四种小鼠功能性便秘模型制备的比较研究*

阳艾玲，闫怡欣，何昊，高亚，贺葵，石慧，刘珉甬

（1.西南医科大学附属医院 医学实验中心，四川 泸州 646000；2.西南医科大学 护理学院，四川 泸州 646000；3.西南医科大学 护理器械研发实验室，四川 泸州 646000）

便秘发生率受人群生活方式、寿命延长、精神状况等因素影响逐年上升，达2.0%～28.0%，若未及时治疗可能诱发心脑血管、大肠癌等疾病，导致患者抑郁焦虑，严重影响人们的生活质量[1-3]。功能性便秘指排除继发因素导致的便秘，占便秘的43.6%[4]。国内外对便秘的研究主要以手术切除的人体标本为主，缺乏前瞻性的研究资料。已有文献报道的手术治疗便秘的效果、并发症、复发率等存在争议[5]。研发功能性食品治疗便秘是大势所趋，评价受试物的疗效需找到安全有效的动物模型。因此，本研究通过比较四种小鼠便秘模型，找到简单高效的造模方法，为研发治疗便秘药物提供模型基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级（无特定病原体动物）昆明小鼠（Kunming mice,KM小鼠）50只［西南医大动物中心提供SCXK（川）2013-17］，18.00～22.00 g，雌雄各半，随机分为5组，每组10只。本研究已通过西南医科大学动物实验伦理审查，遵照动物福利进行实验。

1.1.2 实验药物 炭粉液[6]（首粒黑便指示剂）：加水400.00 ml将阿拉伯树胶（博研生物）100.00 g配成0.25%透明溶液，将活性炭粉（明洋化工）50.00 g加至上述溶液中煮沸3次，冷却后加水定容至500.00 ml,于4℃冰箱保存，临用前摇匀，并加入等量蒸馏水，制得炭粉液待用。

复方地芬诺酯（康普药业H32022716）混悬液[7]：2片复方地芬诺酯片（2.50 mg/片）研磨成粉，加入2.50 ml水均匀混合。

洛哌丁胺（杨森制药H10910085）溶剂[8-9]：1粒洛哌丁胺加入1.00 ml水中均匀混合。

冰水[7]：生理盐水（美大康18030542）制成0℃～4℃的冰水。

硫糖铝（白敬宇制药150602）溶剂[10]：取1片硫糖铝（0.25 g/片）研磨成粉，加入50.00 ml水均匀混合。

1.2 实验方法

复方地芬诺酯组：复方地芬诺酯混悬液10.00 mg/kg灌胃1次；洛哌丁胺组：洛哌丁胺混悬液9.38 mg/kg灌胃，2次/d，首次给药加倍，连续10天；冰水组：0℃冰水灌胃0.80 ml/（只·d），连续7天；硫糖铝组：硫糖铝混悬液灌胃25.00 mg/ （kg·d），连续3天，第3天剂量减半；空白组 ：生理盐水0.10 ml/（只·d）灌胃，连续10天。

各组小鼠在给药前一天和最后一次灌胃30分钟后分别给予炭粉液（给药量为0.1 ml/10 g）测定粪便参数。

1.3 观察指标

1.3.1 一般观察 小鼠活动度、毛色、精神状况、体质量、饮水量、进食量。

1.3.2 粪便参数 用炭粉指示液记录首粒排黑便时间，收集4 h后粪便数量，用电子天平称其质量（湿重）。每次收集的粪便称重之后烘干，称其干重。含水量=（湿重-干重）/湿重×100%。

1.3.3 病理学 造模结束，随机抽样30只小鼠处死，剪取距远端结肠8～10 mm组织做病理切片，观察远端结肠黏膜层厚度及细胞形态变化。

1.4 统计学方法

采用SPSS 11.0统计软件处理数据，计量资料以均数±标准差（±s）表示，分别采用配对设计t检验、单因素方差分析统计数据，以α=0.05为检验水准，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况

5个实验组造模前后自身对照体重、进食量、饮水量均增加，差异有统计学意义P＜0.05（复方地芬诺酯组：F体重=1.15、F进食量=61.50、F饮水量=38.36；洛哌丁胺组：F体重=54.30、F进食量=32.18、F饮水量=38.36；冰水组：F体重=77.44、F进食量=47.77、F饮水量=191.61；硫 糖铝组：F体重=10.25、F进食量=33.62、F饮水量=63.20；空白组：F体重=274.90、F进食量=32.93、F饮水量=23.66）。造模后四个模型组与空白组比较，仅洛哌丁胺组差异有统计学意义（F=19.09，P＜0.01）。见表1。

