叶酸代谢基因多态性及血浆同型半胱氨酸水平与新生儿早产、出生体重的关系

王瑞 吴淑贞 陈娟 李艺英

[摘要]目的 探讨叶酸代谢基因多态性及血浆同型半胱氨酸（Hcy）水平与新生儿早产、出生体重的关系。方法 选取2016年1月～2017年12月在我院产检并最终在我院分娩的孕妇344例作为研究对象，于孕早期采集口腔黏膜标本进行检测，根据基因检测结果，对叶酸代谢障碍遗传风险进行分级，将其分为中/高风险组182例，无/低风险组162例，同时采血检测其Hcy水平。分析Hcy水平与新生儿早产、出生体重的相关性，比较两组的早产发生率等。结果 Hcy水平与新生儿出生体重成正相关（r=0.143，P=0.008）;MTRR A66G基因型与新生儿早产成正相关（r=0.126，P=0.019）;基因型总风险与新生儿早产成正相关（r=0.120，P=0.026）。中/高风险组的早产率高于无/低风险组，差异有统计学意义（P=0.027）。分娩巨大儿的孕妇Hcy水平高于分娩正常出生体重儿及低出生体重儿的孕妇，差异有统计学意义（P<0.05）;叶酸代谢障碍不同风险程度出生体重分布比较，差异无统计学意义（P=0.483）。结论 叶酸利用能力与早产具有相关性，叶酸代谢障碍中/高风险组的早产发生率显著升高;新生儿出生体重受孕母Hcy水平影响，孕母Hcy水平与新生儿出生体重成正相关。

[关键词]叶酸代谢基因多态性;早产;同型半胱氨酸;出生体重

[中图分类号] R714.1          [文献标识码] A          [文章編号] 1674-4721（2019）2（b）-0004-04

早产指妊娠满28周至不足37周（196～258 d）间分娩者。此时娩出的新生儿称为早产儿，体重为1000～2499 g。早产儿各器官发育尚不够健全，出生孕龄越小，体重越轻，其预后越差。早产儿容易在新生儿期发生严重疾病或死亡，我国出生1岁以内死亡的婴儿约2/3为早产儿[1]。早产儿如果得不到适当治疗，幸存下来的婴儿将面临更高的终身残疾和低生活质量风险。虽然世界卫生组织多次提出关于改善早产结果的干预措施建议，但目前有关早产的预防和改善的结果并不令人满意，调查显示发展中国家早产发生率约为15%，我国的早产发生率为5%～15%，发达国家控制较好，美国为12%～13%，其他发达国家为5%～9%，但近年来有呈上升趋势[2]。早产的病因、发病机制尚未阐明。随着分子医学的发展，发现早产可能通过遗传和环境的相互作用而发病[3-4]，其中叶酸代谢障碍就是其中的一个研究热点。一些酶基因的突变可影响体内活性叶酸水平及同型半胱氨酸（Hcy）水平，造成叶酸代谢异常和叶酸利用能力下降[5]。一些研究表明，Hcy的积累成为各种发育障碍的危险因素[6]。基因多态性与叶酸、Hcy及早产发生、出生体重的关系成为近年产科及生化、遗传学等领域的研究热点。本研究旨在探讨叶酸代谢基因多态性及血浆Hcy水平与早产、出生体重的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月～2017年12月在我院产检并最终在我院分娩的单胎妊娠的孕妇344例作为研究对象。纳入标准：①汉族妇女;②年龄18～45岁。排除标准：①夫妻双方有遗传病史;②孕妇有宫颈手术史;③孕妇有吸烟史。本研究已经本院医学伦理委员会批准，入组女性均自愿参加并签署知情同意书。于孕早期（8～12周）采集口腔黏膜标本，同时采血检测其Hcy水平，根据3个DNA 单核苷酸多态性位点（MTHFR C677T、 A1298C 和 MTRR A66G）的检测结果分为高度风险、中度风险、低风险和未发现风险4级，其中，中/高风险组182例;无/低风险组162例。中/高风险组中，年龄21～43岁，平均（29.36±3.88）岁;孕龄30～41周，平均（38.60±1.57）周;体重指数（BMI）17.90～36.59 kg/m2，平均（25.79±4.01）kg/m2;高血压5例，糖尿病22例。无/低风险组中，年龄22～43岁，平均（29.80±4.68）岁;孕龄31～41周，平均（38.75±1.26）周;BMI 16.23～40.98 kg/m2，平均（25.83±4.27）kg/m2;高血压7例，糖尿病23例。两组的年龄、孕龄、BMI，高血压、糖尿病发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 叶酸代谢障碍遗传检测与风险评估  采集受检者的口腔黏膜上皮细胞，利用柱式抽提试剂盒抽提样本DNA，采用Taqman-MGB技术，检测MTHFR C677T、A1928C和MTRR A66G的基因多态性。

