Stathmin-1、Ki-67在子宫平滑肌肿瘤中的表达及意义

胡仙清 林中民 郑小冬 冯国飞 潘琼慧 朱雪琼

子宫平滑肌肿瘤是妇女中最常见肿瘤，分为良性平滑肌肿瘤和恶性平滑肌肉瘤及特殊类型平滑肌肿瘤。子宫富于细胞平滑肌肿瘤是一种常见的特殊类型子宫平滑肌瘤[1]。目前子宫富于细胞平滑肌肿瘤及子宫平滑肌肉瘤主要依据病理鉴别，但是单纯根据细胞形态学鉴别有时有困难。微管解聚相关蛋白Stathmin-1(STMN1)，广泛存在于细胞质中，参与微管与纺锤体的组装，有促进肿瘤细胞增殖、分化、侵袭的作用[2]。Ki-67是一种存在于增殖细胞核的与细胞增殖密切相关的核蛋白，为评价增殖细胞的标志物。Stathmin-1及Ki-67在有丝分裂纺锤体形成、细胞有丝分裂中有着重要作用，其表达异常与肿瘤的发生、发展密切相关。国外仅一篇Stathmin-1在子宫平滑肌肿瘤表达的研究，国内外关于Ki-67在子宫平滑肌肿瘤中的报道较多，尚未见Stathmin-1与Ki-67两者相关性的研究[3～5]。本研究旨在通过检测瘤旁正常子宫肌层组织、子宫普通型平滑肌肿瘤、子宫富于细胞平滑肌肿瘤、子宫平滑肌肉瘤组织中Stathmin-1及Ki-67的表达水平，来研究Stathmin-1及Ki-67的表达与子宫平滑肌肿瘤发生、发展的关系,了解Stathmin-1联合Ki-67的检测对子宫平滑肌肉瘤的辅助诊断意义。

资料与方法

1.一般资料：选取2013年1月～2016年6月在温州市人民医院及温州医科大学附属第一医院、第二医院的72例手术患者。普通型子宫平滑肌肿瘤及子宫富于细胞平滑肌肿瘤患者行子宫肌瘤剔除术或子宫切除术，子宫平滑肌肉瘤患者行全子宫+双附件切除，有或无盆腔淋巴结切除术。患者多以月经改变或腹部包块等就诊，均无肌瘤剔除病史。

2.分组：72例患者据组织病理学结果分为4组，分别是子宫肌瘤旁正常肌层组织(normal smooth muscular tissue of uterus, M)组30例，相应普通型子宫平滑肌肿瘤(normal leiomyoma of uterus, UL)组30例，子宫富于细胞平滑肌肿瘤(cellular leiomyoma of uterus, CL)组24例，子宫平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma of uterus, LMS)组18例。

3.方法：调取病理科存档蜡块(其中子宫平滑肌肉瘤标本取自温州医科大学附属第一医院11例，温州医科大学附属第二医院4例，其余标本均来自温州市人民医院)，4μm厚度连续切片，1张切片经HE染色以复核诊断外，其余留作免疫组化用。病理诊断标准：普通型子宫平滑肌肿瘤：镜下可见由梭行平滑肌细胞和不等量纤维结缔组织构成。肌细胞大小均匀，排列成漩涡状或吻合成束，核为杆状。子宫富于细胞平滑肌肿瘤：梭形细胞胞质稀少，束状排列消失，细胞核增大，两端圆顿或呈梭行，染色质细腻、分散，核仁小，缺乏肿瘤细胞坏死，并且分裂象少见。子宫平滑肌肉瘤：由具有丰富嗜酸性胞浆突起的梭行细胞束组成。细胞核为纺锤形，通常两端圆形，染色深带有粗染色质并且核仁明显，核分裂象明显(超过15个/10个高倍镜)，出现凝固性肿瘤细胞坏死。

