大豆卵磷脂作为冷冻保护剂对澳洲白绵羊精液品质的效果试验

陈广仁，王晓平，潘晓荣，袁 勇，李 岩

(甘肃省畜牧业产业管理局，甘肃 兰州 730030)

1 材料与方法

1.1 试验动物的饲养管理

6只雄性澳洲白绵羊，平均月龄21.4±4.1，平均体重80.2±2.5 kg。单栏饲养，自由饮水。早8点晚6点，定量投料，粗饲料含苜蓿30%、全株玉米青贮40%、大麦秸秆30%；精料含豆粕14%、菜粕8%、DDGS 12%、麸皮5%、玉米55%、种羊用预混料15%、食盐1%，总蛋白17.36%。在训练采精前15 d开始每天增加胡萝卜500 g/只，采精期间每羊每天补充2枚鸡蛋。利用假阴道法在有发情母羊的情况下训练采精。

1.2 公羊体重与阴囊周长的测定

训练公羊采精后，即采精实验期间，当天称重；同时利用皮卷尺在阴囊最大直径处测量阴囊周长，重复三次测量，取平均值。

1.3 精液采集与冷冻保存

采集精液后，将5微升精液于洁净载玻片上，显微镜下观察，精子密度≥20亿、精子活力≥70%，并且精子畸形率≤20%的精液才能够冷冻保存。先将每只羊的精液平均分为2份，分别用含大豆卵磷脂BioXcell和含卵黄Optidyl将精液进行两部分冷冻。

1.4 精液品质检测

1.4.1 精子活力检测

取出冷冻后的精子，于37℃水中 30 s。取 5 μL精液滴加于 Leja玻片腔室中，置于精液辅助分析仪下分析精液运动参数。

1.4.2 精子顶体完整率和DNA完整性分析

利用精子顶体染色试剂盒PSA-FITC进行精子顶体完整率检测，利用精子染色体扩散实验进行DNA完整性分析。

1.4.3 统计分析

对同一只公羊采精8次，对每一次的精液质量进行检测，取平均值；每只羊的精液冷冻实验至少3次，解冻后的常规质量和顶体完整率、DNA完整率等分析。采用 SPSS 21.0软件中的One-Way AVNOVA对结果进行差异显著性分析，分析结果用平均值±标准差表示。

2 结果

2.1 公羊体重与阴囊周长的测定结果

由于种公羊的体重在一定范围内与阴囊的大小呈正相关，而阴囊大小直接关系到每次射精的总精子数量。对澳洲白绵羊进行评定，发现公羊体重与阴囊周长之间相关系数R2＝0.98（图1），而阴囊周长与每次射精精子总数之间的相关系数 R2＝0.99(图 2)。

图1

图2

表1

2.2 种公羊鲜精品质评定

通过表1可以看出澳洲白种公羊每次射精量约 1.0 mL，精液密度约为 19～32×108 个/mL，精子活力最低为73%，最高为81%，顶体完整率都在71%～76%之间，而精子DNA完整率在68%～74%之间。同时发现所有种公羊每次采取的精液外观都为乳白色，略带腥味。

2.3 两种冷冻保护剂的效果比较

从表2可以发现含有大豆卵磷脂分冷冻保护剂BioXcell在顶体完整率、DNA完整率以及精子直线速度方面现在高于卵黄冷冻保护剂Optidyl；而在精子活力、曲线速度以及评价路径速度方面两种冷冻保护剂无显著性差异。

表2

3 讨论

综上所述，本研究发现引进甘肃河西走廊地区的澳洲白种公羊鲜精质量指标分别为：精液量0.93±0.4 mL、精子密度 25.5±4.1 亿/mL、精子活力0.78±0.09、 顶体完整率 0.73±0.04、DNA 完整率0.72±0.05。同时发现公羊体重与阴囊周长成正比例关系（R2＝0.98），阴囊周长与每次射精量呈正相关（R2＝0.99）。用含大豆软磷脂 BioXcell对澳洲白种公羊精液进行冷冻保存，在顶体完整率和DNA完整率方面显著优于含卵黄Optidyl。