防城港市2292例女性宫颈HPV感染与基因分型分析

蓝家富

人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是一种致病性很强的DNA 病毒，根据其致病能力大小可分为高危和低危2 个亚型［1］。研究证实HPV感染是引起宫颈癌以及癌前病变等问题的主要因素，几乎在所有的宫颈癌患者中都能检测到HPVDNA 的存在［2］。越来越多的研究发现，HPV 的感染与基因分型在不同地理区域的感染率及型别分布均存在一定差异［3-4］。在女性中检测HPV 感染对宫颈癌的早期筛查和预防具有非常重要意义，同时也为该地区的HPV 流行病学特征和模式以及疫苗的研发与接种提供重要的参考资料。本研究对防城港市妇幼保健院妇幼科就诊的2 292 例女性患者宫颈脱落细胞进行HPV-DNA 检测和分型分析，以了解该地区女性宫颈HPV 感染与基因型分布情况，为该地区宫颈癌的早期防治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 样本收集

收集2015年3月24日至2018年9月18日在本院妇幼科就诊的2 292 例女性患者的HPV 检测样本，患者年龄18～68 岁，平均年龄（38.5±8.1）岁。所有患者均为首次进行HPV 检测，在检测前均未经阴道或宫颈治疗。宫颈脱落细胞样本由妇科医生使用专用样本采集器采集，随后将采集器置于加有专用细胞保存液的取样管中盖紧并作好标记，24 h 内完成样本检测，样本未进行检测前保持样本管直立并置于2～8℃条件下保存。

1.2 仪器与试剂

人乳头瘤病毒（HPV）分型检测试剂盒（PCR-膜杂交法）（包含HPV-DNA 提取试剂、PCR 扩增试剂、杂交试剂）以及配套的样本采集器和医用核酸分子快速杂交仪HHM-2 型均购自广东凯普生物科技股份有限公司。C100 Touch PCR 仪购自美国BIO-RAD 公司。小型台式高速离心机5424 型购自于德国eppendorf 公司。

1.3 检测方法

HPV 基因分型检测采用凯普HPV 分型试剂盒和医用核酸分子快速杂交仪进行检测，采用BIORAD C100 TOUCH PCR 仪进行PCR 扩增。所有操作均严格按照仪器和试剂盒说明书规范进行。每批实验均设有阴、阳性质控对照，确保每批检测结果准确可靠。该HPV 分型检测试剂盒可检测出世界卫生组织公布的与宫颈癌密切相关的15 种高危亚型（HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68），还可检测出6 种低危亚型（HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44、HPV CP8304）。

1.4 统计分析

所有统计分析均使用SPSS19.0 统计软件进行处理，计数资料比较采用卡方检验，P＜0.05 认为差异存在统计学意义。

2 结果

2.1 HPV 感染率以及感染类型分布

每一批实验都设有对照组，HPV 感染阴性的样本结果如图1所示；HPV-52 感染的样本结果如图2所示；HPV-16 感染样本结果如图3所示。本研究共对2 292 例样本进行HPV 基因检测，其中共发现350 例HPV-DNA 阳性样本，感染率为15.27%（350/2 292）。其中有294 例患者样本属于HPV 单一亚型感染，占全部阳性样本的84.00%（294/350），占所有样本的12.83%（294/2 292）。

图1 阴性样本Figure 1 The negative samples

图2 HPV-52 型Figure 2 Type HPV-52

图3 HPV-16 型Figure 3 Type HPV-16

2.2 HPV 多重感染

本研究发现350 例HPV-DNA 阳性样本，有56例患者样本属于HPV 多重亚型感染，占全部阳性样本的16.00%（56/350），占所有样本的2.44%（56/2 292）。其中双重感染例数最多，占全部阳性样本的12.00%（42/350）。感染型别最多为三重感染，占全部阳性样本的4.00%（14/350）。最常见的多重感染模式是HPV52 和HPV58，为8 例，占全部阳性样本的2.29%（12/350）。具体分布见表1。

表1 HPV 单一亚型感染及多重感染分布（n=350）Table 1 Distribution of single and multiple HPV infection subtypes（n=350）

2.3 HPV 感染患者中基因亚型分布

该HPV 分型检测试剂盒能检测出的21 种HPV 基因亚型在本研究中均有检出，其中HPV52 感染在阳性感染患者中所占比列最高，其感染率为4.01%（92/2 292）；其次是HPV16，感染率为1.96%（45/2 292）；随后是HPV58，感染率为1.83%（42/2 292）；HPV35 感染率最低，为0.09%（2/2 292）。具体及其他基因亚型分布见表2。

2.4 不同年龄组HPV 感染分布情况

本研究所收集病例样本中，年龄最小为18 岁，最大68 岁。各年龄组间HPV 感染率差异存在统计学意义（χ2=65.855，P＜0.01）。18～20 岁年龄组虽然受检者人数少，只有28 例，但感染率最高，达到39.29%。其次是60 岁以上受检者，感染率为22.50%，再次是20～29 岁受检者，感染率为16.09%。见表3。