4.免疫组化Envision二步法：采用Envision二步法检测，实验分别采用阳性对照及阴性对照。Stathmin-1组采用子宫平滑肌肉瘤组织阳性对照，Ki-67采用乳腺癌组织阳性对照，两个指标均采用PBS代替一抗作为阴性对照。一抗分别为兔抗人单克隆抗体Stathmin-1原液(1∶250)购自英国Abcam公司，鼠抗人单克隆抗体Ki-67工作液购自北京中杉金桥生物技术有限公司。二抗为免疫组化PV-8000试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

5.免疫组化结果判定：每张切片随机选择有代表性5个400倍高倍镜视野。Stathmin-1染色组将每个视野均进行染色强度计分与阳性细胞百分比计分后相乘，结果取平均值[3]。显色度按细胞着色深度计分：无染色，0分；淡黄色，1分；棕黄色，2分；棕褐色，3分。根据阳性细胞数所占百分比计分：≤5%，0分； 6%～25%，1分； 26%～50%，2分；51～75%，3分；>75%，4分。两者相乘所得计为染色分值：0分为阴性，1～4分为弱阳性，5～8分为中度阳性，9～12分为强阳性。Ki-67组仅进行阳性细胞百分比计分，结果取平均值计为染色分值：≤15%，阴性；16%～30%，弱阳性；﹥30% 强阳性[6,7]。

结 果

1.一般资料比较：由表1可见，3组患者的年龄比较，差异有统计学意义(H=13.250,P=0.001)，3组患者的孕次、产次比较差异无统计学意义(H=0.053,P=0.762;H=2.576,P=0.276)。

2.Stathmin-1、Ki-67蛋白表达情况：由图1可见，Stathmin-1蛋白阳性反应主要定位于肿瘤细胞的细胞质，为浅黄或棕黄褐色颗粒；由图2可见，Ki-67蛋白阳性反应主要定位于肿瘤细胞的细胞核，为浅黄或棕黄褐色颗粒。

表1 3组患者一般情况比较[M(P25～P75)]

图1 Stathmin-1在各种子宫平滑肌肿瘤中的表达(免疫组化Envision二步法，×400)

表2 Stathmin-1在4组的表达情况

图3 Stathmin-1在各组的染色分值箱线图

表3 Ki-67在4组中的表达情况

图4 Ki-67在各组的染色分值箱线图

5.Stathmin-1、Ki-67的表达与临床病理特征的关系：子宫平滑肌肉瘤组按FIGO分期分为Ⅰ～Ⅳ期。由表4可见，子宫肌瘤旁正常肌层组织Stathmin-1、Ki-67的表达与患者年龄无关(P>0.05)，普通型子宫平滑肌肿瘤及子宫富于细胞平滑肌肿瘤Stathmin-1、Ki-67的表达与患者年龄、肌瘤直径、肌瘤数目均无关(P均>0.05)，子宫平滑肌肉瘤Stathmin-1、Ki-67的表达与患者年龄、肿瘤期别均无关(P均>0.05)。

表4 Stathmin-1、Ki-67在子宫平滑肌肿瘤中的表达与临床病理特征的关系

6.Stathmin-1与Ki-67相关性分析：由表5可见，Stathmin-1及Ki-67染色分值在子宫肌瘤旁正常肌层组织、普通型子宫平滑肌肿瘤、子宫富于细胞平滑肌肿瘤组中均无相关性(P均>0.05)；子宫平滑肌肉瘤组中呈正相关(P<0.05)。

表5 Stathmin-1及Ki-67染色分值相关性分析

7.Stathmin-1与Ki-67在子宫平滑肌肿瘤中的恶性预测价值：由表6可见， Stathmin-1联合Ki-67检测子宫平滑肌恶性肿瘤敏感度为77.78%，特异性为90.04%，阳性预测值为73.68%，阴性预测值为92.45%。

