痰中端粒酶催化基团mRNA表达与肺癌发生及进展的相关性

许 斌 姜彦多 孟 媛

作者单位：113008 辽宁省抚顺市中心医院

肺癌是当今全球最常见的恶性肿瘤之一，发病与患病在众多国家都有增高趋势[1-2]；但是肺癌患者的早期诊断与发现一直是临床与预防领域的难题，很多患者首诊已经是肺癌中晚期，错过了最佳治疗时机，对于患者的预后造成严重不良影响[3-4]。研究提示，早期诊断对于提高患者生存率至关重要，随着相关学科的发展，肿瘤标志物的无创检测技术也取得了进步与发展，其中通过分泌物的端粒酶催化基团mRNA测评，对于早期发现和诊断肺癌应该具有重要临床价值[5]。目前端粒酶催化基团mRNA的测定更多集中于组织活检的测定以及血液中的测定[6-7]，痰液中进行端粒酶催化基团mRNA测定更具无创性，本研究即拟就痰中端粒酶催化基团mRNA表达与肺癌发生及进展的相关性进行分析讨论。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取本院2014年1月至2016年6月间本院首诊的确诊肺癌患者75例纳入研究，并对患者进行为期1年的随访；同时选取同期可比的普通肺炎患者100例纳入研究作为对照组。纳入标准：确诊的肺癌患者，均为首诊患者，且入组时未接受过任何形式的肺癌治疗干预，受试对象知情同意，病历资料完整，且能配合研究和随访的进行。排除标准：既往诊断为肺癌的患者或复发转移的肺癌患者，其他恶性肿瘤患者，各种原因不能配合研究和随访进行的受试对象。研究经本院伦理委员会批准后进行。

1.2 研究方法

留取受试对象痰液，并存放于无菌器皿中，经无菌生理盐水冲洗后离心，加入2%的溴己新注射液5 ml液化痰液，离心去上清，收集沉淀细胞备用。使用PCR法测定端粒酶mRNA以及端粒酶催化基团mRNA表达阳性情况。比较肺癌患者与健康人，以及患者中随访检出的不同病情进展状态的3组患者之间的表达阳性差异。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 受试对象一般情况

肺癌患者与健康对照组的年龄(62.83±6.35 vs 62.39±6.26)和性别分布(39/36 vs 54/46)均衡可比，差别未见统计学意义(P>0.05)。肺癌患者中鳞癌患者36例(48.00%)，腺癌患者9例(12%)，小细胞癌患者30例(40.00%)；此外随访1年，患者的病情控制良好或好转的检出16例(21.33%)，随访中恶化或进展的患者共53例(70.67%)，另外随访检出6例患者死亡(8.00%)。

2.2 2组受试对象痰中端粒酶催化基团mRNA表达比较

与健康对照比较，肺癌患者的痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达均高于健康对照，差别均有统计学意义(P<0.05)，详见表1所示。提示肺癌病理背景下痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达增高，痰中的端粒酶及其催化基团mRNA阳性检出具有提示肺癌的肿瘤标志价值。

表1 受试对象痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达比较(例，%)

2.3 随访期病情状态不同的肺癌患者痰中端粒酶及其催化基团mRNA阳性表达情况比较

与病情控制良好或好转患者比较，病情恶化或进展的患者以及出现死亡的患者痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达阳性率均更高，差别均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。提示肺癌病情进展甚至死亡均与痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达增高存在关联，痰中的端粒酶及其催化基团mRNA高阳性率提示病情恶化及不良的预后。

表2 肺癌患者痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达与肺癌控制情况的相关性(例，%)

*为与病情控制良好或好转患者比较，P<0.05。

3 讨论

端粒是真核生物染色体末端的一段串联复制序列，近年来随着分子生物学的发展，逐渐被关注，并发现其与多种慢性疾病、衰老等生理病理过程密切联系[7-8]。端粒本身的生物学效应是对细胞的寿命、发育以及分化等进行调节，类似于细胞的生物钟；端粒酶具有RNA依赖性，同时还具有DNA合成酶活性，能够以自身携带的RNA为模板，完成端粒重复序列的合成，因此研究者们目前认为阻止端粒的缩短，能够达到使细胞永生的效果[9-10]。

在端粒与肿瘤的相关研究中，我们发现小细胞肺癌肿瘤组织的端粒酶活性的阳性率很高，在胸腔的恶性积液中也发现了较高的阳性水平[11]。由此推断，在患者的痰液以及脱落细胞中也应该能检测到端粒酶的阳性表达，并可以据此反推肿瘤的发生与进展状态，但相关研究尚不多[12]。本次研究选取首诊的确诊肺癌患者75例纳入研究，并对患者进行为期1年的随访；研究同时选取同期可比的普通肺炎患者100例纳入研究作为对照组。收集受试对象痰液，分析痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达与肺癌发生及进展的相关性情况。通过比较患者治疗前痰液标本发现，肺癌患者的痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达均高于健康对照组，差别均有统计学意义，P<0.05；肺癌患者痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达阳性率分别达到了66.67%和71.56%。进一步比较不同随访病情状态的患者痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达阳性情况，可见与病情控制良好或好转患者比较，病情恶化或进展的患者以及出现死亡的患者痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达阳性率均更高，差别均有统计学意义，P<0.05。

痰液脱落细胞检查是早期发现肺癌的1种传统方式，但痰液标本中的肿瘤细胞数量很少，同时还会混在各种炎性因子等，给预测肿瘤的存在与进展带来困难；PCR技术的出现与发展，能从标本中检出微量基因，且具有较好的灵敏度与特异度[13]，因此成为越来越多的分子生物学肿瘤标志物的检测方法之一。本研究结果提示肺癌病理背景下痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达增高，痰中的端粒酶及其催化基团mRNA阳性检出具有提示肺癌的肿瘤标志价值。同时，肺癌病情进展甚至死亡均与痰中端粒酶及其催化基团mRNA表达增高存在关联，痰中的端粒酶及其催化基团mRNA高阳性率提示病情恶化及不良的预后。

另外，无论是组织中，还是外周血中，抑或是痰液等分泌物中的端粒酶催化基团mRNA表达与肺癌的发生与进展存在关联，其内在机制均与p53基因突变密切关联[14]。相关机理以及通路等详情有待今后继续纵深研究。