北细辛饮片炮制工艺与药材质量相关性研究

姜思奇，蔡广知，赫一鸣，贡济宇

（长春中医药大学药学院，长春 130117）

北细辛是马兜铃科植物北细辛的干燥根和根茎，习称“辽细辛”。夏季果熟期或初秋采挖，除净地上部分和泥沙，阴干[1]。细辛首载于《神农本草经》：“味辛温，主咳逆、头痛、脑动、百节拘挛、风湿、痹痛、死肌，久服明目、利九窍、轻身长年。”[2]。《名医别录》记载：“二月、八月采根，阴干。”现代药理研究表明，细辛挥发油中的-细辛醚能松弛组胺、乙酰胆碱所致豚鼠离体气管平滑肌的痉挛，呈量效关系[3]；同时，细辛具有解热、镇痛、抗炎、强心、调压、抗菌、抗病毒、抗过敏、抗衰老等作用，临床可用于慢性支气管炎、类风湿性关节炎、脉管炎、椎间盘突出、肩周炎、鼓膜炎、过敏性鼻炎、耳聋、牙痛、口腔溃疡、泪囊炎、弱视、痛经、阳痿等疾病的治疗[4-7]。关于细辛炮制工艺，2015年版《中国药典》中将细辛药材除去杂质，喷淋清水，稍润，切段，阴干，制成饮片，但未有具体的数据描述。本试验通过对北细辛药材进行炮制，结合药材本身的性质，将药材润洗和干燥的时间作为考察因素，以挥发油、浸出物、含水量、马兜铃酸I及细辛脂素的含量为指标，在考察炮制工艺对饮片质量影响的同时，选择合理的工艺流程及参数，在保证饮片质量的同时，考察及优选工艺及参数，以减少马兜铃酸I 的含量，为规范饮片生产提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-2030 高效液相色谱仪（株式会社岛津制作所）；XS105 分析天平、AL204 电子天平（梅特勒－托利多仪器有限公司）；KQ-3200DB数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；水浴锅（巩义市英峪予华仪器厂）；色谱填充柱：TC-C1（84.6 mm×250 mm，5m）（大连依利特有限公司）。

1.2 试药

北细辛药材产地为吉林省靖宇县，经长春中医药大学中药鉴定教研室蔡广知副教授鉴定为马兜铃科植物北细辛〔Asarum heterotropoides Fr.Schmidt var.mandshuricum（Maxim.）Kitag.〕的干燥根和根茎。

马兜铃酸I 对照品（批号：110746-201611，含量：98.9%）、细辛脂素对照品（批号：111889-201203，含量：99.1%）（中国食品药品检定研究院），乙腈、磷酸均为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 饮片的炮制工艺

2.1.1 润制 将药材倒至拣选台上，手工去除泥块、非药用部位及霉变药材，净选药材称量，饮用流动水水润，润药时间为0 min、5 min、10 min、15 min、20 min。润药结束后，将药材制成1 cm 的段，称量，备用。

2.1.2 干燥方式及时间 阴干：在室温24.6 ℃的环境下，将待干燥的药材铺在烘盘中，厚度为1～2 cm，分别干燥4 h、6 h、12 h、24 h、36 h，1 h 翻动和上、下窜盘1次，测定药材含水量变化，将含水量小于10.0%的药材备用。

烘干：将待干燥的药材铺在烘盘中，厚度为1～2cm；烘干温度为25 ℃，分别干燥1 h、3 h、5 h、8 h 和10 h，1 h翻动和上、下窜盘1 次，测定药材含水量变化，将含水量小于10.0%的药材备用。

2.1.3 干燥温度 将待干燥的药材铺在烘盘中，厚度为1～2 cm；设定烘干温度分别为25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃和45 ℃，干燥8 h，测定药材中挥发油含量变化。

2.2 饮片的减毒工艺

2.2.1 润制 取净选合格的药材，用水浸泡，浸泡时间为0 h、12 h、24 h、36 h、48 h，不能伤水。

2.2.2 阴干 在室温24.6 ℃条件下，设定干燥时间为12 h、24 h、36 h、48 h 和60 h。测定药材含水量变化，将含水量小于10.0%的药材备用。

2.3 细辛脂素与马兜铃酸I 含量测定

参考宋双红等[8]报道的方法，同时测定药材中马兜铃酸I 与细辛脂素含量。

2.3.1 对照品溶液的制备 精密称定马兜铃酸I对照品10.30 mg 和细辛脂素对照品15.35 mg，分别置于50 mL 和5 mL 量瓶中，甲醇溶解并定容，得对照品储备液。分别量取适量储备液于5 mL 量瓶中，制备成细辛脂素51.75g/mL、马兜铃酸I15.30g/mL的混合对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备 精密称定北细辛样品粉末0.5 g（过80 目筛），置于50 mL 具塞锥形瓶中，精确加入70%甲醇25 mL，称定重量，超声处理（500 W，40 kHz）45 min，取出并冷却，再称定并补足损失的重量。0.22m 滤膜过滤后，即得供试品溶液。

