市药品检验所曹望第主任药师鉴定为木犀科植物LigustrumlucidumAit．。

2 方法与结果

2．1 样品加工方法

将成熟的女贞子除去枝叶，混匀，即得样品。

烘干法：将采摘的女贞子在105℃下直接烘干；阴干法：将采摘的女贞子在室温下放置2个月左右自然阴干；晒干法：将采摘的女贞子在室外阳光下晾晒15 d左右；蒸后晒干法：将采摘的女贞子蒸不同时间后，经过晒干处理；烫后晒干法：用沸水将采摘的女贞子烫不同时间后，经过晒干处理。

取不同加工方法处理好的样品，经超微粉碎（过3号筛），制成9种样品，粉末2 g，精密称定，按2015年版《中国药典（四部）》通则0832第二法水分测定法（烘干法）测定水分。详见表1。

表1 女贞子不同加工法加工的试验样品的水分含量（n=2）

2．2 特女贞苷含量测定

2．2．1 色谱条件与系统适用性试验[1]

色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm×4．6 mm，5μm）；检测波长：224 nm；流动相：甲醇-水（40∶60，V∶V）；流速：1．0 mL／min；柱温：35℃。理论板数按特女贞苷峰计应不低于4 000，在此色谱条件下，特女贞苷与其他组分峰均达到基线分离。详见图1。

图1 高效液相色谱图

2．2．2 溶液制备

对照品溶液：取特女贞苷对照品8．5 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加入甲醇溶解，并制成每1 mL含0．17 mg的溶液，即得。

供试品溶液：取2．1项下不同加工方法处理好的样品0．5 g粉碎（过3号筛），精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入稀乙醇50 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用稀乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2．2．3 方法学考察

线性关系考察：精密量取特女贞苷对照品溶液，分别取0．5，1．0，2．0，4．0，6．0，8．0，10．0，20．0μL，以进样量（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=808．74X-31．272，r=0．999 8（n=8）。结果表明，特女贞苷进样量在0．085～3．400μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密量取特女贞苷对照品溶液10μL，按拟订色谱条件重复进样6次，测定峰面积。结果的RSD为0．32%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，按拟订色谱条件分别于0，2，4，8，12 h时测定。结果的RSD为1．31%（n=6），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

重复性试验：取同一处理方法的样品6份，按2．3．2项下方法制备供试品溶液，进样10μL测定。结果的RSD为0．75%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密称定已知含量的样品6份（质量浓度为85．28μg／mL），各0．25 g，精密量取质量浓度为0．85 g／L的特女贞苷对照品溶液5 mL，分别加入上述6份样品中，按拟订色谱条件进样10μL，测定含量，以干燥品计算回收率。结果见表2。

表2 特女贞苷加样回收试验结果（n=6）

2．2．4 样品含量测定

按2．1项下样品处理方法，处理9种不同样品后，按2．3．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件分别进样2次，每次10μL，测定峰面积，按照干燥品计算含量。结果加工方法1～9的特女贞苷含量分别为0．90%，1．23%，0．94%，1．51%，1．77%，1．59%，1．65%，1．84%，1．85%。

3 讨论

本研究为探究性试验，通过考察不同的加工方法对女贞子中特女贞苷含量的影响，对2015年版《中国药典（一部）》中规定的女贞子加工方法（稍蒸或置沸水中略烫后干燥，或直接干燥）进行比较，结果表明，不同加工方法对女贞子中特女贞苷含量有显著影响。

比较不同加工方法对女贞子中特女贞苷含量的测定结果，特女贞苷的含量依次为烫后干燥法＞蒸后干燥法＞阴干法＞晒干法＞烘干法；蒸10 min比蒸5 min和蒸20 min后干燥的女贞子中特女贞苷含量高；置沸水中烫5 min和烫10 min比烫2 min后干燥的女贞子中特女贞苷含量高，随着烫的时间的延长，烫5 min和烫10 min处理后，女贞子中特女贞苷的含量增长不大，因而宜采用烫后干燥的方法进行产地加工。因此，最佳产地加工方法是将女贞子置沸水中烫5 min后晒干处理。

特女贞苷是女贞子中的专属成分，其药理活性明确，可作为女贞子药材质量检验的指标性成分。本研究中建立的女贞子的不同加工处理方法对女贞子中特女贞苷的含量提高起到了很好的指导意义，对于女贞子药材的质量提升具有一定参考价值。