脂溢性角化病病变组织NF-κB P65表达的变化及与炎症的相关性

王 成，杜 镇，冯世军，王翠芹，王艳心，李保强△

（1.承德医学院附属医院，河北承德 067000；2.沧州市中心医院）

脂溢性角化病（seborrheic keratosis，SK）又称老年疣、老年斑、基底细胞乳头瘤，是因角质形成细胞成熟迟缓所致，具体发病机制至今不明，是一种多见于老年人的良性肿瘤，但也存在恶变的可能。NF-κB为核转录调节因子，有研究表明，NF-κB可通过持续活化促进肿瘤细胞增殖、减少其凋亡，NF-κB还可通过上调血管内皮生长因子促进血管新生，以及通过诱导基质金属蛋白酶的表达提高肿瘤细胞的浸润和转移能力，因此，NF-κB与肿瘤的发生、发展等多个环节有关[1]。NF-κB P65作为NF-κB家族的一员，在肿瘤的发生发展过程中也发挥着重要作用，目前在多种肿瘤的研究中逐渐增多。炎症诱发肿瘤是当今医学前沿的重要问题，炎症与NF-κB P65在肿瘤的研究中越来越受到重视。为此，本研究观察了NF-κB P65及炎症在脂溢性角化病中的变化情况，探讨了二者在脂溢性角化病发生发展中的可能作用。

1 材料与方法

1.1 临床资料 2012年-2014年本院皮肤科就诊的77例脂溢性角化病患者手术切除的病变组织，其中头面部17例、躯干42例、四肢18例，男性47例、女性30例，患者平均年龄（54.83±14.00）岁，均经病理检查确诊。以距离病变边缘0.5cm手术切除的组织作为病变周围组织，共77例。另选取正常皮肤组织10例，男性4例、女性6例，平均年龄（48.00±12.61）岁，为手术切除的色素痣周围正常皮肤。所取组织均在中性甲醛中固定后常规石蜡包埋，连续切片，切片厚度5μm，用于免疫组织化学染色和HE染色。HE镜下观察发现77例脂溢性角化病病变组织中62例真皮内合并单一核细胞浸润（炎症），病变周围组织中有13例合并炎症。

1.2 主要试剂与设备 兔抗人NF-κB P65（M270），购自美国Bioworlde公司；即用型快捷型免疫组织化学Max VisionTM试剂盒、DAB显色试剂盒，购于福州迈新生物技术开发有限公司。S325石蜡切片机，英国Shandon Finesse公司；Wd750ASL23微波炉，广东格兰仕集团公司；BX40F4显微镜，日本Olympus公司。

免疫组化染色结果根据Fromowitz[2]的综合计分法进行统计，在高倍镜下（10×40）观察：①阳性染色强度：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色3分；②阳性细胞百分比：＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，≥76%为4分。两项结果相加为最终结果：＜2分为阴性（-），2～3分为弱阳性（+）、4～5分为中度阳性（++）、6～7分为强阳性（+++），以（+）及以上统计为阳性结果。

1.3 免疫组织化学染色及结果判断 采用Max VisionTM免疫组织化学染色法检测脂溢性角化病病变组织、病变周围组织及正常皮肤NF-κB P65的表达情况。切片常规脱蜡、水化、烘片，自来水冲洗，3% H2O2室温孵育，微波炉抗原热修复，血清封闭，一抗4℃过夜，滴加二抗，DAB显色，苏木素复染。以PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性结果的组织切片作为阳性对照。

1.4 统计分析 数据分析采用SPSS 19.0统计软件，率的比较采用四格表法卡方检验，相关性分析采用Spearman法，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

77例脂溢性角化病病变组织NF-κB P65的阳性表达率为88.31%，明显高于病变周围组织（阳性率为14.29%）及正常皮肤组织（阳性率为0），差异有统计学意义（P＜0.05）。77例脂溢性角化病患者病变组织中伴有炎症的百分率（80.52%）明显高于病变周围组织（16.88%）及正常皮肤组织（0），差异有统计学意义（P＜0.05）。Spearman相关分析显示，脂溢性角化病病变组织中NF-κB P65的表达与炎症呈正相关关系（r=0.769，P＜0.05）。见图1-4及附表：

附表 脂溢性角化病病变组织、病变周围组织及正常皮肤组织NF-κB P65的阳性表达情况及伴炎症情况

图1 脂溢性角化病病变组织NF-κB P65的阳性表达

图2 脂溢性角化病病变周围组织NF-κB P65的阳性表达（×400）

图3 正常组织NF-κB P65的阴性表达（×400）

3 讨论

脂溢性角化病好发于40岁以上的人群，白种人更常见，美国人的发病率高达20%[3-4]，但具体发病机制不明。据报道[5]，脂溢性角化病与遗传、免疫缺陷、病毒感染、紫外线照射等有关。脂溢性角化病虽然是皮肤肿瘤中常见的良性肿瘤，但近年来也有恶变的报道[6-7]。

NF-κB是一种核转录调节因子，可与相关基因启动子或增强子特异性结合，转录调控相关靶基因，进而控制细胞的增殖、分化和凋亡等过程。NF-κB转录因子家族包括Rel（c-Re1）、RelA(p65)、RelB、NF-κB1(p50/p105)和NF-κB2(p52/p100)五个成员[8]，可以同源或异源二聚体的非活性形式存在于几乎所有细胞的胞质中，其活性最强的形式通常是P50/P65两个亚基组成的异源二聚体[9]。在某些情况下，如紫外线刺激，P65亚基可直接诱导PKCδ的表达激活JNK通路，在表皮细胞中JNK可以促进细胞增殖，而细胞增殖又对NF-κB具有激活作用，活化的NF-κB通过上调多种凋亡抑制蛋白如c-IAP1、c-IAP2等的表达，使肿瘤细胞免受凋亡[10]。还有研究表明，NF-κB还可通过抑制细胞自噬发挥抗凋亡作用[11]。目前，NF-κB P65在肿瘤中的研究逐渐受到重视，一些肿瘤，如卵巢癌、皮肤鳞状细胞癌、弥漫大B细胞淋巴瘤、子宫内膜样癌、结肠癌组织中NF-κB P65的表达异常增高[9、12-15]。因此，检测NF-κB P65在脂溢性角化病中的表达情况，有助于为该病的发生、发展提供参考。

图4 脂溢性角化病真皮浅层单一核细胞浸润（炎症，×100）

本研究结果显示，脂溢性角化病病变组织中NF-κB P65的阳性率为88.31%，明显高于病变周围组织及正常组织。脂溢性角化病病变组织中NF-κB P65高表达提示，NF-κB P65可能在脂溢性角化病的发生、发展过程发挥重要作用。肿瘤的发生有多种机制参与，研究者们一直在探讨炎症与肿瘤之间的关系。KARIN等[16]的研究提示肿瘤的发生与炎症有关，许多炎症因子如TNF、IL-6等可激活NF-κB通路，进而促进肿瘤的发生与发展。为此，本研究亦同时观察了脂溢性角化病病变组织并发炎症的情况，结果显示脂溢性角化病病变组织伴炎症的百分率（80.52%）明显高于病变周围组织和正常皮肤组织，且在脂溢性角化病病变组织中NF-κB P65的阳性表达与炎症呈正相关关系。

综上所述，虽然脂溢性角化病的具体发病机制仍不明确，但在该病的发病过程中NF-κB P65和炎症可能具有协同作用，二者相互促进，共同参与了脂溢性角化病的发病过程。