S100A、P53对宫颈癌行顺铂新辅助化疗患者疗效及敏感性评估

武晓敏 杨慧芬

[摘要] 目的 探讨S100A6、P53对宫颈癌行顺铂新辅助化疗患者的疗效及化疗敏感性评估价值。 方法 选取2017年1～12月我院收治的行顺铂新辅助化疗的宫颈癌患者70例，观察不同临床疗效患者的S100A6、P53表达情况。结果 70例患者中完全缓解（CR）8例，部分缓解（PR）51例，疾病稳定（SD）6例，疾病进展（PD）5例，化疗总有效率为84.29%（59/70）;化疗前S100A6、P53阳性表达率为85.71%、61.43%，化疗后S100A6、P53阳性表达率为45.71%、84.29%，化疗后S100A6阳性表达率较化疗前明显降低（P<0.05），P53阳性表达率较化疗前明显升高（P<0.05）;高敏感组S100A6、P53阳性表达率分别为27.12%、91.53%，低敏感组S100A6、P53阳性表达率分别为90.91%、45.45%，高敏感组S100A6阳性表达率明显低于低敏感组（P<0.05），P53阳性表达率明显高于低敏感组（P<0.05）。结论 S100A6、P53可作为宫颈癌患者行顺铂新辅助化疗效果和敏感性预测的标志物。

[关键词] S100A6;P53;宫颈癌;顺铂新辅助化疗;敏感性

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，病死率位居女性恶性肿瘤第二位[1-2]。手术、放疗和化疗是宫颈癌的常规治疗方法，能够明显提高患者生存率，但对于病灶体积偏大的患者，尤其是肿瘤直径≥4 cm患者的治疗效果有限[3]。对于此类患者，顺铂新辅助化疗常作为前期治疗的首选方式，旨在缩小肿瘤体积以创造手术条件。子宫动脉介入治疗疗效优于静脉化疗，常作为新辅助化疗的首选方式[4-5]。但并非所有病灶均对化疗敏感，因此，治疗前通过敏感标记物来预测肿瘤化疗敏感性对制定个体化治疗方案具有指导意义。S100A6是一种生物蛋白，具有生长调控功能[6];P53是一种抑癌基因，与肿瘤细胞DNA修复和凋亡关系密切[7]。S100 A6、P53能够反映宫颈癌病情程度，但针对疗效评估和化疗敏感性预测的报道较少。对此，本研究对宫颈癌患者行顺铂新辅助化疗前后的S100A6和P53表达水平以及不同疗效患者的S100A6、P53表达情况进行监测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1～12月我院收治的行順铂新辅助化疗的宫颈癌患者70例，年龄30～65岁，平均（43.25±12.36）岁;临床分期：Ⅰb2期29例，Ⅱa2期41例。纳入标准：所有患者均首次经病理活检确诊为Ⅰb2、Ⅱa2期宫颈癌，且肿瘤直径≥4 cm[8];常规行血尿常规、生化电解质等实验室检查无明显异常。排除标准：既往接受过手术、放疗、化疗等治疗患者;合并心、肝、肾功能不全者;存在化疗禁忌证者。本研究经院伦理委员会审核，所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法

化疗前接受常规妇科检查、B超、血尿常规、肝肾功能、生化电解质等检查，符合化疗条件后接受顺铂+博来霉素（海正辉瑞制药有限公司，国药准字H2005 5883，规格为1.5万博来霉素单位）新辅助动脉化疗方案，采用Seldinger法穿刺右股动脉，分别引入导丝、5F导管鞘、5FCobra导管，对双侧子宫动脉进行选择性插管，注入造影剂，明确病灶血流情况，将顺铂70 mg/m2+博来霉素30 mg注入双侧子宫动脉，使用明胶海绵条栓塞双侧子宫动脉，14 d为1疗程，连续化疗2个疗程。

1.3 免疫组化

1.3.1 仪器与试剂  即用型P53舒抗人单克隆抗体、免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司;S100A6单克隆抗体购自安诺伦（北京）生物科技有限公司;苏木素、中性树胶、多聚赖氨酸购自北京中杉生物技术有限公司。

1.3.2 检测方法  参照试剂盒说明书进行操作，使用PBS缓冲液做阴性对照，用已知宫颈癌组织切片做阳性对照。①将包有宫颈癌组织的石蜡切片使用二甲苯脱蜡2次，15 min/次，使用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗3次，5 min/次;②将切片置于pH=6.0的柠檬酸缓冲液中，加热煮沸15 min进行抗原修复，冷却至室温后使用PBS冲洗3次，5 min/次;③滴加10%正常山羊血清50 μL封闭内源性微生物;④于切片上分别滴加1滴P53单克隆抗体或S100A6单克隆抗体，37℃孵育30 min;⑤滴加新配制的DAB显色液，置于显微镜下观察显色，3～10 min后使用清水冲洗，终止反应;⑥苏木素复染1 min，使用乙醇脱水，用中性树胶封片，置于显微镜下观察。

