恒温扩增芯片法对下呼吸道标本细菌检测中的临床应用价值

蔡甜，陈振华，牛英波，唐波

（1.佛山市南海区人民医院，广东 佛山 528200；2.南京诺维赞医疗科技有限公司，江苏 南京 210034）

下呼吸道感染疾病是比较常见的一种感染性疾病，该疾病会严重威胁着人们的生命安全，感染该疾病的死亡率相对较高。以往我们都会通过细菌培养法来进行下呼吸道感染疾病的诊断，但是该方法存在消耗时间长、敏感度不强的特点。恒温扩增芯片法利用的原理是环介导恒温扩增，该方法能够直接检测出12种病原体[1]。本文即对恒温扩增芯片法对下呼吸道标本细菌检测中的临床应用价值进行讨论。

1 资料与方法

1.1 一般资料 结合我院检验科于2017年12月-2018年5月间收集的因下呼吸道感染或肺炎而入院的患者的合格痰标本94例。合格痰的标准为多形核白细胞在低倍镜视野下＞25，而鳞片上皮细胞在低倍镜视野下＜10。

1.2 仪器与试剂 恒温扩增芯片法的试剂盒、恒温扩增微流控芯片核算分析仪、细菌鉴定仪、血平板、培养基、抗酸染色试剂。RNA恒温扩增结核分枝杆菌核算试剂盒；结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒。

1.3 方法 首先进行标本的筛选，在低倍镜的视野下，多形核白细胞细胞＞25且鳞片上皮细胞＜10的标本被选入到研究的范围中。第二步进行合格痰标本的培养，合格痰标本与血平板，加万古霉素巧克力平板以及麦康凯平板进行接种，在含二氧化碳量为5%以及温度为35oC的环境下培养24 h或48 h，最后观察培养基的现象，对可能致病菌进行筛选[2]。第三步利用恒温扩增芯片法对病原体进行检测。用γ干扰素释放试验进行结核分枝杆菌的检测。

2 结果

共有94例合格痰样本，其中利用恒温扩增芯片法检测有42例被检验出了阳性，阳性率为44.7%。其中随着含病原体数目的增多，标本的数目越少。该实验检测出最多的病原体为流感嗜血杆菌，其次为肺炎链球菌，并没有检测出肺炎支原体以及嗜肺军团菌。利用细菌培养法检测出阳性的标本仅仅只有10例，跟恒温扩增芯片法检测出的标本之间相差很多。其中利用细菌培养法检测出的肺炎链球菌仅仅只有1株，流感嗜血杆菌仅仅只有3株。恒温扩增芯片法在结核分枝杆菌的检测中也具有高于其他检测方法的效果。

3 讨论

传统的细菌培养法不管在敏感性还是消耗时长方面都没有办法满足下呼吸道感染疾病治疗的需要。利用恒温扩增芯片法对病原体进行检测，发现这种方法能够同时检测出12种病原体，相比于传统的细菌培养法来说效果十分显著[3]。同时，该方法全过程种消耗的时间仅仅为2 h，相对于传统的检验周期来说有了明显缩短。

该实验共用到94株合格痰标本，利用恒温扩增芯片法能够检测出63株病原体，但利用传统的细菌培养法仅仅培养出了10株病原体，相比之下可以发现，恒温扩增芯片法的敏感性显著高于传统的细菌培养法。通过恒温扩增芯片法所检验出来的流感嗜血杆菌主要分布于下呼吸道，为下呼吸道的主要致病菌。利用传统的细菌培养法往往很难检测出流感嗜血杆菌以及肺炎链球菌。恒温扩增芯片法与细菌培养法在病原分布上存在着一定的差异，这主要是因为痰标本受到了口腔的污染或是实验室的检测条件不能满足实验的需要，导致病原体并没有被检测出来[4]。恒温扩增芯片法因为其自身更高的病原体检出率，所以更能清晰地表示出感染下呼吸道的真正病原体。

表1 不同检测方法对结核分枝杆菌的诊断效果比较

恒温扩增芯片法也能够对结核分枝杆菌进行检测，刘志远等[1]的研究中通过恒温扩增芯片法所检验出来的结核分枝杆菌阳性结果有8例，通过SAT-TB检测的有5例，其中有4例呈现阳性，通过IGRA检测的有7例，其中仅仅只有3例被检验出阳性，最后通过痰特殊细菌涂片以及染色的有7例，其中也是仅有3例为阳性。以检测能力来说，恒温扩增芯片法的检测能力与SAT-TB的检测能力相当，虽然SAT-TB中存在漏检的情况，但是因为样本量的限制，存在漏检情况也属于正常，并没有办法对两种方法进行明确区分。IGRA之所以仅仅检测出来3例阳性，主要原因可能是淋巴细胞不足或活性降低，从而导致出现了假阴性的效果，IGRA主要检测的就是淋巴细胞产生干扰素的能力。所以在进行此项检测前应首先进行淋巴细胞数量以及活性的检测，确保检测能够在淋巴细胞正常的情况下进行[5]。利用抗酸染色来进行检测不需要消耗太高的成本，同时也不需要繁琐的操作，但是其检验出的结果也不够准确，不具有较强的特异性。在临床的治疗中，最好不要使用抗酸染色来进行结核分枝杆菌的检测。

军团菌、肺炎支原体以及衣原体都属于不能进行常规培养的病原体，一般都是用血清学方法进行检测，但是该检测所需要的时间较长，往往会错过最佳的治疗时期。而恒温扩增芯片法能够弥补血清学方法存在的这些缺点，因为该方法所消耗的时间短，同时也能检测出来这三种病原体。该方法的应用能够帮助患者得到更好的治疗效果。

总而言之，恒温扩增芯片法能够更快速、更准确地诊断出下呼吸道感染疾病的病原体，同时阳性率也得到了大大的提高。恒温扩增芯片法相对于涂片抗酸染色等方法来说，能够提高结合的阳性检出率，并能发现军团菌等不是常规培养的病原体。该方法为下呼吸道感染疾病的诊断以及及时治疗提供了更多的便利。