1.2.2 血浆Hcy测定  采集受检者口腔黏膜上皮细胞当天，采取受检者静脉血5 ml采用雅贝公司的IMX全自动快速免疫分析仪测定血浆Hcy水平。

1.3 观察指标

新生儿早产发生率和新生儿出生体重。根据测量的新生儿出生体重值，可分为低出生体重、正常体重和巨大儿，其中低出生体重是指出生体重<2500 g者，2500 g≤出生体重<4000 g者为正常体重，出生体重≥4000 g者则为巨大儿。

1.4 统计学方法

数据采用SPSS 21.0软件进行统计分析，采用Pearson相关分析统计连续变量间的相关性;计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验或方差分析;计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1不同叶酸代谢基因型、Hcy与早产、出生体重的相关性

血浆Hcy水平与出生体重成正相关（r=0.143，P=0.008），MTRR A66G基因型及基因型总风险与早产呈成相关性（r=0.126，P=0.019;r=0.12，P=0.026）（表1）。

2.2 不同基因型下血浆Hcy水平的比较

叶酸代谢不同基因型下血浆Hcy水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05），说明叶酸代谢不同基因型对血浆Hcy水平无影响。根据基因型推测出的叶酸代谢障碍总风险也同样对血浆Hcy水平无影响（表 2）。

2.3 早产危险因素的单因素分析

早产者血浆Hcy水平低于足月产者，但差异无统计学意义（P=0.186）。叶酸代谢障碍中/高风险组的早产发生率为28.0%，高于无/低风险组的17.9%，差异有统计学意义（P=0.027），叶酸代谢高/中风险发生早产风险是低/无风险的1.8倍（OR=1.8）（表3）。

2.4 新生儿出生体重影响因素的单因素分析

分娩巨大儿的孕妇Hcy水平高于分娩正常出生体重儿及低出生体重儿的孕妇，差异均有统计学意义（P<0.05）;叶酸代谢障碍不同风险程度出身体重分布比较，差异无统计学意义（P=0.483）（表4）。

3讨论

叶酸是细胞生长和分裂的一种基本维生素，但不能在人体中合成，因此必须从外界获取。获取的叶酸在体内主要通过甲基化和转硫两种方式代谢，在叶酸代谢途径中涉及的一些酶的基因多态性与神经管缺陷、心血管疾病、唐氏综合征、自发性流产、淋巴细胞白血病、乳腺癌、胃癌、食管癌、阿尔茨海默病和其他疾病有关[7-9]。MTHFR是一种与叶酸代谢有关的速率限制酶，它催化5-亚甲基四氢叶酸及10-亚甲基四氢叶酸转化为5-甲基四氢叶酸，并继而转化为Hcy和甲硫氨酸[10]。目前已经确定了近20个基因突变，最常见的MTHFR突变包括C677T和A1298C，该基因突变将导致酶活性降低。由于个体遗传体质差异的存在，有一部分人由于MTHFR、MTRR基因发生风险突变而导致其对叶酸的利用能力降低，使不同的孕妇补充等量叶酸后，体内的叶酸活性产物浓度却存在差异[11]。