1.3.3 判定标准  以蛋白定位于细胞核或细胞质且出现棕黄色颗粒为阳性细胞，具体标准为：①染色较淡，阳性细胞数<25%为阴性（-）;②染色较强且清晰，阳性细胞数位于25%～50%为阳性（+～+++）。

1.4 临床疗效评价标准

参照WHO疗效判定标准进行临床疗效评价[9]，完全缓解（CR）：可见病灶完全消失;部分缓解（PR）：可见病灶最大直径缩小>50%;疾病稳定（SD）：可见病灶最大直径≤25%或病灶最大直径缩小≤50%;疾病进展（PD）：病灶最大直径增大>25%或出现新靶病灶。总有效率=（CR+PR）/总例数×100%。

1.5 观察指标

观察患者治疗前后S100A6、P53阳性表达率;根据化疗效果将化疗后CR和PR患者纳入高敏感组，将SD和PD患者纳入低敏感组，比较两组患者S100A6、P53阳性表达率。

1.6 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析。计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌患者临床疗效

70例患者中CR 8例，PR 51例，SD 6例，PD 5例，化疗总有效率为84.29%（59/70）。见表1。

2.2 化疗前后S100A6、P53阳性表达率比較

化疗前S100A6、P53阳性表达率为85.71%、61.43%，化疗后S100A6、P53阳性表达率为45.71%、84.29%，化疗后S100A6阳性表达率较化疗前明显降低（P<0.05），P53阳性表达率较化疗前明显升高（P<0.05）。见表2。

2.3 不同化疗敏感性患者S100A6、P53阳性表达率比较

高敏感组59例，低敏感组11例，高敏感组S100 A6、P53阳性表达率分别为27.12%、91.53%，低敏感组S100A6、P53阳性表达率分别为90.91%、45.45%，高敏感组S100A6阳性表达率明显低于低敏感组（P<0.05），P53阳性表达率明显高于低敏感组（P<0.05）。见表3。

3 讨论

宫颈癌的治疗手段包括手术治疗、放射治疗和化疗等，对于肿瘤偏大的患者，手术和放疗治疗效果有限，临床多采取先期化疗的方式以缩小肿瘤体积，为创造手术机会和提高后期化疗敏感性提供保障[10-12]。根据用药途径将化疗方式分为静脉化疗和动脉化疗，动脉化疗以可针对性栓塞肿瘤血管而得到广泛应用[13-14]。在新辅助化疗中，顺铂联合博来霉素是临床治疗宫颈癌的常用方案，顺铂作用于肿瘤细胞的DNA嘌呤和碱基嘧啶，能够有效阻止肿瘤细胞DNA复制过程;博来霉素可抑制肿瘤细胞增殖分裂，二者联合化疗可明显抑制肿瘤细胞增殖分裂[15]。本研究对宫颈癌患者进行2个疗程的化疗，总有效率达到84.29%，表明以顺铂为主的新辅助化疗在宫颈癌患者中效果良好。但并非所有肿瘤都对化疗敏感，化疗前有效评估化疗敏感性对制定个体化治疗方案具有重要指导意义。

S100A6基因参与细胞增殖、凋亡等多种病理过程，其在不同肿瘤组织中的表达水平并不一致。研究显示[16]，S100A6在胰腺癌、结肠癌、胃癌和黑色素瘤中表达明显升高，而在前列腺癌中表达水平显著下降。姚月荣等[6]发现，S100A6在宫颈癌患者中的表达高于正常女性，且表达水平与恶性程度、淋巴结转移关系密切。本研究对宫颈癌患者治疗前后的S100A6表达水平进行了观察，发现治疗前S100A6表达较低，这与姚月荣等[6]研究结果一致;经过2个疗程治疗后，患者S100A6表达明显升高，说明S100A6可作为顺铂新辅助化疗效果的有效评价指标。进一步对化疗敏感性进行分组，将CR和PR患者纳为高敏感组，将SD和PD患者纳为低敏感组，发现高敏感组患者S100A6蛋白表达水平明显低于低敏感组（P<0.05），说明S100A6水平可反映化疗敏感性，S100A6表达可作为宫颈癌细胞对化疗敏感性的有效预测指标。

P53是一种抑癌基因，不仅对损伤的DNA具有监视和修复作用，还可直接调控肿瘤细胞的增殖与凋亡[17-20]。许多抗癌药物均可引起P53依赖的细胞凋亡而发挥细胞毒性作用[21]。本研究结果显示，治疗后P53阳性表达率明显高于治疗前（P<0.05），证实P53与宫颈癌发展有关，与李平等[22]研究一致。孙锋等[23]发现，P53不仅与肿瘤细胞增殖凋亡有关，与肿瘤耐药性的产生同样关系密切。若P53过表达则无法有效促进细胞修复和诱导凋亡，导致肿瘤细胞产生耐药性[24]。本研究进一步对化疗敏感性不同的患者进行观察，发现高敏感组患者P53阳性表达率明显高于低敏感组（P<0.05），表明P53与化疗敏感性关系密切，这对制定个体化治疗方案具有重要指导意义。若宫颈癌患者化疗前P53呈低表达，则说明顺铂新辅助化疗可作为先期化疗的方案;若化疗前P53呈高表达，则说明肿瘤细胞对顺铂新辅助化疗存在耐药性，此时应制定其他治疗方案。

综上所述，顺铂新辅助化疗在宫颈癌患者中应用效果显著，S100A6、P53可作为化疗效果评估和化疗敏感性预测的有效指标，这对制定个体化治疗方案具有指导意义。

[参考文献]

[1] 林萍，王贺，王丹阳，等. 微小RNA与宫颈癌相关性研究进展[J]. 中国妇幼保健，2017，32（5）：1108-1112.