2.2 粪便参数

①造模前后首粒排黑便时间：4个模型组与空白组比较，仅复方地芬诺酯组差异有统计学意义（F=52.71，P＜0.001）。②造模前后4 h排便数量：4个模型组与空白组比较，复方地芬诺酯组差异有统计学意义（F=81.59，P＜0.001）；洛哌丁胺组差异有统计学意义（F=50.65，P＜0.001）。③造模前后粪便含水量：4个模型组中仅复方地芬诺酯组差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 病理学观察

2.3.1 黏膜层厚度 5组中仅复方地芬诺酯组粘膜层变薄程度、肠腔扩张情况最为明显。见图1。

2.3.2 细胞形态变化 5组中仅复方地芬诺酯组杯状细胞萎缩最明显且形态细长。见图2。

表1 各组小鼠一般情况比较 （±s,n=10）

表1 各组小鼠一般情况比较 （±s,n=10）

注：1）与造模前比较，P＜0.05；2）与空白组比较，P＜0.01。

组别 造模前造模后体重/g 进食量/g 饮水量/ml 体重/g 进食量/g 饮水量/ml复方地芬诺酯组 20.90±0.77 3.50±0.11 1.60±0.52 20.55±0.691） 4.11±0.221） 3.20±0.631）洛哌丁胺组 18.30±1.25 3.44±0.17 1.60±0.52 21.65±0.711）2） 4.09±0.321） 3.20±0.631）冰水组 17.89±0.78 3.44±0.17 1.70±0.21 20.94±0.771） 4.33±0.371） 3.00±0.211）硫糖铝组 18.75±1.80 3.53±0.20 1.80±0.42 20.85±1.031） 4.35±0.401） 3.50±0.531）空白组 17.25±0.35 3.48±0.18 1.70±0.67 20.45±0.501） 4.01±0.231） 2.80±0.251）

表2 各组小鼠排便指标比较 （±s,n=10）

表2 各组小鼠排便指标比较 （±s,n=10）

注：1）与造模前比较，P＜0.05；2）与空白组比较，P＜0.001。

组别 造模前造模后首粒黑便时间/min 粪便含水量/% 4 h粪便数量/粒 首粒黑便时间/min 粪便含水量/% 4 h粪便数量/粒复方地芬诺酯组 51.30±20.33 18.00±6.00 35.50±1.69 146.30±31.631）2） 11.00±9.001） 15.30±2.121）2）洛哌丁胺组 41.40±14.46 20.00±5.00 42.30±3.89 44.30±6.16 17.00±12.00 15.50±7.811）2）冰水组 38.89±9.45 20.00±6.00 45.33±9.76 57.00±12.451） 23.00±10.00 36.33±8.411）硫糖铝组 41.80±9.92 17.00±3.00 39.10±5.90 63.80±16.741） 15.00±10.00 42.90±3.001）空白组 61.40±19.27 14.00±3.00 43.30±5.95 60.00±20.31 15.00±1.00 43.30±9.57

图1 小鼠远端结肠粘膜层厚度

图2 小鼠远端结肠细胞形态

3 讨论

便秘因肠道蠕动力下降，肌张力低下，排便无力，粪便滞留而形成。小鼠是制备便秘模型的常用动物，本实验通过制备4种便秘模型，选择出最有效便捷的造模方法，用于治疗便秘药物的实验研究。

洛哌丁胺组造模后4 h粪便颗粒减少，杯状细胞体积变小，连续10天的多次灌胃对小鼠咽喉部损伤较大，易致呛咳窒息，不良反应多[11]，不能成功模拟功能性便秘。

冰水组造模使小鼠首粒排便时间延长、4 h排便数量减少。连续7天操作使小鼠烦躁不安且抗拒灌胃，刺激胃肠功能，易致小鼠痉挛死亡，维持性不佳。

硫糖铝组悬浊液配制时溶液量较大，造模后首粒排便时间稍延长，粘膜层部分变薄，杯状细胞萎缩、干瘪不明显，造模效果不如复方地芬诺酯组。

复方地芬诺酯组一次灌胃成模，操作简单有效，能有效避免复方地芬诺酯的成瘾性。与其它3个造模组相比，该组首粒黑便时间显著延长，粪便含水量、4 h粪便数量显著减少，黏膜层变薄使肠腔明显扩张，肠推动力下降，杯状细胞萎缩最明显且形态细长，达到预期便秘效果，成功造模。

本实验通过对比小鼠体重、进食量、饮水量、首粒黑便时间、粪便含水量、4 h粪便总量、结肠粘膜层厚度和细胞形态变化等指标对造模效果进行评价，以复方地芬诺酯建立便秘模型效果最佳，此方法也是目前便秘研究中使用较多的方法[12]，可选用该模型做治疗便秘的有效性研究,为相关便秘产品开发奠定基础。