山东东部地区规模化奶牛场引起奶牛呼吸道综合征的4种常见病毒血清学调查

陈凤梅 程光民 曹雷 胡士林（山东畜牧兽医职业学院 山东 潍坊 261061 ）



山东东部地区规模化奶牛场引起奶牛呼吸道综合征的4种常见病毒血清学调查

陈凤梅 程光民 曹雷 胡士林*（山东畜牧兽医职业学院 山东 潍坊 261061 ）

为了解目前山东东部地区牛病毒性腹泻黏膜病病毒、传染性鼻气管炎病毒、呼吸道合胞体病毒、副流感病毒3型这4种病原的感染情况，为疫病防控提供依据，从山东潍坊、烟台、青岛、威海等地区采集牛血清样品380份，采用ELISA方法进行了4种病毒的抗体检测。结果显示，BVDV抗体阳性率为62.11%；IBRV gB抗体阳性率最低为42.63%；BRSV抗体阳性率82.11%；BPIV3抗体阳性率81.05%，BRSV和BPIV3感染情况基本持平。被调查的14个牛场有12个牛场曾发生过4种病毒的感染，4种病毒均感染过的牛的比率在83.68%(318/380)。研究表明，山东东部地区多数规模化奶牛场存在这4种病毒的感染。

目前奶牛呼吸道综合征给在奶牛场时有发生有愈演愈烈之趋势。其中牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和牛流行性腹泻病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)等病毒性病原及巴氏杆菌等细菌性病原共同感染，是主要引起牛呼吸道综合症(Bovine respiratory disease complex，BRDC)的原因，感染率可达到100%，死亡率可达35%或更高，给养牛业造成严重的经济损失[1-2]。（1）为了了解目前山东东部地区规模化奶牛场这4种病毒的感染情况，为牛场疫情预测及疫病防控提供依据，2017年8月至2018年5月，本团队随机选取山东东部地区14个规模化奶牛场进行了此次调查，所选牛场均未免疫上述4种传染病疫苗。（2）牛病毒性腹泻—黏膜病(bovine viral diarrhea-mucosal disease，BVD-MD)是由牛病毒性黏膜病病毒引起的一种传染病，临床上以发热、腹泻、黏膜糜烂、白细胞减少、流产或产畸型胎儿为主要特征，该病毒属于黄病毒科、瘟病毒属，是世界各地奶牛和肉牛发病、死亡以及造成经济损失的一个重要原因。病毒引起的急性疾病称为牛病毒性腹泻，引起的慢性持续性感染称为黏膜病。1980年以来，我国从西德、美国、加拿大、新西兰等10多个国家引进奶牛和种牛，因处理不当造成陆续在20多个省市自治区检出此病[3]。（3）牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis，IBR)又称“坏死性鼻炎” “红鼻病”，是牛疱疹病毒I型(BHV-1)引起的一种牛的呼吸道感染和繁殖障碍传染病，主要表现为传染性鼻气管炎、眼结膜炎、高热、流产、脑炎等。20~60日龄的犊牛、奶牛和肥育牛的易感性最高。运输、密饲或分娩所引起的应激后暴发。自然病例潜伏期为2~6d。此病目前在世界范围内流行，对乳牛的产奶量、公牛的繁殖力及役用牛的使役力均有较大影响。在一些地区，IBR病毒抗体阳性率极高。（4）牛呼吸道合胞体(Bovine respiratory syncytial，BRS)是由牛呼吸道合胞体病毒(Bovine respiratory syncytial virus, BRSV)引起的牛呼吸道疾病。该病毒属于副黏病毒科肺病毒属。犊牛感染BRSV常导致严重的毛细支气管炎和肺炎，严重者可死亡；15~18月龄牛发病率高达80%~100%；在一些牛场急性感染牛的死亡率为5%~20%[4]，给养牛业造成了巨大的经济损失[5]。1967年，该病毒在日本、比利时和瑞士首次检出，并不久在英格兰和美国分离到该病毒。目前已在所有品种的牛、绵羊、山羊和其他有蹄类动物中发现。近年来，我国分别从美国、日本、加拿大、澳大利亚等BRSV感染高发国引进各种高产牛，导致BRSV在我国发生和流行[6]；因此了解该病在我国的流行情况，进而做好防控至关重要。（5）牛副流行性感冒是由牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus 3，BPIV3)引起的牛的急性接触性呼吸道传染病，广泛流行于世界各国。BPIV3属于副黏病毒亚科呼吸道病毒属，在呼吸道继发细菌感染时发挥着重要作用，是引发运输热或呼吸道综合征的首要因素[5]。在有压力的环境下，牛副流感病毒3型的单独感染或混合感染(牛病毒性腹泻黏膜病、冠状病毒、传染性鼻气管炎、呼吸道合胞体病毒等)的情况下，通常会导致细菌感染，尤其是巴氏杆菌的感染。呼吸道内皮细胞是BPIV3的最初靶细胞，但是2型肺细胞和肺泡巨噬细胞也会被感染，进而扰乱肺部正常防卫和清除机制，从而使机体更易受细菌感染导致肺炎。目前该病在世界范围内流行，尤其是美洲和亚洲，每年都给养牛业造成严重的经济损失[8]。我国在近期才开始研究该病毒，根据最近几年的文献报道，BPIV3己经在我国内蒙古、黑龙江、吉林、山东、山西和新疆等地存在[9-11]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 随机选取山东东部地区14个规模化奶牛场，从中随机选择荷斯坦奶牛，TMR饲喂，2次/d挤奶。

