盐酸溴己新滴鼻剂的研制及含量测定与透皮性能评价

金伟华，蒲志强，陈 华，于波涛，罗钰洁

(1.西部战区总医院药剂科，四川 成都 610083；2.西南医科大学药学系，四川 泸州 646000)

盐酸溴己新是临床常用祛痰药，有较强的溶解粘痰作用，属黏液调节剂，该药可直接作用于支气管腺体，促使黏液分泌细胞的溶酶体释出，使痰中的黏多糖纤维分化裂解，还可抑制黏液腺和杯状细胞中酸性糖蛋白的合成，使之分泌黏滞性较低的小分子糖蛋白，从而使痰液的黏稠度降低，易于咳出。临床适用于急、慢性支气管炎及其他呼吸道疾病，如肺气肿、哮喘、支气管扩张等痰液黏稠不易咳出的患者。目前已有片剂、注射剂等剂型。临床上常有用盐酸溴己新注射液雾化吸入给药，但在2016年《雾化吸入疗法在呼吸疾病中的应用专家共识》[1]中已明确指出，静脉制剂不推荐雾化使用。从患者用药角度考虑，经鼻腔用药吸收快，生物利用度高，使用方便，尤其适合于儿童，进而可提高患者用药依从性，同时可避免首过效应，减轻胃黏膜刺激，降低患者不适感。为此，本研究对制备的滴鼻剂进行了体外透皮试验，累积透过率较满意，证明作为滴鼻剂可透过鼻黏膜发挥治疗作用。

1 试验材料

1.1 仪器

1200型HPLC仪(美国安捷伦公司)；PHS-3C精密pH计(上海康仪仪器有限公司)；AL204型电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]；HH-S24S数显恒温水浴锅(上海君竺仪器制造有限公司)；改良的Franz扩散池(自制)。

1.2 试药

盐酸溴己新对照品(含量≥98%，批号15159，Med Chem Express LLC)；液状石蜡(吉林市吉化江城油脂化工有限责任公司，批号170101)；无水乙醇(含量≥99.7%中国长江磷化股份有限公司，成都市科隆化学品有限公司)；甲醇为色谱纯；水为超纯水；冰醋酸、三乙胺均为国产分析纯，盐酸溴己新滴鼻剂供试品自制(规格：0.1%，批号：180310、180311、180312)。

1.3 动物

雄性KM小鼠[20～25 g，成都达硕实验动物公司，生产合格证SCXK(川)2015-030]。

2 处方与制备

2.1 处方

盐酸溴己新1.0 g，无水乙醇50 ml，加液状石蜡制成1 000 ml。

2.2 制备

取适量液状石蜡与无水乙醇混合，加入盐酸溴己新，搅拌均匀，然后加液状石蜡至全量，搅拌并超声使药物均匀分散，即得。

3 含量测定

3.1 色谱条件

Eclipse XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-醋酸溶液(取冰醋酸40 ml置于1 000 ml容量瓶，加水定容至刻度，用三乙胺调节pH至3.2)(55∶45)；流速：1 ml/min；柱温：30 ℃；检测波长：247 nm。

3.2 溶液的制备[2]

对照品溶液：精密称取盐酸溴己新对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1 ml中含盐酸溴己新约187.2 μg的溶液，即得，作为对照品储备液备用。

供试品溶液：取同批次的盐酸溴己新滴鼻剂10 ml，用50 ml流动相进行萃取，分取下层溶液，用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

阴性对照溶液：取不含盐酸溴己新的阴性样品10 ml，同供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。

3.3 系统适应性试验

按“3.1”项下色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl，注入色谱仪，测定，即得，结果见图1，阴性无干扰，专属性良好，理论板数按盐酸溴己新峰计算不低于3 000。

图1 盐酸溴己新滴鼻剂HPLC图 A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性对照溶液；1.盐酸溴己新

3.4 线性关系考察

精密量取盐酸溴己新对照品储备液(浓度为187.2 μg/ml)，加流动相溶液分别稀释制成浓度为37.44、74.88、112.32、149.76 μg/ml的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以进样浓度(X)为横坐标，盐酸溴己新峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=11.996X+124.6(r=0.999 9)。结果表明，盐酸溴己新在37.44～187.2 μg/ml浓度范围内呈良好线性关系。

3.5 精密度试验

精密吸取“3.2”项下盐酸溴己新对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，重复测定6次，记录峰面积，计算盐酸溴己新RSD为0.44%，表明仪器精密度良好。

3.6 稳定性试验

取盐酸溴己新滴鼻剂(批号：180303)，精密量取，按“3.2”项下方法制成供试品溶液，分别于0、2、4、8、24 h进样，记录峰面积，计算盐酸溴己新RSD为0.97%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

