EZH2基因在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及与临床病理参数的关系

蔡永健 张显军 柯莽 洪涛

[摘要] 目的 探讨EZH2基因在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及与临床病理参数的关系。 方法 选取2011年1月～2017年8月我院手术切除并病理证实的膀胱尿路上皮癌患者共60例，采用En Vision二步法免疫组化检测EZH2基因的表达，并分析其与临床病理参数的关系。另取前列腺TURP手术时切取的正常膀胱组织10例作为对照。 结果 膀胱尿路上皮癌中EZH2基因阳性率75.00%（45/60），正常膀胱组织EZH2基因阳性率10.00%（1/10）。膀胱尿路上皮癌标本中EZH2基因阳性率显著高于正常膀胱组织（χ2=13.32，P<0.01）。膀胱尿路上皮癌组织中EZH2基因的表达程度与性别和年龄等特征无明显相關性（P>0.05），与浸润深度和病理分级等密切相关（P<0.05）。结论 EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中高表达，其表达增加可能在膀胱尿路上皮癌的形成、发展中扮演极其重要的角色。膀胱尿路上皮癌中EZH2基因表达与其恶性程度、浸润深度密切相关，参与其浸润转移过程，促使肿瘤的发展，有望成为膀胱尿路上皮癌早期诊断以及预后评估的靶分子。

[关键词] 膀胱尿路上皮癌;免疫组化;EZH2基因;临床病理参数

膀胱癌是尿路系统最常见的恶性肿瘤之一，其中超过92%为尿路移行上皮癌，其发病机制较复杂，受多种基因与多重因素的影响与调控，尤其与癌基因的激活密切相关[1，2]。EZH2（ehancer of zeste homolog 2）基因是一种新发现的癌基因，位于人染色体7q35位置，其主要作用是促进癌细胞的分化、生长及增殖，在肿瘤细胞局部浸润、转移的过程中起重要作用，在多种癌细胞中高表达，但EZH2基因在膀胱尿路移行上皮癌中的表达情况国内外报道较少[3-7]。本文旨在探讨EZH2基因在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及与临床病理参数的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年1月～2017年8月在我院手术切除并病理证实的膀胱尿路上皮癌患者共60例。纳入标准[4]：所有患者均经手术切除，且术后病理证实为膀胱尿路上皮癌;排除标准[5]：术前接受放疗、化疗或免疫治疗。其中男42例，女18例;年龄39～87岁，平均（67.5±5.3）岁;浸润性19例，非浸润性41例。另取前列腺TURP手术时切取的正常膀胱组织10例作为对照，其中男7例，女3例;年龄40～86岁，平均（68.1±5.6）岁。两组性别和年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 检测方法

采用免疫组化二步法（En Vision）测定，标本常规10%福尔马林溶液固定，石蜡包埋，标本连续4 μm厚切片，先予5%羊血清37℃封闭2 h，抗原修复采用EDTA，加入一抗工作液4 ℃孵育过夜，用PBS冲洗后滴加二抗En Vision试剂孵育1 h（室温），PBS冲洗后再滴加DAB显色，苏木精复染、脱水透明、封片镜检。分别用已知阳性切片和PBS代替一抗作阳性和阴性对照。

1.3 观察指标

分析膀胱癌及正常膀胱组织中EZH2基因表达的差异，并分析膀胱尿路上皮癌组织中EZH2基因表达与临床病理参数的关系。

1.3.1 结果判断  EZH2阳性信号以细胞核着色，呈棕黄色或棕褐色颗粒。染色结果评价采用半定量积分法判断，通过对高倍镜视野下细胞的染色强度及阳性细胞占总的细胞的百分率进行综合性评分，其中细胞的染色强度根据其强度：如阴性、弱阳性、阳性及强阳性分别记为0分、1分、2分及3分;阳性细胞占总的细胞的百分率：如阴性、百分率≤10%、百分率11%～50%、百分率51%～80%和百分率≥81%分别记为0分、1分、2分、3分和4分。两者乘积≥4认为EZH2基因表达阳性，否则EZH2基因表达阴性。

