胡卢巴种子的抗氧化活性

焦思鹏，杨静慧，通信作者，刘艳军，武肖琦，冯涛，汪海霞

胡卢巴种子的抗氧化活性

焦思鹏1，杨静慧1，通信作者，刘艳军1，武肖琦1，冯涛1，汪海霞2

（1. 天津农学院 园艺园林学院，天津 300384；2. 天津市林业调查规划设计院，天津 300112）

为了解胡卢巴的抗氧化活性，以胡卢巴种子为试材，以Vc、Ve、TBHQ（叔丁基对苯二酚）和BHT（2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚）为对照，测定了其提取物对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基的清除作用。结果显示：胡卢巴种子提取物对DPPH自由基清除率最低，低于TBHQ、BHT和Vc、Ve；超氧阴离子自由基清除率居中，与BHT相同，高于TBHQ，低于Vc与Ve；清除羟自由基的能力最强，显著高于其他4个抗氧化剂。进一步测定胡卢巴提取物主要的抗氧化物质黄酮和总酚含量，分别为0.080 g/L和0.650 g/L。

胡卢巴；提取物；抗氧化；黄酮；酚类

胡卢巴（L.），属于豆科蝶形花亚科胡卢巴属，一年生草本植物[1]，全株具有香气，抗寒，喜冷凉、干旱气候，对土壤、气候的适应性强，生长迅速。胡芦巴的干燥成熟种子常作中药，其性温、味苦，入肾经，具有温肾壮阳、祛寒除湿之功，用于治疗寒疝、腹胁胀满、寒湿脚气等症。近年来，国内外学者从胡卢巴种子中提取分离出多种化学成分，主要包含甾体皂苷类、三萜类及黄酮类[2]。

现代医学研究发现，胡卢巴具有广泛的药理作用，不仅可以降血糖、抗溃疡抗肿瘤、治疗脂肪肝和慢性肾功衰竭，还可以对急性、慢性肝损伤进行保护。此外，胡卢巴还具有抗氧化活性等功能[3]。石艳等[4]研究了胡卢巴对糖尿病大鼠的脂代谢及肾脏抗氧化防御功能。结果表明，胡卢巴能增强肾脏的抗氧化能力，调节实验性糖尿病大鼠的脂代谢紊乱。孙国栋等[5]研究了胡卢巴提取物的体外抗氧化活性，发现胡卢巴提取物能清除1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和羟自由基。但是，缺乏胡卢巴种子抗氧化能力和清除自由基能力以及抗氧化物质的基础数据。因此，本试验以Vc、Ve、TBHQ和BHT为对照组，以胡卢巴种子提取液为试验组，其中Vc、Ve、TBHQ和BHT作为抗氧化剂，具有一定的抗氧化能力与清除自由基的能力，进一步比较分析4种抗氧化剂与胡卢巴种子提取液的清除自由基能力，从而得出胡卢巴种子浸提液的抗氧化能力的强弱。进一步测定其主要抗氧化物黄酮与总酚含量，为胡卢巴的开发和利用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

胡卢巴种子采自天津市大港区中塘镇。

1.2 方法

胡卢巴种子提取液：取5 g干燥成熟的胡卢巴种子粉碎成粉末状，加入95%乙醇10 mL研磨成匀浆，离心，取上清液保存于离心管中，于冰箱内保存、备用。

对照组：用95%乙醇分别溶解Vc、Ve、TBHQ、BHT，配制成0.5 mmol/L溶液，备用。

对DPPH自由基的清除率：胡卢巴种子提取物及对照组对DPPH自由基的清除率参照Larrauri等[6]方法进行，清除率=（-）/×100% （，分别表示对照组的吸光光度值和胡卢巴提取液的吸光光度值）。

对超氧阴离子自由基的清除率：胡卢巴种子提取物及对照组对超氧阴离子自由基的清除率采用光照核黄素法[7]测定，即分别用紫外分光光度计测定其吸光度，并依据上式计算清除率。

对羟自由基的清除率：胡卢巴种子提取液及对照组对羟自由基的清除率用水杨酸法[8]，并计算清除率：清除率=（-（-））/×100%（、、分别为对照组、添加待测液后以及待测液本底吸收光度值）。

黄酮含量测定采用硝酸铝显色法[9]，总酚含量测定采用Folin-Ciocalteau法[10]。

2 结果与分析

2.1 胡卢巴对DPPH自由基清除率的影响

从图1可以看出，胡卢巴种子提取物和对照组对DPPH自由基的清除率有显著差异，其中胡卢巴的清除率最低，显著低于其他抗氧化剂，是TBHQ的39.7%，BHT的67.2%，Vc和Ve的97.2%和97.0%。

