819份不同痰标本来源分枝杆菌培养结果分析

陈世浩，袁奕武，王勇萍，林炳耀，梁晓晴

（佛山市第四人民医院检验科，广东 佛山 528000）

结核病迄今仍是全球重要的公共卫生问题，尽管结核病治疗已有许多进展，但结核病患者对抗结核药物耐药问题已日渐突出，成为结核病控制面临的最严峻问题。我国是全球22个结核病高负担国家之一，结核病患者例数居全球第二位，也是27个耐药结核病高负担国家之一[1]。在结核病控制工作中，通过实验室细菌学检查诊断传染性肺结核是全面监督化疗策略（DOTS）的要素之一，痰结核杆菌检查对于发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核疗效、评价防治效果具有重要意义[2]。分枝杆菌培养法灵敏度高于涂片法，可鉴定死菌与活菌，此外，分枝杆菌的分离培养也为菌种鉴定和药物敏感性测定提供菌株，被誉为结核病诊断的“黄金标准”[3]。由于佛山市各区结防机构实验室没有开展痰分枝杆菌培养，从2013年1月开始对各区涂阳痰标本集中收到佛山市第四人民医院检验科进行痰分枝杆菌培养。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2013年8月-2014年12月实验室共接收各区实验室耐多药可疑患肺结核涂阳的痰标本和本单位的门诊及住院确诊肺结核病人涂阳的痰标本共819份，进行分离培养。把819份涂阳痰标本根据不同标本来源时间分成两组：A组12 h内培养完成（住院肺结核病人，包括初治和复治），B组24 h-168 h培养完成（各区实验室耐多药可凝患肺结核痰标本和本单位门诊肺结核病人，包括耐多药可凝患肺结核、初治和复治）。

1.2 材料 染色液：萋尼抗酸染色液的配制按常规，培养基：L-J的配制按常规[2-4]。

1.3 方法 （1）痰标本直接涂片镜检采用《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》规定的萋尼染色法，具体参考文献[2]。（2）分枝杆菌分离培养检查方法采用《分枝杆菌分离培养标准化操作程序及质量保证手册》规定的分枝杆菌的分离培养简单法，具体参考文献[4]。（3）质量控制：实验室通过广东省结核病耐药性监测办公室检查验收，定期接受省参比实验室督导并参加国家参比实验室质控考核并通过，质控菌株为MTB标准株H37Rv（27294），来源于广东省结核病控制中心结核病参比实验室。

1.4 统计学处理 所有资料采用双录入方法录入Access数据库，Access设置自动核对提示，数据核对录入无误后采用SPSS 16.0统计软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 痰涂片镜检和培养结果 临床诊断的肺结核患者和耐多药可疑肺结核患者的涂阳痰标本819份，涂片结果分别：1条-8条占，1+占，2+占，3+占，4+占。总819份痰涂片阳性标本分离培养结果：分离培养阳性709份，占86.57%（709/819），培养阴性77份，占9.47%（77/819），培养污染33份，占4.03%（33/819）；A组460份痰涂片阳性标本分离培养结果：分离培养阳性419份，占91.09%（419/460），培养阴性31份，占6.74%（31/460），培养污染10份，占2.17%（10/460），B组359痰涂片阳性标本分离培养结果：分离培养阳性290份，占80.78%（290/359），培养阴性46份，占12.81%（46/359），培养污染23份，占6.41%（23/359）。见表1。

1.2 涂阳培阴与涂片结果分布 总涂阳培阴77份痰标本中：1条-8条23份占29.87%（23/77），1+42份占54.54%（42/77），2+10份占12.98%（10/77），3+1份占1.29%（1/77），4+1份占1.29%（1/77），A组涂阳培阴31份痰标本中：1条-8条10份32.25%（10/31），1+17份占 54.83%（17/31），2+4份占12.90%（4/31），3+0份占0%（0/31），4+0份占0%（0/31），B组涂阳培阴46份痰标本中：1条-8条13份占28.26%（13/46），1+25份占54.34%（25/46），2+6份占13.04%（6/46），3+1份占2.17%（1/46），4+1份占2.17%（1/46）。见表2。

3 讨论

对临床诊断的肺结核患者和耐多药可疑肺结核患者涂阳标本819份培养结果分析显示，A组涂阳培阴率6.74%（31/460），明显低于对于未治疗的患者，符合一般涂阳培阴率不超过10%的有关报道[5]。B组涂阳培阴率12.81%（46/358），高于对于未治疗的患者，符合一般涂阳培阴率不超过10%的有关报道[4]。A组污染率2.17%（10/460），明显低于使用4%氢氧化钠简单法的污染率不超过5%的有关报道[6,7]。分析目前B组比A组患者痰标本出现涂阳培阴率和污染率高原因：（1）B组标本不能及时进行培养，可能在保存过程结核分枝杆菌会发生自溶或死掉。（2）当痰标本不能及时处理时其他细菌就很容易生长，特别是真菌生长更快，如果痰中有真菌使用4%氢氧化钠前处理是很难杀灭。

从表2看出总的涂阳培阴标本涂片痰菌量97.4%（75/77）在2+以下，高于文献涂阳培阴标本涂阳痰菌量87.9%在2+以上[8]，A组涂阳培阴标本涂片痰菌量分布1+＞8条＞2+，B组涂阳培阴标本涂片痰菌量分布1+＞8条＞2+＞3+、4+，这些涂片结果看出：（1）涂阳培阴与痰菌量有一定的相关性；（2）有可能是由于结核药物的作用使化疗后患者痰标本中的野生株活力低，表现为涂片阳性培养阴性和阳性生长时间延长；（3）结核分枝自然变异的影响[9]。

表1 涂阳培养结果分布

表2 涂阳培阴与涂片结果分布

综合以上数据分析表明，应在保证痰标本质量和培养基品质的前提下，做到以下几点：（1）严格规范无菌操作流程，严格掌握前处理液的浓度、与痰标本的比例和接种量，降低污染率，提高培养阳性率；（2）对菌量少的痰标本可以进行离心法进行培养，提高养阳性率；（3）对抗酸杆菌涂片阳性使用抗结核药物治疗的标本，在进行分枝杆菌分离培养检查时，可适当延长培养结果时间，有助于提高涂阳培率。