3 讨论

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，其发病率高，每年全世界新发病例超过50 万例，该病近年来发病率仍在持续上升并呈年轻化趋势［5］。HPV 基因分型检测是有效筛查宫颈癌的方法之一，预防和降低宫颈癌的发生首先要了解各地区的感染状况以及其基因分型分布的特点。陈捷等［6］对福建中医药大学附属人民医院妇科及体检中心收集的样本研究报道的HPV 总感染率为17.18%；郭晓霞等［7］对中国人民解放军北京军区总医院自愿进行宫颈癌筛查样本研究报道的HPV 总感染率为17.48%。曾选等［8］对江西省妇幼保健医院门诊就诊和住院收集的样本研究报道的HPV 总感染率为29.98%。而李春龙等［9］对深圳地区的5 545 例女性进行HPV 感染筛查，结果共发现有3 106 例阳性患者，其感染率高达56.01%。上述研究结果表明不同地区HPV 感染率存在差异。笔者研究发现防城港市妇幼保健院妇幼科收集的HPV 样本中，其感染率为15.27%，与陈捷、郭晓霞等的研究结果相似，但与曾选、李春龙等的研究结果相差较大。这可能与地域、人群分布、社会习惯、生活方式、样本数量以及检测方法等因素有关。过早性行为以及同时拥有多个性伴侣，会显著增加HPV 多重感染风险，本研究发现本地区HPV 感染以单一亚型感染为主，最多为三重感染。通过对三重感染病例进行分析，发现三重感染的绝大部分为年龄较大者。有研究报道称目前世界范围内共同的最常见的基因型为HPV16 亚型，其阳性率在宫颈癌中的可高达51.00%～81.25%［10］。HPV52 和HPV58 是亚洲国家人群HPV 感染的2 个主要基因亚型，其检出率在中国、日本等亚洲国家中较高［11-12］。本次研究结果显示，在本地区15 种高危HPV 亚型均有分布，其中最主要为HPV52、HPV16、HPV58 型。在中国东南沿海地区比如浙江、上海、福建以及广东一些地区的人群中HPV52 感染具有较高的检出率［13-14］。李智敏等［15］对广东潮州地区流行病学调查显示HPV52、HPV16 亚型在该地区HPV 感染率具有绝对优势，分别为27.50%和15.47%。李发涛等［16］对广州地区HPV 感染流行病学研究表明，该地区HPV52、HPV16 感染检出频率最高，依次为25.44%和17.86%。赵丽辉等［17］对中山市女性HPV 基因分型检测分析结果显示感染率排前三分别为HPV52、HPV16，HPV58 型，检出率分别为9.38%、6.61%和5.86%。研究结果与以上结果非常相似，表明在华南地区HPV52、HPV16 亚型是HPV 感染最常见亚型，HPV 感染亚型具有地域特异性。

表2 HPV 感染患者21 种基因亚型分布Table 2 Distribution of 21 HPV subtypes in patients with HPV infection

表3 不同年龄组HPV 感染分布（n=2 292）Table 3 Distribution of HPV infection among different age group（n=2 292）

初次性生活的年龄、2 个以上的性伴侣、吸烟、未使用避孕套、免疫缺陷与抑制等都是宫颈高危型HPV 感染的相关因素，其中年龄是影响宫颈高危型HPV 感染最重要的因素之一［18］。研究资料表明不同年龄组人群HPV 感染检出率存在明显差异，Smith 等［19］认为女性年龄不大于25 岁是HPV感染的高发期，随后年龄越大，感染越低。而王莉娜等［20］研究发现女性年龄不大于20 岁组患者感染率最高，随后随后年龄越大，感染越低，但当年龄大于50 岁后HPV 感染率增高。本研究发现有相似趋势，其中18～20 岁年龄组HPV 感染率最高，为39.29%，但由于检测人数少只有28 人，加之该年龄组病人只有在临床不适或症状较严重时才来医院进行检查。因此，该年龄组高感染率可能存在误差，造成感染率高的假象。其次，≥60 岁年龄组患者HPV 感染率也较高，为22.50%，这一方面可能与该时期女性卵巢功能和雌激素水平的生理性下降从而引起机体免疫力降低，对病毒清除能力减弱，进而导致其HPV 感染率升高有关。另一方面与本次研究纳入的样本数少有关，只有40 例。所以，后续有必要加大这2 个年龄组女性患者的HPV 基因分型检测筛查范围。本研究也提示需进一步加强对60 岁以上以及20 岁以下女性人群进行HPV 基因分型检测普查，宣传防控HPV 感染知识，提高自我防护意识。

综上所述，本研究为防城港市女性后续HPV感染的诊断、HPV 疫苗的研制、接种以及为宫颈癌的防治提供重要的参考依据。同时也建议将HPV分型检测纳入到该地区妇女宫颈疾病普查项目，做到早筛查、早诊断、早干预、早治疗，从而降低本地区宫颈癌的发生率。