改良抗酸染色在早期结核诊断中的研究

徐加誉，樊春卉，廖子龙

（深圳市盐田区人民医院，广东 深圳 518081）

当前，早期结核疾病的诊断是目前临床高度关注的热点，随着结核耐药菌株出现、免疫抑制剂应用、艾滋病的蔓延，结核病的发病率有了显著增高迹象，早期结核疾病临床症状不典型，极易被误诊或者漏诊，往往会导致患者错过最佳的治疗时间。故及早对结核疾病患者病情做出准确诊断，对于改善其预后意义重大[1,2]。在上述研究背景下，本文选定2016年11月-2018年11月本院检验科收集的150例结核标本进行研究，目的是为早期结核患者提供一种有效、科学的检测方法。

1 资料与方法

1.1 基线资料 选取2016年11月-2018年11月本院检验科收集的150例结核标本，女性68例，男性82例，年龄在20岁-92岁，平均年龄为（56.62±5.14）岁；体质量在42 kg-88 kg，平均体质量为（65.25±5.14）kg；痰、支气管灌洗液、胸腹水例数之比分别是28例、15例、48例、20例、39例。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 荧光定量PCR仪（型号：BIORAD；生产企业：济南来宝医疗器械有限公司）、细胞涂片离心机（型号：CytoFuge2；产地：美国，StatSpin）、37oC水浴恒温箱（型号：TF-HX-30C；生产企业：上海田枫实业有限公司）。

1.2.2 检测方法

1.2.2.1 PCR检测 采用荧光定量PCR仪，取3份单管单人份PCR反应管，直接加入2 µL阳性质控品、阴性质控品、处理后样品，离心数秒，置入荧光定量PCR仪中扩增，扩增要求：2 min预变性（93oC）、45 s预变性（93oC）、120 s预变性（55oC），10个循环后，置于33oC的温度中保温，将反应管逐个置入荧光检测仪中，45 s预变性（93oC）-120 s预变性（55oC），30个循环后，置于33oC的温度中进行保温处理。操作严格遵循相关标准进行。

1.2.2.2 传统抗酸染色方法与改良抗酸染色方法：取鹏一LCT细胞制片（生产企业：深圳鹏一医疗有限公司），将苯酚碱性品红液（贝索试剂技有限公司）滴入，置于微波中，低火8 min，以20%的硫酸水溶液分化，时间在1 min-5 min，Mayer苏木素复染。操作严格遵循相关标准进行。

1.3 观察指标与评价标准

1.3.1 PCR检测阳性判定标准 有效实验前提之下，PCR检测AxPI-N阳性，如果PI-A＞AxPI-N，则说明实验属于灰度区，实验应该重复1次，如果PCR检测结果为AxPI-N，则说明为阳性，否则即为阴性[3,4]。

1.3.2 抗酸染色阳性标准 以Z-N（萋尼氏染色法）镜检评价结果，不间断地观察视野300个，未见抗酸抗菌则说明抗酸杆菌阴性。抗酸杆菌菌数：300个视野或抗酸杆菌/1条-8条抗酸杆菌阳性（4+）、（3+）、（2+）、1（+），则说明为抗酸杆菌阳性[5,6]。

1.4 统计学方法 采用SPSS 25.0软件展开数据处理，计量资料以t检验；计数资料以卡方检验，P＜0.05为有明显差异。

2 结果

2.1 传统抗酸染色与改良抗酸染色结果对比 改良抗酸染色阳性率（41.33%）显著高于传统抗酸染色（36.36%）（P＜0.05），见表1。

2.2 PCR检测法与传统抗酸染色结果对比 PCR检测法检测阳性率（32.00%）与传统抗酸染色检测阳性率（36.36%）相比无明显（P＞0.05），见表2。

2.3 PCR检测法与改良抗酸染色结果对比 改良抗酸染色阳性率（41.33%）与PCR检测法（32.00%）无差异（P＞0.05），见表3。

3 讨论

近年来，在我国环境不断恶化的背景下，结核病的发生率有了显著增高迹象[7]。据不完全统计分析：我国结核病的发病率仅次于俄罗斯以及印度，且存在严重的耐药性，对患者身体健康以及生命安全构成了巨大威胁[8,9]。在结核疾病的诊断中，细菌学检测对生物级别安全的要求较高，检测时间普遍较长，且在检测结核抗体以及抗原方面效果较差[10]。PCR检测特异性相对较高，可检测到结核杆菌的存在，但敏感性较差，在结核杆菌检测中基因的变异性相对较大，所需要的检测时间较长，具有一定的局限性，故当前临床对于结核杆菌检测主要以抗酸染色检测为主[11]。当前，在我国医疗技术不断提升的背景下，结核病的死亡率明显降低，但由于部分患者临床症状缺乏特异性，确诊时疾病基本发展到了晚期，往往错过了最佳的治疗时间，明显增加了诊疗难度。在微创或者无创下胸腹水、穿刺组织液、尿、痰等液基细胞为结核病的诊断提供了理想的标本，具有分枝杆菌富集效果、经济快速制片、操作简单等优点，现已得到临床高度认可与赞同[12,13]。

本研究结果显示：改良抗酸染色阳性率显著高于传统抗酸染色（P＜0.05）；PCR检测与传统抗酸染色相比无差异（P＞0.05）；PCR检测与改良抗酸染色相比无差异（P＞0.05）。说明改良抗酸染色在结核病诊断中具有较高的准确性、可靠性，可作为早期结核病患者理想的诊断方法。分析原因如下：改良抗酸染色具有操作简单、经济适用、阳性率高等一系列优点，改良抗酸染色方法改良主要体现在以下几点：①前处理痰液标本，液化痰液标本，将包裹在痰液中的抗酸杆菌释放出来，进行取材。②以玻璃离心法在玻片0.8 cm的位置将有形成分聚集起来，一次性完成集菌、沉降等操作，将标本中有形成分最大限度浓集[14]。③抗酸染色之前，采用聚已二醇辛基苯基醚（Triton-X100）破膜处理标本，将非离子型表面活性剂作为破膜剂，将细胞膜上的部分脂质溶解，提高细胞膜通透性，确保胞内菌体容易着色，替代染色中的加热作用，简化操作步骤[15]。④改良抗酸染色法一般在30 min内即可检测完1个标本，具有经济实用、耗材花费低等优点，对于农村医疗资源可更好的利用。我国是一个经济发展中国家，将近50%的结核病人为农村居民，医疗条件以及卫生条件较差，因此对于大部分基层医院等卫生条件较差的医疗机构，改良抗酸染色检测法是一种低成本、高阳性率、快速、简单的检测方法，值得大力推广，给更多早期结核病患者带来福音。

综上所述，早期结核病诊断中采纳改良抗酸染色检测，显著提高了阳性检测率，可为临床医师制定治疗方案提供了更加严谨、科学的参考依据，值得临床信赖，并大力推广。

表1 传统抗酸染色与改良抗酸染色对比［n（%）］

表2 PCR检测法与传统抗酸染色对比［n（%）］

表3 PCR检测法与改良抗酸染色对比［n（%）］