AEG-1和Endoglin在子宫内膜癌中的表达及其意义

2019-04-25 01:46陈海伦罗幸波宏小翠
中国现代医生 2019年6期
关键词:胶质瘤内膜淋巴结

陈海伦 罗幸波 宏小翠

[摘要] 目的 探讨星形细胞上调基因-1(Astrocyte elevated gene-1,AEG-1)和Endoglin标记的微血管密度计数(MVD)在子宫内膜癌组织中的表达及两者与临床病理特征间的关系。 方法 收集惠州市中心人民医院和广东医科大学附属医院2014年1月~2018年3月20例正常子宫内膜组织、43例子宫内膜癌组织标本,应用免疫组化法检测AEG-1和Endoglin标记的MVD表达情况。 结果 在正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织中,AEG-1的阳性表达率呈逐渐上升趋势(P<0.01),AEG-1在子宫内膜癌组织中的表达水平与子宫内膜癌肌层浸润深度、组织学分化程度、FIGO分期、淋巴结转移明显相关(P<0.05);在正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织中,Endoglin标记的MVD表达强度呈逐渐上升趋势(P<0.01),Endoglin标记的MVD在子宫内膜癌组织中的表达强度与子宫内膜癌肌层浸润深度、FIGO分期、淋巴结转移明显相关(P<0.05)。 结论 子宫内膜癌组织中AEG-1和Endoglin呈高表达,提示AEG-1和Endoglin在子宫内膜癌的发生发展中有着重要的作用,AEG-1和Endoglin表达水平的检测可用于子宫内膜癌的辅助诊断和病情估计。

[关键词] AEG-1;Endoglin;子宫内膜癌;免疫组化法

子宫内膜癌为女性生殖道三大常见恶性肿瘤之一,约占女性癌症总数的7%,占女性生殖道恶性肿瘤的20%~30%,全球子宫内膜癌患者的数量逐年增加,呈年轻化趋势,子宫内膜癌的发生是多基因、多步骤、多阶段等相互作用的结果,涉及癌基因的激活与肿瘤新生血管的生成[1-4];星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)是近年来新发现的癌基因,又称之为异黏蛋白(Metadherin,MTDH)、3D3,与多种肿瘤的发生、发展、侵袭及转移过程密切相关[5-8];Endoglin亦命名为CD105,研究表明肿瘤组织及其转移病灶中新生血管内皮细胞可产生Endoglin,Endoglin与肿瘤的发生、发展关系密切[9-12]。本研究采用免疫组化法检测AEG-1及Endoglin标记的微血管密度计数(Microvessel density,MVD)在子宫内膜癌组织中的表达情况,探讨AEG-1和Endoglin与子宫内膜癌发生发展的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料

收集惠州市中心人民医院和广东医科大学附属医院2014年1月~2018年3月住院手术或门诊活检病理标本63例,其中正常子宫内膜组织共20例,子宫内膜癌组织共43例,子宫内膜癌按FIGO分期标准进行相应分期,其中Ⅰ期7例,Ⅱ期14例,Ⅲ期17例,Ⅳ期5例;低分化19例、中分化11例,高分化13例;所有子宫内膜癌病例术前均未行化疗、放疗或免疫治疗,各组之间年龄比较差异无统计学意义(P>0.05);兔抗人AEG-1单克隆抗体和鼠抗人Endoglin单克隆抗体购自美国Abcam公司,即用型免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 免疫组化检测方法

石蜡包埋组织以4 μm厚度行连续切片,常规给予脱蜡至水化程度,切片浸于50 mmol/L(pH 8.0)乙二胺四乙酸溶液之中,予微波抗原修复10 min,冷却到室温状态,给予充分水洗,PBS浸洗,滴加正常山羊血清封闭液之中,室温20 min;甩去掉多余液体,不予洗涤,加入AEG-1单抗或Endoglin单抗4℃温度过夜;给予PBS洗涤;滴加于SP 9000通用生物素标记二抗,37℃,40 min;予二氨基联苯氨显色30 s,给予苏木素复染,乙醇脱水、透明及中性树胶封固。二氨基联苯氨显色液配制步骤:取DAB 5 mg溶于100 mL 0.05mol/L Tris-盐酸(pH7.6)当中,加入30%过氧化氢10 μL,搅拌混匀后给予过滤(使用前给予新配制);采用该公司配套提供的阳性切片作为阳性对照,使用PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 阳性结果判定

AEG-1以胞浆或胞核中出現棕黄色或棕色颗粒作为阳性细胞。按半定量积分法来判断表达情况,根据染色强度及阳性细胞所占比例分别标记为0~3分。染色强度:未着色标记为0分,着色浅标记为1分,中度着色标记为2分,着色深标记为3分。阳性细胞百分率:高倍镜(×400)下随机选取10个视野,每个视野共计数100个细胞。计算平均阳性百分率,平均阳性细胞百分率≥5%为阳性。

Endoglin标记的MVD计数方法:首先在低倍镜下全面仔细观察切片以便确定肿瘤内血管密度的最高处,即为热点处;再在高倍镜(0.189 mm2/视野)下,以与周围肿瘤细胞及结缔组织成分可明显区别的任何一个棕色染色的内皮细胞或细胞丛维的一个血管,只要结构不是相连接,其分支结构亦作为一个血管计数;记录3个视野当内的微血管数,取其平均数作为患者的MVD值,双盲分析其结果。