3.7 重复性试验

精密量取同批次盐酸溴己新滴鼻剂6份(批号：180303)，按“3.2”项下方法制成供试品溶液，分别进样测定，记录峰面积，计算盐酸溴己新RSD为0.63%，表明该方法重复性良好。

3.8 回收率试验

按照处方比例配置缺溴己新空白基质滴鼻剂样品，然后精密量取空白基质样品3份，每份10 ml，再分别精密加入低、中、高浓度的溴己新对照品溶液(浓度分别为0.609、0.734、0.871 mg/ml)10 ml，依次用50 ml流动相进行萃取，分取下层溶液，用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，进样测定，记录峰面积，计算回收率，结果低、中、高3种浓度的样品平均回收率分别为104.00%、101.59%、98.51%(n=9)，RSD为0.89%、1.35%、0.35% ，结果见表1。

表1 盐酸溴己新滴鼻剂回收率测定结果(n=9)

3.9 样品含量测定

取批号分别为180310、180311、180312的盐酸溴己新滴鼻剂，按“3.2”项下的方法制备供试品溶液，进样测定，记录峰面积，计算3批样品的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)

4 体外透皮试验

4.1 离体鼠皮制备[3]

取雄性KM小鼠，6%Na2S溶液褪除背部毛，用生理盐水洗净皮肤，次日断颈处死，处死后立即剥离背部皮肤，去除皮下组织和脂肪等粘连物，用生理盐水清洗干净，放入生理盐水中4 ℃短期保存。使用前检查鼠皮完整性，不得有破损。

4.2 体外透皮试验[4-5]

采用改良的Franz扩散池，接收池体积为13 ml，接收池与离体皮肤之间的有效接触面积为2.5 cm2，流动相为接收介质。恒温水浴加热，温度控制在(37±1)℃，接收池内加入磁力搅拌子，以300 r/min恒速搅拌。

将保存的离体鼠皮用生理盐水清洗，固定在供给室和接收池之间，角质层朝上，真皮一侧与接收液充分接触，排尽气泡。精密量取2 ml摇匀后的盐酸溴己新滴鼻剂(批号：180311)，滴于试验皮肤上，打开磁力加热搅拌器。于1、2、4、6、8、12、24 h取接收液1 ml(立即补充同温等量空白接收介质)。采用HPLC法测定接收介质中盐酸溴己新含量并计算累积透过量Qn与累积透过率P。累积渗透量Qn的计算公式为:

累积透过率P=(累积透过量Qn/加样量)×100%

式中：Qn为第n个取样点的累积渗透量(μg)，Cn、Ci为第n个和第i(i≤n-1)个取样点的盐酸溴己新质量浓度(μg/ml)，V0为扩散池体积(13 ml)，V为取样体积(1 ml)。以盐酸溴己新累积透过量Qn(μg)对时间t(h)作图，绘制体外透皮曲线(图1)，结果24 h内累积渗透量为964.56 μg，透过量达给药量的60.29%，表明盐酸溴己新滴鼻剂透皮效果良好。

图2 盐酸溴己新滴鼻剂体外累积渗透曲线(n=3)

5 讨论

5.1 制剂溶媒的选择

制备盐酸溴己新滴鼻剂时，由于盐酸溴己新水溶性较差，若选择水为分散介质，盐酸溴己新漂浮于液面，且易粘附在容器壁上，经搅拌无法均匀分散；若以甘油为分散介质，但滴鼻液处方中甘油含量过大时，使用后鼻黏膜会有不适灼烧刺激性；以液状石蜡为分散介质，药物均匀分散，且粒子沉降速度慢，沉降后没有结块现象，振摇后能迅速均匀分散，故选择液状石蜡为制剂分散介质。

5.2 流动相的确定

关于流动相选择，曾试验《中国药典》上盐酸溴己新含量测定项下流动相磷酸盐缓冲液-乙腈(20∶80)[6]，但试验结果发现出峰情况较差，峰型不正常不对称，基线不平稳，所以未采用该流动相。根据参考文献[7]中使用的流动相甲醇-醋酸溶液(70∶30)，通过预试验发现盐酸溴己新出峰情况较好，再经过调试，最终确定流动相为甲醇-醋酸溶液(55∶45)，系统适用性试验结果良好，样品分离度好，峰型对称，基线平稳。

5.3 透皮接受液的选择

体外透皮试验中，根据盐酸溴己新的溶解性，选择流动相甲醇-醋酸溶液(55∶45)作为接收介质，同时为了防止流动相挥发，整个透皮试验均在密封下进行。通过检测24 h渗透给药后接收液中盐酸溴己新含量，发现药物渗透量与时间成正相关，表明盐酸溴己新滴鼻剂的透皮效果良好。