2.3.3 色谱条件 色谱柱：C1（8250 mm×4.6 mm，5m）；柱温：35 ℃；检测波长：260 nm；流动相：乙腈（A）-0.05%磷酸水（B），梯度洗脱（0～20 min 30%→45%A，20～30 min 45%A，30～35 min 45%→55%A，35～45 min 55%→75%A）。对照品及样品色谱图见图1、图2。

图1 对照品色谱图Fig.1 The reference chromatogram of geniposide

图2 供试品色谱图Fig.2 The sample chromatogram

2.3.4 线性关系考察 取马兜铃酸I 储备液，精确稀释至0.1g/mL、0.5g/mL、1.0g/mL、3.0g/mL、6.0g/mL、9.0g/mL、15.0g/mL，分别进样10L，以进样质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=51 205X 2 069.8（r=0.999 8）。结果显示，马兜铃酸I 在0.1～15.0g/mL 之间与峰面积呈良好的线性关系。

取细辛脂素储备液，精确稀释至0.1mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL、2.5mg/mL、3.0mg/mL。分别进样10L，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=15 281X 12 905（r=0.999 7）。结果显示，细辛脂素在0.1～3.0 mg/mL 之间与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.6 重复性考察 按照“2.3.2”项下方法，制备5 份供试品溶液，连续进样，测定细辛脂素与马兜铃酸I的RSD 值分别为1.23%、2.19%，表明重复性良好。

2.3.7 稳定性考察 分别取放置0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h 的同一供试品溶液，按照“2.3.3”项下色谱条件连续进样，计算峰面积。结果显示，RSD 值为2.53%，表明样品稳定性良好。

2.3.8 加样回收率试验 精密称定已知含量的北细辛样品6 份，分别精密加入马兜铃酸I、细辛脂素标品（马兜铃酸I0.206 mg/mL、细辛脂素3.07 mg/mL）24L 和650L，按照“2.3.2”项下方法制备成供试品溶液，“2.3.3”项色谱条件下测定峰面积，计算加样回收率。结果见表1、表2。

表1 马兜铃酸I加样回收率结果Table 1 Results of recovery tests for aristolochic acidⅠ

表2 细辛脂素加样回收率结果Table 2 Results of recovery tests for asarinin

2.3.9 含量测定 将各实验项下的样品按照“2.3.2”项下方法制备成供试品溶液，在“2.3.3”项下色谱条件进行测定，以原药材的含量为100%，计算各样品中马兜铃酸I 与细辛脂素的减少率。结果见表3、表4、图3、图4。

表3 马兜铃酸I的含量Table 3 Aristolochic acid I content

图3 润洗、浸泡时间与马兜铃酸I 减少率关系Fig.3 Relationship between rinse,soaking time and aristolochic acid I reduction rate

图4 润洗、浸泡时间对细辛脂素的增加/减少率Fig.4 Increase/decrease rate of ascorbate during rinsing and soaking time

表4 细辛脂素的含量Table 4 Ascorbate content

2.4 水分测定

分别取各干燥时间项下北细辛样品，按照2015年版《中国药典》水分测定法测定，计算含水率，结果见表5、图5。

表5 干燥时间与含水率Table 5 Drying time and moisture content

图5 干燥时间与含水率关系Fig.5 Drying time and water content diagram

2.5 挥发油测定

分别取各温度项下北细辛样品，按照2015年版《中国药典》挥发油测定法测定，计算挥发油含量，结果见表6、图6。

表6 干燥温度与挥发油含量Table 6 Drying temperature and volatile oil content

图6 温度与挥发油含量关系Fig.6 Relationship between drying temperature and volatile oil content

2.6 浸出物测定

分别取各实验项下北细辛样品，热浸法测定，用乙醇作溶剂，以原药材浸出物含量为100%，计算各样品浸出物的减少率，结果见表7，图7。

表7 浸出物的含量Table 7 Leachate content

图7 润洗、浸泡时间对浸出物的减少率Fig.7 Relationship between washing,soaking time and rate of change of extract

3 结论与讨论

经研究可得，将北细辛药材经过5min 润洗、24.6℃阴干24 h 或5 min 润洗、25.0～35.0 ℃8 h 烘干，即可得到符合要求的北细辛饮片；将北细辛药材的润洗时间增加至48 h，24.6 ℃阴干48 h，可将有毒物质马兜铃酸I由9.87g/g 降到7.99g/g，也将醇溶性浸出物的含量减少14.60%～31.23%。比较阴干和烘干两种干燥方式数据显示，烘干更具实用性，温度越高时间越短，且在不影响北细辛挥发油含量的情况下，温度最高可设为35 ℃；但在实际生产中，烘干的方式并不能适应于大批量干燥，因此，可根据生产实际恰当选择。另外，北细辛原药材经0～20 min 的润洗过程中，马兜铃酸I 及醇溶性浸出物的含量并没有显著性变化，在整个过程中各实验因素对细辛脂素的含量没有显著性影响。

对于北细辛饮片的炮制操作，严建业等[9]对细辛进行了盐制、炒焦、米泔水制、碱制、甘草制、醋制、姜制、酒制、碱醋制及蜜制等手段对北细辛进行减毒炮制，但这些炮制品并不常用。本试验研究的炮制工艺在实际生产中更具实用性，通过调整炮制参数也可对减毒工艺进行改良；但此过程对于药材中其他未知的水溶性成分有无影响，还有待下一步研究。