三氯吡氧乙酸原药高效液相色谱分析方法的研究

李 婷，唐丽霖，徐茂业，许艳秋，吴春先

(四川省农药检定所，四川 成都 610041)

三氯吡氧乙酸ISO通用名称为triclopyr，CAS号为55335-06-3，分子式为C7H4Cl3NO3，化学名称为(3,5,6-三氯-2-吡啶基氧乙酸)，其结构式见图1。三氯吡氧乙酸属内吸传导型选择性除草剂，由植物的叶面和根系吸收，并在植物体内传导到全株，造成其根、茎、叶畸形，储藏物质耗尽，维管束被栓塞或破裂，植株逐渐死亡。禾本科作物对它具有耐药性。适用于森林造林前除草灭灌，维护防火线，扶育松树及林分改造，用于非耕地防除阔叶杂草和木本植物，还可用于禾本科作物如小麦、玉米、燕麦、高粱等田地防除阔叶杂草[1]。

图1 三氯吡氧乙酸的分子结构图

经文献检索，国内还没有关于三氯吡氧乙酸分析方法研究的相关报道，只有固相萃取-高效液相色谱法测定地表水中三氯吡氧乙酸残留量的研究[2]。本文建立了一种高效液相色谱法对三氯吡氧乙酸原药进行定量分析，实验结果表明该方法操作简便、快速、准确，可以为企业生产过程质量控制和质检机构质量检测提供参考。

1 试验部分

1.1 试剂和溶液

乙腈：色谱纯；水：蒸馏水；磷酸：分析纯；三氯吡氧乙酸标样：已知质量分数≥99.0%；三氯吡氧乙酸原药，由利尔化学股份有限公司提供。

1.2 仪器

高效液相色谱仪：Waters 2695，具有二极管阵列检测器(2996)和自动进样器；Empower I色谱工作站；C8液相色谱柱：250mm×4.6mm(i.d.)不锈钢柱，内装ZORBAXSB-C8、5μm填充物；过滤器：滤膜孔径约0.45μm。

1.3 液相色谱操作条件

流动相：乙腈：水(0.2%磷酸)=60∶40(V/V)；流速：0.8mL/min；柱温：30℃；检测波长：290nm；进样体积：5μL；保留时间：三氯吡氧乙酸约6.06min。

上述液相色谱操作条件，系典型操作参数，可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。典型的三氯吡氧乙酸标样和原药的高效液相色谱图分别见图2和图3。

图2 三氯吡氧乙酸标样高效液相色谱图

图3 三氯吡氧乙酸原药高效液相色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制 称取三氯吡氧乙酸标样0.05g(精确至0.0002g)，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，超声10min，冷却至室温，待用。

1.4.2 试样溶液的配制 称取含三氯吡氧乙酸0.05g左右的试样(精确至0.0002g)，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，超声10min，冷却至室温，过滤后待测。

1.4.3 测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化<1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.4.4 计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中三氯吡氧乙酸峰面积分别进行平均。试样中三氯吡氧乙酸的质量分数ω(%)，按式(1)计算：

式中：A标-标样溶液中三氯吡氧乙酸峰面积的平均值；

A样-试样溶液中三氯吡氧乙酸峰面积的平均值；

m标-标样的质量，g；

m样-试样的质量，g；

P标-标样中三氯吡氧乙酸的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

通过Waters二极管阵列检测器2996的光谱数据采集功能,获得三氯吡氧乙酸在190～400nm的紫外波长扫描图(图4)。从图中可以看到三氯吡氧乙酸的最大吸收波长在232.4nm附近，次吸收波长为295.1nm，但232.4nm波长下干扰比较明显，而三氯吡氧乙酸在295.1nm处左右也有较大吸收，在290nm下几乎无干扰，因此将检测波长定为290nm。

图4 三氯吡氧乙酸紫外吸收光谱图

2.2 流动相的选择

色谱柱选择常用的反相填料ZORBAX SB-C8不锈钢柱。依据三氯吡氧乙酸的理化性质,选择乙腈体系作为溶剂溶解样品。流动相的选择则根据三氯吡氧乙酸的特点，对乙腈和水按不同比例，在色谱柱上进行选择比较。为了得到更好的分离效果，更好的峰型，同时考虑到三氯吡氧乙酸在弱酸性条件下的稳定性，选择使用磷酸调节水的pH值。经测定，选择乙腈：水(0.2%磷酸)=60∶40(V/V)为流动相，当流速为0.8mL/min时，有效成分与杂质能得到很好的分离，峰形对称，基线平稳，并且分析时间适中。

2.3 线性相关性试验

分析方法的线性相关性试验将2.4.1中配制的标样溶液在上述色谱操作条件下进行分析,进样量分别为1、2、5、8、10和12μL，以三氯吡氧乙酸质量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线(见图5)，得线性方程为y=2E+06x+413823，其线性相关系数R2为0.9992。

图5 三氯吡氧乙酸高效液相色谱标准曲线

2.4 精密度试验

从同一原药产品中准确称取6份试样，在上述色谱操作条件下进行分析，测得三氯吡氧乙酸的标准偏差为0.50，变异系数为0.51%(表1)。

表1 三氯吡氧乙酸精密度试验结果

2.5 准确度试验

称取5份一定量的试样，分别准确加入一定体积的2.4.1中配制的标样溶液，在上述色谱操作条件下进行分析，测得三氯吡氧乙酸的平均回收率为99.86%(表2)。

3 结论

本文通过对高效液相色谱分析条件的选择与优化，建立了三氯吡氧乙酸原药的高效液相色谱分析方法。试验结果表明，本方法的准确度和精密度较高，线性关系良好，具有简便、快速、准确及分离效果好的优点，是三氯吡氧乙酸原药的一种可行的分析方法。

表2 三氯吡氧乙酸准确度试验结果