HPLC法测定清麻防风合剂中丹皮酚含量的研究

朱昆，汪旭，代恩勇，孟庆妍，李忻※

（1.吉林大学中日联谊医院，长春 130021；2.长春市中心医院制剂室，长春 130024；3.吉林省食品药品检验所，长春 130033）

清麻防风合剂为院内制剂，处方由牡丹皮、苦杏仁、干姜、浮萍、白鲜皮、黄芪、丹参、白术、陈皮、防风等中药材加工制备而成，性状为深褐色的液体，味苦，略酸，具有宣肺散寒、辛温解表的功效，临床主要用于寒冷型荨麻疹的治疗。牡丹皮为该方剂中的君药，丹皮酚为牡丹皮的主要有效成分，具有抗氧化、抗菌抗炎、解热阵痛、抗肿瘤及增强细胞免疫功能等多种药理作用[1-3]。

本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对清麻防风合剂中丹皮酚的含量进行测定，通过建立丹皮酚含量测定的方法，为控制该产品质量提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-2010AHT 高效液相色谱仪（日本岛津公司）；KQ3200E型超声波处理器（昆山超声仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

清麻防风合剂（批号：20170091、20170092、20170093，长春市中心医院制剂室）；丹皮酚（110708-201407，中国食品药品检定研究院）；乙腈为色谱纯，其它所用试剂均为分析纯，水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[4-6]

色谱柱：WondaSil C18（5 µm，4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈-水（40∶60）；检测波长：274 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：25 ℃。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取适量的丹皮酚对照品，用95%乙醇配制成2µg/mL 的丹皮酚乙醇溶液，即得对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取本品（100 ℃水浴加热30 min，冷却至室温后，将其摇匀，开袋后量取）4 mL，置于25 mL 具塞容量瓶之中，加入95%乙醇定容至25 mL，摇匀混合溶液，滤过，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备

按处方中药材比例，取除牡丹皮外的其它药材按工艺流程制备成不含牡丹皮的阴性成品，按照“2.3”项下方法制成不含丹皮酚的阴性样品溶液。

2.5 专属性实验

采用“2.1”项下色谱条件，分别取对照品溶液、阴性样品溶液以及供试品溶液，对照品进样10L，供试品溶液进样20L，得相关HPLC 色谱图。研究结果表明，丹皮酚出峰时间约17.75 min，阴性样品溶液未见明显杂质峰干扰，可见，清麻防风合剂组方中的其它成分在该检测条件下对丹皮酚含量测定未产生影响，专属性较强。见图1～3。

图1 丹皮酚对照品液相色谱图Figure 1 High Performance Liquid Chromatography of Paeonol Reference Material

图2 样品液相色谱图Figure 2 High Performance Liquid Chromatography of Sample

图3 阴性样品液相色谱图Figure 3 High Performance Liquid Chromatography of Negative Sample

2.6 线性范围考察

2.7 精密度考察

2.8 稳定性试验

取同一批供试品（批号：20170091），按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别于室温下放置0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h，按“2.1”项下色谱条件测定丹皮酚色谱峰面积。得RSD 为0.63%（n=6），表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

2.9 重复性试验

取清麻防风合剂6 份（批号：20170091），按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱峰面积。结果，6 份样品的平均含量为0.005 176 mg/mL，RSD 为0.47%，表明该方法测量结果的偏差小，重复性良好。

2.10 加样回收率试验

取6 份已知含量样品（批号：20170091，丹皮酚含量为0.005 176 mg/mL）适量，分别加入一定量丹皮酚对照品溶液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定样品中丹皮酚含量。结果，平均回收率为99.28%，RSD 为0.77%。

2.11 清麻防风合剂中丹皮酚含量测定

按照“2.3”项下方法，取3 个批次的清麻防风合剂样品，制备3 批供试品溶液。按照“2.1”项下色谱条件，分别对3 个批次的供试品溶液丹皮酚含量进行测定。结果见表1。

表1 清麻防风合剂中丹皮酚的含量测定结果

3 讨论

本研究在流动相选择过程中，曾试用乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液（30∶70）、甲醇-水（45∶55）和乙腈-水（1∶1）为流动相[4-6]，但制剂中丹皮酚色谱峰分度较差，最终确定乙腈-水（40∶60）为本研究流动相，由液相图谱可见，丹皮酚的分离度良好，可作为清麻防风合剂含量测定的流动相。

综上，采用HPLC 法测定清麻防风合剂中丹皮酚含量，可以有效控制该制剂的质量，方法简便、重现性良好、稳定可靠。