DNA倍体分析在良恶性胸腹腔积液鉴别诊断中的应用价值

吴红梅，李飞，张洪福

（广东省高州市人民医院 检验科，广东 高州 525200）

正常情况下，人体胸膜腔内有5～15 ml的液体，在呼吸运动时起到润滑作用，人体腹腔内亦存在200 ml以下的液体以润滑肠道，而当胸腔或腹腔内的液体超过该限度时，则称为胸腔积液或腹腔积液，此时说明机体可能处于病理状态。胸腹腔积液可由心血管疾病、恶性肿瘤、肝硬化及肾脏疾病等多种病因引起，及时诊断并采取正确的治疗方法至关重要。以往多采取脱落细胞形态学检查来确定其良恶性，通常需要多次抽取积液来进行确诊，还有少部分患者即使经过反复检查仍未能获得确诊，可能导致病情贻误，因此，探索更为简便而准确的诊断方法是目前国内外学者研究的热点问题。流式细胞仪脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid, DNA）倍体分析是近十年来应用于诊断早期恶性肿瘤的重要方法之一[1-2]，但是目前国内对于该技术的应用尚未十分成熟。本研究将其与以往常用的脱落细胞学检查进行对比，以探讨DNA倍体分析在良恶性胸腹腔积液鉴别诊断中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年1月-2018年1月本院临床科室送检的胸腹腔积液标本150例，其中男82例，女68例；年龄20～88岁，平均（67.98±10.42） 岁。所有患者均经影像学、实验室、病理组织学检查以及临床表现明确诊断，将恶性胸腹腔积液70例纳入恶性组，其中肺癌33例，乳腺癌12例，恶性胸膜间皮瘤1例，肝癌14例，卵巢癌10例，将良性腹腔积液80例纳入良性组，其中结核性胸膜炎49例，肺炎5例，心力衰竭4例，肝硬化22例。本研究经本院医学伦理委员会审核批准，所有患者均知情同意，并签署知情同意书。

1.2 方法

每例标本均同时进行脱落细胞学检查和DNA倍体分析。脱落细胞学检查方法：行巴氏染色后制片，由病理科医生进行读片，诊断结果包括：① 未见到癌细胞；②见到少许异型细胞；③见到重度不典型异型细胞；④可疑癌细胞；⑤见到癌细胞。DNA倍体分析方法：将标本制备成单细胞悬液，碘化吡啶染色，采用流式细胞仪进行DNA定量分析，将不易区分的群体细胞分为G1期、S期和G2期3个亚群，再使用CellQuest软件获取DNA数据，ModFit软件分析DNA倍体和细胞周期，采用DNA指数（DNA index, DI）表示细胞的倍体，二倍体DI=1.0±0.1，异倍体DI＜0.9或＞1.1。计算两种方法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度。灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%；特异度=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%；阳性预测值=真阳性例数/（真阳性例数+假阳性例数）×100%；阴性预测值=真阴性例数/（假阴性例数+真阴性例数） ×100%；准确度=（真阳性例数+真阴性例数）/总例数×100%。灵敏度可反映正确识别患者的能力，特异度可反映正确鉴别实际非患者的能力，阳性预测值反映筛检阳性者患目标疾病的可能性，阴性预测值可反映筛检阴性者中真正未患病的可能性，准确度可反映正确诊断患者与非患者的能力。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析。各诊断效能为计数资料，以百分比（%）表示，两种方法的诊断效能比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者两种检测方法分析结果比较

DNA倍体分析结果和脱落细胞学检查结果如表1所示。

表1 两组两种检测方法分析结果比较 例

2.2 两种检测方法诊断效能评价比较

DNA倍体分析的灵敏度显著高于脱落细胞学检查，差异有统计学意义（P＜0.05），阴性预测值和准确度高于脱落细胞学检查，特异度和阳性预测值低于脱落细胞学检查，但差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 两种检测方法的诊断效能评价比较 %

3 讨论

一直以来，脱落细胞学检查在良恶性胸腹腔积液的鉴别诊断中占据着重要地位[3-5]，但该方法既需要良好的临床检验技能，也需要完善的病理学基础知识和诊断经验，其结果容易受细胞数量、细胞形态变化是否典型以及病理医师对读片结果的主观偏差等各种因素的影响[6]，因此诊断的灵敏度受到限制，需要探寻一种操作更为简便，诊断结果更为准确的方法来提高恶性胸腹腔积液的阳性检出率。

通常情况下，正常组织细胞中染色体数目和DNA含量是固定的，细胞分裂周期中，DI的值是波动的，二倍体DI为0.9～1.0，四倍体DI为1.90～2.10，正常人体内大多数细胞为二倍体，仅有少数为异倍体，但是肿瘤细胞尤其是恶性肿瘤细胞大多会发生染色体数目和结构异常的情况，其DNA含量也会随之改变[7-8]。DNA倍体分析属于DNA定量分析技术，可通过检测组织细胞核内DNA的数量得出相对客观的结果，能准确识别出所测标本中出现异倍体改变的细胞，从而有助于早期判断细胞是否发生恶变[9]。有研究证实[10-12]，DNA倍体分析结果中的细胞DI值与异倍体细胞的数量、细胞增殖以及恶变程度均有密切相关性，且在呼吸系统肿瘤、消化系统肿瘤及妇科肿瘤等的早期诊断和预后判断中发挥重要作用。

本研究将DNA倍体分析与脱落细胞学检查进行比较，结果显示，DNA倍体分析的灵敏度为78.57%，显著高于脱落细胞学检查的61.43%，说明相对于传统的脱落细胞学检查，该方法筛查出真正为恶心胸腹水患者的能力更好，导致恶性胸腹水患者DNA异倍体为阴性的原因可能为肿瘤细胞尚未脱落至浆膜腔、所测标本中肿瘤细胞聚集成团或者二倍体肿瘤高分化等影响读片结果所致。本研究还显示，DNA倍体分析的阴性预测值和准确度高于脱落细胞学检查，特异度和阳性预测值低于脱落细胞学检查，但差异均无统计学意义，说明该方法在显著提高诊断灵敏度的同时，并未明显降低其他诊断效能，而且在准确度方面具有一定优势。

综上所述，与脱落细胞学检查相比，DNA倍体分析在良恶性胸腹腔积液的临床鉴别诊断中具有更高的灵敏度，且保证了较高的特异度和准确度，其操作简单、重复性好、人为因素影响小，临床应用价值更高。在今后的研究中，笔者将进一步扩大样本量，并采取多中心协作的方法，对DNA异倍体的数量和程度与肿瘤转移部位、病情程度和预后等的相关性进行深入分析，为恶性肿瘤的早期诊断、治疗和预后判断提供更为科学的依据。