[2] 乔友林，赵宇倩. 宫颈癌的流行病学现状和预防[J]. 中华妇幼临床医学杂志（电子版），2015，11（2）：1-6.

[3] 刘丽红，张洪伟，刘云峰，等. 术前放化疗对局部晚期宫颈癌近期疗效分析[J]. 四川医学，2017，38（6）：675-678.

[4] 刘少晓，程晓燕，郑红枫，等. 紫杉醇联合顺铂新辅助治疗局部晚期宫颈癌的临床疗效及安全性评价[J]. 中国临床药理学杂志，2015，31（6）：432-434.

[5] 叶冬云. 紫杉醇联合顺铂新辅助化疗治疗局部晚期宫颈癌的疗效观察[J]. 临床和实验医学杂志，2014，13（7）：557-559.

[6] 姚月荣，刘富群. S100A6基因作用对宫颈癌细胞增殖迁移能力的影响及其机制[J]. 山东医药，2018，58（3）：5-9.

[7] 陈晓露，张波，吴蓉宜. CK2β、VEGF和p53蛋白表达对宫颈癌患者预后的预测价值研究[J]. 重庆医学，2016，45（8）：1083-1086.

[8] 程金龙，徐冶，谢宏宇，等. 宫颈癌新辅助化疗前后SCC-Ag水平与化疗敏感性的关系[J]. 现代肿瘤医学，2016， 24（23）：3790-3793.

[9] 刘翼. 子宫颈癌新辅助化疗不同给药途径对疗效的影响[J]. 实用癌症杂志，2014，29（3）：308-310.

[10] 汪军坚，王春兰，张婉平，等. 腹腔镜手术治疗宫颈癌患者术后生活质量分析[J]. 中国内镜杂志，2016，22（6）：31-34.

[11] 黄曼妮，安菊生，杜霄勐. 宫颈癌放射治疗的研究进展[J].中华妇幼临床医学杂志（电子版），2016，12（1）：7-15.

[12] 杨霞，李玉芝. 宫颈癌术后辅助放化疗的研究进展[J]. 中华全科医学，2014，12（8）：1319-1321.

[13] 宋晶晶，纪建松，赵中伟，等. 支气管动脉化疗栓塞联合～（125）I粒子植入治疗老年性非小细胞肺癌疗效分析[J]. 介入放射学杂志，2014，23（2）：159-163.

[14] 曾姗姗. 经肝动脉化疗栓塞术治疗肝细胞癌的研究进展[J]. 中国医药导报，2016，13（33）：56-59，63.

[15] 李凤虎，杨飞月，常建英，等. 宫颈癌紫杉醇联合洛铂或顺铂新辅助序贯洛铂或顺铂同步化放疗多中心随机临床研究[J]. 中华肿瘤防治杂志，2016，23（16）：1090-1094.

[16] Chen H， Xu C， Jin Q， et al. S100 protein family in human cancer[J]. Am J Cancer Res，2014，4（2）：89-115.

[17] 许斌，孟媛，姜彦多. 自噬相关基因Beclin-1与抑癌基因PTEN、p53在大肠癌中的表达和意义[J]. 现代肿瘤医学，2015，23（4）：530-534.

[18] 张红，徐风兰，李鸿岩，等. p53调节蛋白的研究进展[J].重庆医学，2018，47（21）：2837-2839.

[19] 徐艳雪，朱友明，陈乔尔. p53相关长链非编码RNA在肿瘤发生发展中作用的研究[J]. 安徽医药，2018，22（7）：1230-1235.

[20] 张欣宁，吴海燕，刘永珠，等. Beclin 1和P53在宫颈癌中的表达意义及其与预后的关系[J]. 吉林医学，2018， 39（7）：1206-1208.

[21] 李北芳，高静. EBV相关性胃癌罕见p53基因突变的可能机制与意义[J]. 中国肿瘤临床，2017，44（11）：522-526.

[22] 李平，陈敏斌. p53基因在宫颈癌发病中的意义及对放射敏感性的影响[J]. 中华放射肿瘤学杂志，2017，26（5）：593-597.

[23] 孫锋，黄明，吴雪松，等. rAd-p53基因对耐化疗药物MGC-803胃癌细胞的抑制作用[J]. 中国临床研究，2016， 29（1）：24-27.

[24] 潘敏，刘莉，张丽武. 紫杉醇联合顺铂新辅助化疗及放疗在早中期宫颈癌治疗中的临床应用[J]. 当代医学，2018，24（3）：116-117.