血清NGF、MT-1E水平变化与乳腺癌病理学特征的关系

廖柳清，唐艳青，钟荣德，翁艺

(1 广州市增城区妇幼保健院，广州511300；2 广州市增城区荔城街社区卫生服务中心)

研究表明，基础领域的相关分子改变，能够在恶性肿瘤的发生发展过程中发挥重要的作用。肿瘤相关分子的波动，能够通过激活癌基因，提高下游信号通路的激活等途径，进而导致乳腺癌病情的进展[1]。神经生长因子(NGF)表达上升，能够通过促进生长因子受体的激活，提高癌细胞内生长因子相关信号通路的激活，提高乳腺上皮细胞核DNA的分裂速度，促进癌细胞的持续性自我增殖效应[2]；金属硫蛋白1E(MT-1E)是金属蛋白酶家族成员，其能够通过乳腺上皮细胞膜表面巯基酶的激活，进而促进金属蛋白酶的磷酸化和巯基化，促进癌细胞侵袭能力和其他生物学特征的改变[3]。部分研究者探讨了NGF表达与恶性肿瘤的关系，认为NGF表达上升能够显著促进恶性肿瘤的发生和临床病情的进展[4]，但对于NGF、MT-1E与乳腺癌发生发展关系的研究不足。2016年7月～2017年12月，我分析了乳腺癌患者血清NGF、MT-1E水平变化及其与病理学特征的关系，旨在为乳腺癌患者的诊疗及预后评估提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集同期增城区妇保院确诊的乳腺癌患者。纳入标准：①符合2015年《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范》中乳腺癌的诊断标准[5]；②年龄19～65岁；③经乳腺钼靶、超声、穿刺活检或术后病理检查确诊。排除标准：①已经实施放化疗；②免疫功能缺陷；③伴有其他部位恶性肿瘤；④伴有全身感染性疾病。共选取乳腺癌患者90例(乳腺癌组)，另选取同期确诊的乳腺良性疾病患者90例(良性组)作为对照。乳腺癌组均为女性，年龄(50.2±7.6)岁，肿瘤位于左侧乳房42例、右侧乳房48例，肿瘤直径(3.5±5.2)cm，组织学分级：G1级18例、G2级36例、G3级36例，TNM分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期38例、Ⅲ期32例，发生腋窝淋巴结转移41例。良性组均为女性，年龄(49.4±7.2)岁，其中乳腺纤维瘤44例、乳腺导管内乳头状瘤13例、乳腺脂肪瘤15例、乳腺平滑肌瘤12例、其他6例。两组性别、年龄具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准,受试者均签署知情同意书。

1.2 血清NGF、MT-1E检测方法 采用ELISA法。采集患者入院后24 h内的肘部静脉血4 mL，以1 500 r/min离心15 min，收集上清液；在每个聚苯乙烯板中加入上述液体0.1 mL，4 ℃过夜孵育；加入磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次，每次3 min。在每个聚苯乙烯板孔中加入NGF、MT-1E抗体(1∶800，南京伯斯金生物公司)，37 ℃孵育30 min；加入PBS洗涤3次，每次3 min；每孔中加入TMB溶液底物0.1 mL,37 ℃反应20 min；加入2 mol/L硫酸0.05 mL终止反应，采用DG5033A酶标仪(南京华东电子科技公司)检测OD值，计算相应浓度。

2 结果

2.1 两组血清NGF、MT-1E水平比较 见表1。

表1 两组血清NGF、MT-1E水平比较

2.2 乳腺癌组不同病理学特征患者血清NGF、MT-1E水平比较 见表2。

3 讨论

不同病理性因素或者遗传高危因素的携带，均能够促进乳腺癌的发生。在部分合并有雌激素受体敏感性改变的人群中，乳腺癌的发病率和病死率均可进一步上升。流行病学研究发现，乳腺癌患者的无进展生存期不足34个月，治疗后乳腺癌患者的病情缓解率不足30%[6]。

表2 乳腺癌组不同病理学特征患者血清NGF、MT-1E水平比较

临床上对于乳腺癌患者病情评估缺乏血清学方面的指标，而通过对乳腺癌患者血清NGF、MT-1E水平的分析研究，能够在揭示乳腺癌病情进展机制的同时，还能够为临床上乳腺癌患者的远期预后评估或者早期血清学筛查提供参考。

NGF是生长因子家族成员，其能够通过提高下游生长因子受体的活性，促进癌细胞内多种信号通路的上调，提高AKT、MAPK的激活程度，进而导致癌细胞转录和增殖过程的异常。NGF能够通过激活癌细胞DNA的上游转录启动子，提高癌细胞DNA的辅助和扩增速度，进而促进乳腺癌的病情进展。基础方面的研究还认为，NGF能够提高癌细胞的浸润和黏附能力，进而促进癌细胞的转移复发[7]；MT-1E是金属巯基蛋白酶家族成员，其蛋白结构上包括了多个巯基化的结构，能够通过激活含巯基蛋白酶，进而促进癌细胞间质成分的分解，为上皮耐药性恶性肿瘤细胞的转移提供前提[8]。相关的研究还表明，MT-1E能够促进上皮-间质转换过程，利于癌细胞对于基底膜组织的突破，进而促进乳腺癌的病情进展[9]。部分研究探讨了NGF的表达与乳腺癌的关系，认为NGF表达上升与乳腺癌的早期发生密切相关[10]，但对于MT-1E的研究较少。

本研究发现，乳腺癌组血清NGF、MT-1E水平均上升，均高于良性组，提示NGF、MT-1E高水平均能够参与乳腺癌的病情进展。通过分析其基础方面的原因，考虑可能与NGF、MT-1E的下列几个方面的病理特性作用有关[11, 12]：①NGF水平上升，不仅能够提高癌细胞的增殖效应，同时还能够促进细胞的凋亡抑制，导致癌细胞凋亡比例明显减少，促进了肿瘤细胞的发生发展；②MT-1E能够通过提高其对于巯基蛋白酶的调控，进而导致癌细胞膜表面跨膜受体蛋白的激活，促进癌细胞内第二信使的上调，进而导致癌细胞的异常分化过程。刘宇等[13]研究得出与本研究相似的结论，其发现在乳腺癌患者中NGF表达水平和阳性率均可平均上升约40%，同时在合并有明显的肿瘤恶病质或高肿瘤负荷患者中NGF表达水平可进一步上升。本研究在探讨血清NGF、MT-1E水平与乳腺癌患者病理学特征关系的过程中，发现血清NGF水平与乳腺癌患者的临床分期、淋巴结转移、组织学分型等并无明显的关系，推测NGF可能在促进乳腺癌的病情进展方面并无显著作用；但也考虑可能与本研究纳入的样本较为局限，或由于NGF蛋白的检测灵敏度较低有关。在组织学分级G3级、TNM分期Ⅲ期、发生淋巴结转移患者中，血清MT-1E水平可明显上升，提示MT-1E水平与乳腺癌患者的病理学特征有关。这主要由于MT-1E水平上升能够促进乳腺肿瘤细胞对于淋巴结组织的黏附能力，导致肿瘤细胞的分化成熟障碍等，进而促进乳腺癌临床病理特征的进展[14, 15]。

综上所述，乳腺癌患者血清NGF、MT-1E水平明显升高，其中MT-1E水平上升与乳腺癌患者的病理学特征密切相关。本研究并未探讨NGF、MT-1E的内在关系，同时缺乏对于血清NGF、MT-1E水平与乳腺癌患者临床转归关系的研究，今后将完善上述不足之处。