1.1.2 仪器 （1）牛病毒性腹泻-黏膜病抗体检测试剂盒(美国IDEXX公司生产)。（2）传染性鼻气管炎病毒gB抗体试剂盒(美国IDEXX公司生产)。（3）牛呼吸道合胞体间接ELISA抗体检测试剂盒(BIO-X公司生产)。（4）牛副流感病毒3型间接ELISA抗体检测试剂盒(BIO-X公司生产)。

1.2 方法

1.2.1 血样的采集 用10ml注射器随机采取奶牛尾静脉血大约5ml，立即将血液注入真空采血管，静置，冷藏，尽快以3000rpm/min离心10min分离血清以备检测。

1.2.2 检测方法 （1）牛病毒性腹泻-黏膜病抗体的检测按照说明书进行。（2）传染性鼻气管炎病毒gB抗体的检测按照说明书进行。（3）牛呼吸道合胞体抗体检测按照说明书进行。（4）牛副流感病毒3型抗体检测按照说明书进行。

1.2.3 统计学分析 检测结果按照阳性、阴性进行判定，统计每个奶牛场牛病毒性腹泻—黏膜病、传鼻、呼吸道合胞体和副流感3型的血清抗体阳性率。

2 结果与分析

4种牛常见呼吸道疾病血清抗体检查结果(见附表)。

附表 4种病毒血清抗体检查结果 （%）

疾病BVD IBR BRSBPI3 牛场编号样品数阳性数阳性率样品数阳性数阳性率样品数阳性数阳性率样品数阳性数阳性率 1401537.50413073.1724241002424100 2393692.30322371.88322887.50322887.50 3292793.10241562.5028281002828100 419736.842328.70361233.30361233.30 53937.693200.00282485.70282485.70 618181002414.1724241002424100 7252184.0028517.8624833.3024833 8282485.713326.06282071.40282071.40 93000.002514.0024241002424100 10161593.7513861.54282485.70282485.70 1110880.0010550.00282485.70242083.30 12493163.27493673.472824100282485.70 13191789.47232191.30242485.70282485.70 14191263.16231356.5224241002424100 合计38023462.1138016242.6338031282.1138030881.05

2.1 牛病毒性腹泻-黏膜病血清情况 依据BVDV血清抗体阳性率超过80%的牛场判定为BVDV高风险牛场(至少有一头BVDV持续感染牛的存在)[12]，被调查的14个牛场中，有8个被判定为高风险牛场，其中1个牛场阳性率100%，4个牛场阳性率在90%以上。数据表明，被调查的牛场中有57.14%的牛场存在BVDV的持续感染；山东东部地区BVD血清抗体平均阳性率为62.11% (234/380)。

2.2 传染性鼻气管炎血清情况 依据曹杰等[13]提出的 IBRV血清抗体阳性率超过40%的小区和牛场判定为IBRV高风险牛场(可能出现明显的临床表现)，被调查的14个牛场中，有9个被判定为高风险牛场，4个牛场阳性率在70%以上，1个牛场阳性率为零，2个牛场阳性率很低，综合分析得出山东东部地区IBRV血清抗体平均阳性率为42.57%(162/380)。

2.3 牛呼吸道合胞体抗体情况 在被调查的14个牛场中，有7个牛场阳性率100%，仅有2个牛场阳性率33%，其他在71.4%~100%之间，阳性率很高。山东东部地区BRSV血清抗体平均阳性率为82.11%(312/380)。

2.4 牛副流感病毒3型抗体检测情况 在被调查的14个牛场中，有6个牛场阳性率100%，仅有2个牛场阳性率33%，其他在80%以上，阳性率很高。山东胶东地区BPIV3血清抗体平均阳性率为81.05%(308/380)。

3 讨论

3.1 牛病毒性腹泻-黏膜病的血清 （1）BVDV感染会给奶牛养殖带来巨大的损失，需引起从业者的高度重视。2006-2013年间，很多专家调查了BVDV的流行情况，奶牛血清阳性率为22.5%~94.1%[14]。本次被调查的山东胶东地区14个牛场中，BVD血清抗体阳性率为62.17%，与王淑娟等[15]调查山东阳性率83.3%相比较低。本次调查牛场中有57.14%的牛场有BVDV持续感染牛(PI牛)的存在，说明山东潍坊及胶东地区牛场BVDV感染严重，应进行BVDV清除和控制。（2）在BVD净化策略中，BVD疫苗发挥积极的作用，通过联合应用灭活疫苗和弱毒疫苗，能有效防止胎儿的持续性感染和临床感染。BVDV 持续性感染牛是重要的传染源，目前，耳组织检测已应用于BVD持续性感染牛的鉴定[16]，连续一年无新生 BVD 持续性感染牛即表明牛群已经净化。牛群长久保持净化状态，仍需加强防疫检疫措施，严格执行新进牲畜的隔离检疫、消毒措施，严格产地、运输和交易市场及其进出口检疫，及时掌握牛场中BVDV的流行动态[17]。各大牛场需制定BVD清除计划，加强牛群中PI牛的检测，全群筛查淘汰PI牛，以逐步达到净化目的。