多项研究表明，MTHFR、MTRR基因多态性是叶酸代谢障碍发生的遗传易感性因素。杜景云等[2]对440例孕妇MTHFR活性的检测及其等位基因与基因型频率分析，发现早产临产孕妇组MTHFR活性远低于健康孕妇组（P<0.001）。所有5个单核苷酸多态性（SNPs）（rs4846049、rs1476413、rs180131、rs180133、rs9651118）基因型分布都符合 Hardy-Weinberg平衡，其中rs1801131和rs180133在早产临产孕妇组与同孕周健康孕妇组的基因型分布有显著差异。但Wang等[12]的研究团队研究了11个涉及叶酸代谢和早产的基因中12个SNPs之间的联系，发现与叶酸代谢途径相关的12个SNPs基因型分布中没有一个显示出与早产具有显著差异，在这项研究中筛选的12个SNPs并不是早产的独立危险因素。

本研究通过研究叶酸代谢基因多态性与早产及出生体重的相关性，发现叶酸代谢障碍高风险者的早产发生率明显升高，差异有统计学意义且通过早产危险因素单因素分析发现，叶酸代谢障碍中/高风险组的早产发生率为28.0%，高于无/低风险组的17.9%，差异有统计学意义（P=0.027），叶酸代谢高/中风险发生早产风险是低/无风险的1.8倍（OR=1.8）。因此可通过孕早期检查叶酸代谢障碍，及早发现叶酸代谢障碍风险者，并为高风险及中风险孕妇提供补充叶酸方案预防早产，改善妊娠结局及新生儿预后。同时，发现MTRR A66G基因型与早产具有相关性。鉴于本研究纳入的样本数量有限、地域有限制，该结论仍需要扩大样本量、严控数据质量进行进一步的验证研究。

另外，本研究发现，叶酸代谢障碍不同风险程度下出生体重分布比较，差异无统计学意义（P>0.05），但孕期母血Hcy水平与新生儿体重成正相关。根据文献资料，孕期母血Hcy水平与胎儿生长的关系是有争议的[13-18]。最早研究Hcy与胎儿生长受限关系的团队是Burke等[14]，他们的研究结论是高Hcy血症并不会导致胎儿生长受限发生率增高。加拿大学者Infante-Rivard等[15]提出了不同的观点，其用2年时间进行了一项病例对照研究，发现孕期母血Hcy水平与新生出生体重成负相关。然而，国内学者赖毓冕[16]的研究报道，新生儿出生体重受孕期母血Hcy水平影响，早产孕妇血浆Hcy水平升高会显著增加分娩小于胎龄儿的危险。国外学者Yeter等[17]的研究结果亦发现胎儿生长受限组的产妇血浆Hcy水平与对照组相比显著升高。但该两项研究前者是通过研究早产孕妇血浆Hcy水平，后者则是在产后24 h内检测的母血Hcy水平，与本研究方案均不一样。近期韩国学者Choi等[18]的一项关于孕妇血清Hcy的前瞻性研究，通过监测孕早中晚期的血浆Hcy水平，并追踪孕妇及新生儿结局，发现在孕期母血Hcy水平和孕产妇或新生儿结局之间未观察到显著的关联。以上各个研究结果的不一致可能与血浆Hcy水平受影响因素多、研究对象背景不同、检测方法不一致、孕期母血Hcy水平正常参考值不统一、高Hcy血症定义无法界定有关。基于这一点，本研究认为，Hcy水平与新生儿出生体重的关系还需要进一步大样本的研究来阐明。

通过本研究发现，叶酸代谢障碍中/高风险组的早产发生率高于无/低风险组，叶酸代谢高/中风险发生早产风险是低/无风险的1.8倍，且孕妇MTRR A66G基因型与早产存在显著相关性;孕期母血Hcy水平与新生儿体重成正相關。因此，对于有叶酸缺乏，尤其伴有编码MTRR的基因突变的孕妇建议及时补充叶酸，纠正叶酸缺乏，将有利于预防早产的发生，具有重要的优生学意义。

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（收稿日期：2018-08-31  本文编辑：许俊琴）