表6 Stathmin-1及Ki-67表达检测子宫平滑肌肿瘤的恶性预测价值

讨 论

子宫平滑肌肿瘤是妇科最常见的肿瘤，其组织学分为良性子宫平滑肌瘤、子宫平滑肌肉瘤和交界性子宫平滑肌瘤，其中子宫富于细胞平滑肌肿瘤是最常见的交界性子宫平滑肌瘤。子宫富于细胞平滑肌肿瘤镜下表现瘤细胞丰富，排列紧密，呈编织状，细胞大小形态尚一致，无异型性或仅个别细胞有异型性，核分裂象(0～4)个/10倍高倍镜下，但无病理性核分裂，无凝固性坏死。高度子宫富于细胞平滑肌肿瘤有时与子宫平滑肌肉瘤难以鉴别。子宫平滑肌肉瘤虽少见，恶性程度高，占子宫恶性肿瘤的 2%～4%, 占女性生殖道恶性肿瘤的1%, 大多数预后极差[8]。探索新的鉴别诊断指标，提高肿瘤的诊断准确度，预测肿瘤的预后等成为当今的研究方向。

细胞周期调控异常、染色体的不稳定一直是肿瘤学研究的热点之一。微管解聚蛋白Stathmin-1是一种细胞调节因子，通过磷酸化调节自身活性来改变微管系统的动力平衡。Stathmin-1有促进肿瘤细胞增殖、分化、侵袭的作用，与肿瘤预后相关[9～11]。Stathmin-1在卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、输卵管癌等患者中过度表达，其表达水平与紫杉醇类化疗药物治疗效果及预后呈负相关[12～17]。Ki-67，细胞周期调节蛋白，作为增殖性细胞核的标志物,可视为反映肿瘤增殖率的指标。随着Ki-67 表达水平的升高，肿瘤细胞增殖活性也随之增高。细胞的过度分裂与增殖已被证实是肿瘤恶变的重要环节。Ki-67在卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌中均呈高表达，与患者肿瘤期别、组织学类型、肿瘤分化、肌层浸润等侵袭性病理因素正相关，与患者预后负相关[18]。

本研究揭示了Stathmin-1及Ki-67在子宫平滑肌肿瘤中的表达以及与临床特征的相关性。首先，采用免疫组化Envision二步法研究Stathmin-1及Ki-67在子宫平滑肌肿瘤中的表达，结果显示Stathmin-1及Ki-67在普通子宫肌层、普通子宫平滑肌瘤、子宫子宫富于细胞平滑肌肿瘤中均呈低水平表达，子宫平滑肌肉瘤中高表达。进一步将Stathmin-1及Ki-67在子宫平滑肌肿瘤中的表达与患者年龄、肿瘤直径、恶性肿瘤期别等进行相关性分析，结果显示无临床相关性。本研究同时进行了Stathmin-1及Ki-67相关性的分析，结果显示Stathmin-1与Ki-67在子宫平滑肌肉瘤中表达呈正相关，rs=0.795，P=0.000。本研究中，Stathmin-1阳性表达在子宫平滑肌肿瘤中诊断子宫平滑肌肉瘤的敏感度达100%，特异性为31.48%，与2015年美国Allen等[3]的研究相符。虽然大多数病例病理学诊断上主要依据标本HE染色，但遇到特殊类型子宫平滑肌肿瘤，如子宫高度富于细胞平滑肌肿瘤，子宫恶性潜能不确定平滑肌肿瘤等，辅助的免疫组化参数有助于病理专家提高诊断的准确性。Stathmin-1表达在子宫平滑肌肉瘤诊断的敏感度高，但特异性低，相较Allen等单纯检测Stathmin-1与子宫平滑肌肿瘤的研究，本研究进一步联合检测Ki-67及Stathmin-1提高辅助早期诊断子宫平滑肌肉瘤及鉴别诊断子宫富于细胞平滑肌肿瘤及子宫平滑肌肉瘤的特异性。

综上所述，本研究结果初步提示Stathmin-1及Ki-67在子宫平滑肌肉瘤中的高表达可能与子宫平滑肌肉瘤的发生相关。Stathmin-1及 Ki-67在子宫平滑肌肉瘤中的表达有一致性，联合检测Stathmin-1与Ki-67在早期辅助诊断子宫平滑肌肉瘤上有一定的临床意义。