1.4 统计学分析

采用SPSS20.0统计分析软件分析,计数资料各组之间差异采用χ2检验,计量资料以(x±s)表示,各组之间差异采用t 检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AEG-1在正常子宫内膜及子宫内膜癌组织中的表达状态

正常子宫内膜组织和子宫内膜癌组织中AEG-1的阳性表达率分别为25.00%(5/20)、65.12%(28/43),子宫内膜癌组织中AEG-1的阳性表达率高于正常子宫内膜组织的阳性表达率,两组之间表达比较差异有统计学意义(χ2=8.8073,P<0.01)(表1)。

2.2 AEG-1在子宫内膜癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系

结果表明AEG-1表达水平与子宫内膜癌肌层浸润深度、组织学分化程度、FIGO分期、淋巴结转移明显相关(P<0.05)(表2)。

2.3 Endoglin标记的MVD在正常子宫内膜及子宫内膜癌组织中的表达强度

正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织中Endoglin标记MVD的表达强度分别为(16.5375±2.1097)、(39.4337±7.8475),子宫内膜癌组织中Endoglin标记MVD的表达强度高于正常子宫内膜组织的表达强度,两组间表达比较差异有统计学意义(t′=17.7993,P<0.01)(表3)。

2.4 Endoglin标记的MVD在子宫内膜癌组织中的表达强度与临床病理因素特征之间关系

结果表明Endoglin标记的MVD表达强度与子宫内膜癌肌层浸润深度、FIGO分期、淋巴结转移明显相关(P<0.05)(表4)。

3讨论

AEG-1基因是肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导或人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染人胚胎星形细胞后导致表达升高的一种基因,近年来研究证实AEG-1在多种肿瘤组织中呈过表达,并在增强细胞的致瘤能力、促进肿瘤细胞的增殖分化、增强肿瘤细胞的侵袭及转移、促进肿瘤新生血管的生成以及介导化疗耐药等方面均发挥着十分重要的作用[13-15];Lee等[16]研究结果表明:高表达的AEG-1基因还能够通过促进人类神经胶质瘤细胞的非锚定依赖性生成,最终可导致肿瘤细胞入侵及转移的能力增强;孙利波等[17]比较AEG-1基因mRNA在正常脑组织和胶质瘤组织中的表达状况,实时荧光定量PCR检测时发现,在mRNA水平,正常脑组织中AEG-1基因的表达明显低于胶质瘤组织,并且Ⅲ~Ⅳ级胶质瘤组织中AEG-1的阳性表达率明显高于Ⅰ~Ⅱ级,研究得出结论:在胶质瘤组织中AEG-1基因mRNA和蛋白明显呈高表达,并且其表达水平和胶质瘤肿瘤恶性程度呈正相关,其可能是胶质瘤发病过程中的一个恶性标志物;甘梅富等[18]研究結果表明:结直肠癌组织中的AEG-1表达水平明显高于结直肠癌癌旁组织,且在癌组织中AEG-1表达水平与结直肠癌TNM分期、组织学分级、浸润深度及淋巴结转移明显相关;本研究结果表明AEG-1在正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织中的表达阳性率依次增高,差异具有统计学意义,随肌层浸润深度增大、FIGO分期增高,AEG-1表达阳性率亦增高;低分化者AEG-1表达阳性率明显高于高、中分化者;有淋巴结转移患者AEG-1表达阳性率明显高于无淋巴结转移患者;提示AEG-1在子宫内膜癌组织中的表达水平与子宫内膜癌肌层浸润深度、组织学分化程度、FIGO分期、淋巴结转移明显相关,AEG-1作为肿瘤癌基因,在子宫内膜癌的发生发展中起一定程度的作用。

Endoglin是一种同型二聚体的膜结合糖蛋白,位于染色体9q34,分子量为180 kD,Endoglin在多种肿瘤组织的内皮细胞当中特异性高表达,与细胞增殖指标Ki67、CyclinA的表达明显相关,是内皮细胞增殖的关联标记物,能够定量性区别已存在血管和肿瘤新生血管,多因素分析结果显示用Endoglin测定的MVD可作为恶性肿瘤一个独立的预后指标[19-20];梁启廉等[21]通过动物模型进行相关研究,发现抗Endoglin单抗可以显著抑制人胰腺癌PC-3细胞株的生长,最高抑瘤率可达67.13%,抗Endoglin单抗有可能成为胰腺癌的基因工程治疗方法之一;Ho等[22]研究发现,Endoglin标记的MVD表达强度越高预示肝癌侵袭程度更高,癌旁非肿瘤组织的Endoglin表达可以预测早期复发;本研究结果表明随着正常子宫内膜组织→子宫内膜癌的过程,Endoglin标记的MVD表达强度显示依次增加,随肌层浸润深度增大、FIGO分期增高,Endoglin标记的MVD表达强度亦随之增加,有淋巴结转移患者明显高于无淋巴结转移患者,提示Endoglin标记的MVD与子宫内膜癌肌层浸润深度、FIGO分期和淋巴结转移明显相关;上述结果表明子宫内膜癌组织中AEG-1和Endoglin呈高表达,提示AEG-1和Endoglin在子宫内膜癌的发生、发展中有着重要的作用,AEG-1和Endoglin表达水平的检测可用于子宫内膜癌的辅助诊断和病情评估。

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