1.3.2 EZH2基因与临床病理参数关系  包括性别、年龄、浸润深度和病理分级等。

1.4 统计学方法

应用SPSS 19.0 软件进行数据分析，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EZH2基因在膀胱尿路上皮癌及正常组织中的表达比较

EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中阳性率为75.00%（45/60），正常膀胱组织EZH2基因阳性率为10.00%（1/10）。膀胱尿路上皮癌标本中EZH2基因阳性率显著高于正常膀胱组织，差异有统计学意义（χ2=13.32，P<0.01）。

2.2 膀胱尿路上皮癌组织中EZH2基因的表达与临床病理参数的相关性

EZH2基因膀胱尿路上皮癌组织中的表达程度与性别和年龄等特征无明显相关性（P>0.05），与浸润深度和病理分级等密切相关（P<0.05）。见表1。

3 讨论

EZH2是1996年发现的一种新的人类基因，是果蝇zeste基因增强子的人类同源物，是PcG基因家族的核心成员，在胚胎干细胞发育、细胞增殖和凋亡及浸润、迁移等方面扮演重要角色[8-11]。EZH2定位于人染色体7q35位置，具有组蛋白甲基转移酶，通过催化组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27m3），从而抑制基因表达，通过抑制细胞增殖和分化对肿瘤的发生发展起重要作用;EZH2作为转录阻遏因子，能减少转录因子与DNA结合，抑制靶基因的表达，并作用于pRb2/p130蛋白C-末端与组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）相联的区域，恢复pRb2/pB0 HDAC1复合物介导的细胞周期素A启动子活性，促进细胞的演进和恶性变[12-14]。EZH2基因在胃癌、大肠癌、肾瘤、乳腺癌、前列腺腺瘤、脑癌等癌组织呈现明显高表达状态，较正常的人体组织中的表达显著升高，参与了大多数恶性肿瘤的形成、发展、浸润和转移的整个过程[15-19]。

膀胱癌是我國泌尿系统中最常见的恶性肿瘤之一，其术后易出现肿瘤的复发和浸润、转移，临床治疗效果欠理想，部分患者复发后其肿瘤的恶性程度反而明显增加。在非浸润性尿路上皮癌中，约有10%以后发展为浸润性癌或发生浸润、转移。寻找新的可用于诊断、治疗、判断预后、预测治疗效果的基因，可以为膀胱尿路上皮癌的预后提供科学依据。近年来EZH2基因在膀胱癌中的表达及临床意义受到临床的高度重视。李海波等[4]研究发现膀胱尿路上皮癌中EZH2基因呈高表达，且与其病理分级、临床分期密切相关。徐松涛等[20]研究发现膀胱癌的发生、发展与EZH2基因表达增高密切有关，且与膀胱癌的临床分期、复发密切相关。

本研究示膀胱尿路上皮癌标本中EZH2基因阳性率明显高于正常膀胱组织。表明EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中高表达，其表达增加可能在膀胱尿路上皮癌的形成、发展中扮演极其重要的角色，可能是膀胱尿路上皮癌一个敏感的生物学标志。同时研究发现EZH2基因在膀胱尿路上皮癌组织中的表达程度与浸润深度及病理分级有相关性。表明EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中的表达程度与其恶性程度、浸润深度密切相关，提示EZH2基因参与其浸润转移过程，促使肿瘤的发展，有望成为膀胱尿路上皮癌早期诊断以及预后评估的靶分子。必要时可进一步分析研究EZH2基因与膀胱癌其他临床病理参数及膀胱镜检查结果的相关性，进一步了解膀胱尿路癌发病的分子病理机制，从而指导临床诊断及基因治疗，有望成为膀胱癌早期基因诊断、治疗及预后评估分析的靶分子[21，22]。

总之，EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中高表达，其表达增加可能在膀胱尿路上皮癌的形成、 发展中扮演极其重要的角色。EZH2基因在膀胱尿路上皮癌组织中表达程度与浸润深度及病理分级有相关性，其表达程度参与其浸润转移过程，可促使肿瘤的发展。EZH2在膀胱尿路上皮癌的发病进展中起重要作用，进一步深入研究对膀胱尿路上皮癌的诊断和治疗及判断预后有一定的临床意义。

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