3.2 传染性鼻气管炎的血清 （1）IBR被OIE列为法定报告性动物疫病我国也将其列为进出口牛的必检疾病。IBRV感染可引起牛群广泛的免疫抑制，因而病畜常会继发感染其他病毒或细菌[18]。IBRV可损伤巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞，从而降低其免疫应答能力，抑制IL-2受体表达，降低外周血单核淋巴细胞有丝分裂的速度，减少循环T淋巴细胞数[19]。单核细胞和巨噬细胞被感染后会导致吞噬能力和抗体依赖性细胞毒性作用的减弱[17]。（2）该病在美国每年至少造成5亿美元的损失，我国尚未见有官方统计数据。据李栋梁等[23]调查北京地区IBRV阳性率在50.52%。在本次被调查的14个牛场中，总体IBR gB抗体阳性率为42.57%，该试剂盒可区分疫苗抗体和野毒感染产生的抗体，即本次被调查的对象牛中有42.57%的野毒感染牛。IBRV除了会引起呼吸道感染外还可也可引起流产，一般成母牛年流产率高于10%的牛场，除监测布氏杆菌病的感染情况以外，要加强对IBR的检测。（3）目前，许多发达国家正在使用基因缺失疫苗降低发病率和感染率，同时利用鉴别诊断试剂盒，检测、筛选出野毒感染牛，进行隔离饲养或直接淘汰，逐步使牛群得到净化。我国IBR感染形势严峻，应加大力度研发疫苗和检测方法，逐步实施IBR的控制和净化。

3.3 牛呼吸道合胞体抗体 牛呼吸道合胞体在牛群中的隐性感染是非常普遍的[7]。本次调查牛呼吸道合胞体血清抗体阳性率在82.11%。该病毒会引起肺部器官的纤毛上皮损伤，导致肺清除能力下降，从而诱发继发性细菌感染。G蛋白是及病毒蛋白中特有的，因其高度的O-linked糖基化的特性有助于逃脱免疫监控。尽管免疫对牛的合胞体病毒感染是不完备的和短暂的，但接种疫苗仍然是控制的常用手段。美国的数据表明，接种疫苗能减少与牛合胞体病毒感染相关疾病的严重暴发；无论如何新疫苗的研制仍在进行中，包括载体疫苗及其类似物。

3.4 牛副流感3型抗体 牛副流感是引起牛呼吸系统疾病最重要的病毒之一。因BPIV3多发生于运输后的牛，被认为是导致运输热的主要病毒[21]。但该病毒常和其他病原混合感染，很少发现该病毒单一致病现象。H gglund S等[22]对病毒引起的呼吸道系统疾病进行6年的研究发现，BPIV3在牛群中每年都会造成感染，并且具有很高的感染水平，Solís-Calderón JJ等[23]调查发现墨西哥肉牛BPIV3血清阳性率为85.6%。芬兰进行的牛血清学调查发现80%的血清样本呈BPIV3阳性[24]。我国霍志云等[25]调查BPIV3阳性率吉林97.35%，内蒙84.31%，山西95.15%。本次调查山东胶东地区BPIV3的阳性率81.05%。总之，从已经获取的调查资料得出BPIV3阳性率都很高。而目前我国尚未找到控制牛副流感病毒3型的相关疫苗，仅通过提高牛免疫力等途径控制牛呼吸道疾病综合征，应积极借鉴国外的防控机制，防止牛群病情加重。

3.5 牛场混合感染情况 所调查的引起奶牛呼吸道综合征的4种病毒病中，IBR平均阳性率最低为42.63%；BRSV抗体阳性率82.11%；BPIV3抗体阳性率81.05%，，BRSV和BPIV3阳性率很高，感染情况基本持平。被调查的14个牛场有12个牛场曾经发生过4种病毒的感染，4种病毒均感染过的牛的比率在83.68%(318/380)，有1个牛场BVD阴性，1个牛场IBR 阴性。经咨询，BVD阴性的牛场已经做过牛群中PI牛的净化。现在部分牛场已经意识到BVD所带来的弊端，开始实施净化，而其他3种病毒的重视程度还远远不够。总之，在山东东部地区，4种病毒的感染情况不容乐观，需要各部门配合做好相应的防控措施，以减少奶农经济损失。

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（2019–03–26）

山东省现代农业产业技术体系牛产业创新团队建设项目(SDAIT-09-05)

S858.23

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1007-1733(2019)05-0046-04