图1 胡卢巴组对DPPH自由基清除率的影响

注：不同小写字母表示在5%水平的显著性，大写字母表示在1%水平的显著性。下同

2.2 胡卢巴对超氧阴离子自由基清除率的影响

从图2可以看出，胡卢巴种子提取物和对照组对超氧阴离子自由基都有一定的清除作用，其清除率显著高于TBHQ，是TBHQ的1.13倍；与BHT差异不显著；显著低于Vc和Ve，分别是Vc和Ve的86.8%和86.0%。

图2 胡卢巴对超氧阴离子自由基清除率的影响

2.3 胡卢巴对羟自由基清除率的影响

从图3可以看出，胡卢巴种子提取物对羟自由基清除率最强，显著高于Ve、Vc、TBHQ与BHT等抗氧化剂，分别是Ve、Vc、TBHQ与BHT的1.07、1.02、1.21和1.16倍。

图3 胡卢巴对羟自由基清除率的影响

2.4 胡卢巴总黄酮、总酚含量

从表1中可以得出，胡卢巴种子提取物总黄酮及总酚的含量均值分别为0.080 g/L和0.650 g/L。

表1 胡卢巴种子中总黄酮和总酚含量 g/L

指标123平均值 总黄酮0.1000.0600.0800.080 总酚0.6530.5820.7140.650

3 讨论

胡卢巴含有十分复杂的化学成分，大致可以分为皂甙、黄酮类、酚类、生物碱、氨基酸、酶、多糖、香豆素等，其中皂甙占大部分，其次是黄酮和酚类。胡卢巴的抗氧化物质主要是黄酮类和酚类物质，含量分别是0.080 g/L和0.650 g/L。研究发现，蓝莓及枇杷果实富含抗氧化物质[11-12]，并且其黄酮与酚类物质也高于胡卢巴，表明蓝莓和枇杷的抗氧化性强于胡卢巴。研究中胡卢巴的黄酮与酚类物质含量较低，对DPPH自由基等清除率也低。这一结果与扶庆权等[13]在研究樱桃籽抗氧化活性以及刘长姣等[14]研究五味子种子抗氧化活性结论相接近。但两者研究的结果显示，樱桃籽的黄酮和五味子种子总酚均高于胡卢巴，并且DPPH自由基清除率也高于胡卢巴。所以，种子中含有黄酮、酚类物质越高，对DPPH自由基的清除率就越强，抗氧化性越好。

4 结论

本研究得出，胡卢巴种子提取物的DPPH自由基清除率最低，低于TBHQ、BHT和Vc、Ve，分别是TBHQ、BHT和Vc、Ve的0.38%、0.67%、 0.97%、0.96%；超氧阴离子自由基清除率居中，与BHT相同，高于TBHQ的1.13倍，低于Vc与Ve，是他们的0.87%；清除羟自由基的能力最强，显著高于其他4个抗氧化剂，是TBHQ、BHT和Vc、Ve的1.07、1.02、1.21、1.16倍。本试验还测定了胡卢巴种子主要氧化物质总黄酮与总酚的含量，分别为0.080 g/L和0.650 g/L。

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Antioxidant activity of the seed inL.

JIAO Si-peng1, YANG Jing-hui1, Corresponding Author, LIU Yan-jun1, WU Xiao-qi1, FENG Tao1, WANG Hai-xia2

（1. College of Horticulture and Landscape, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China; 2. Tianjin Forestry Planning and Design Institute, Tianjin 300112, China）

In order to understand the antioxidant activity ofL., the scavenging effects of the extracts on DPPH free radicals, superoxide anion free radicals and hydroxyl free radicals of the seeds were determined with Vc、Ve、TBHQ（tert-butylhydroquinone）and BHT（2,6-tert-butyl-4-methylphenol）used as controls.The results showed that DPPH free radical removal rate was the lowest, lower than TBHQ, BHT, Vc and Ve. Superoxide anionic radical removal rate was in the middle, the same with that of BHT, higher than TBHQ, lower than Vc and Ve. Its hydroxyl radical scavenging ability was the strongest, significantly higher than the other four antioxidants. These phenomena were closely related to the difference of flavonoids and total phenols（0.080 g/L and 0.650 g/L）in the extracts.

L.; extracts; antioxidant; flavonoids; phenolic

1008-5394（2019）04-0027-03

10.19640/j.cnki.jtau.2019.04.006

S567.219

A

2019-01-15

天津市林果现代农业产业技术体系创新团队项目（ITTFPRS2018002）；天津市科技特派员项目（18JCTPJC68000）

焦思鹏（1992-），男，硕士在读，主要从事园艺植物生理方面的研究。E-mail：2289978790@qq.com。

杨静慧（1961-），女，教授，博士，主要从事园艺植物栽培和生理生化研究。E-mail：jinghuiyang2@aliyun.com。

责任编辑：杨霞