子宫内膜癌患者血清和癌组织中CDCA5表达变化及其诊断价值分析

陈红燕，李莉莉，罗钦，王珊，夏秀红，范江涛

(1 广西医科大学第一附属医院，南宁530021；2柳州市工人医院)

子宫内膜癌的发病原因尚未明确，早期诊断对于疾病的预后尤其重要。目前，临床常用的子宫内膜癌血清肿瘤标志物为糖类抗原125(CA125)，但其在术前评估、治疗方案和手术范围评估方面的作用仍存在争议[1,2]。近年来有研究表明，细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)在多种恶性肿瘤中高表达，如胃癌[3]、乳腺癌[4]、黑色素瘤[5]和口腔鳞状细胞癌[6]，均与上述疾病的预后密切相关。本研究观察了CDCA5在子宫内膜癌患者血清和癌组织中的表达，初步探讨其在子宫内膜癌中的诊断价值。

1 材料与方法

1.1 标本来源 血液标本：收集2016年10月～2018年1月在广西医科大学第一附属医院住院治疗的35例经病理学检查确诊的子宫内膜癌患者的血液标本，同期随机选取门诊58例妇科检查正常、B超检查正常的健康成年妇女的血液标本，两者年龄具有可比性。组织标本：收集2016年11月～2018年1月在广西医科大学第一附属医院术后经病理学检查确诊的子宫内膜癌组织37例、癌旁组织30例及子宫内膜非典型增生组织22例，三者年龄具有可比性。病理类型：子宫内膜样腺癌30例，鳞癌2例，透明细胞癌2例，混合性癌2例，浆液性癌1例；临床分期：Ⅰ期19例，Ⅱ期7例，Ⅲ期11例。病理分化程度：高分化13例，中分化14例，低分化10例。以上病例均无术前放化疗、激素治疗病史，且已排除合并其他恶性肿瘤。本研究经医学伦理委员会批准，研究对象均签署知情同意书。

1.2 血清CDCA5检测 采用ELISA法。抽取健康成年妇女及患者术前静脉血3～5 mL，于非抗凝管内常温静置1 h；4 ℃下以3 000 r/min离心10 min，分离血清并-80 ℃冰箱备用。采用CDCA5 ELISA试剂盒检测，按照说明书进行操作。

1.3 子宫内膜组织CDCA5检测 采用免疫组化SP法。将新鲜组织标本置于4%缓冲甲醛液中固定24 h，石蜡固定后切片；常规脱蜡水化，高温高压下抗原修复；用3%H2O2室温下处理10 min，加入血清封闭液。加入CDCA5单克隆抗体(美国Abcam公司)，4 ℃孵育过夜。DAB显色，中性树脂封片，用PBS替代一抗作为阴性对照。免疫组化结果由2位高级职称病理科医师协助判定。光镜下观察，根据染色强度和阳性细胞所占百分比进行评分。①染色强度：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；②阳性细胞所占百分比：≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～75%为2分，>75%为3分。以染色强度与阳性细胞所占百分比评分的乘积为总评分，总评分≥1者定为阳性表达。

2 结果

2.1 子宫内膜癌和健康妇女血清CDCA5水平比较 子宫内膜癌患者血清CDCA5为(155.493±81.127)pg/mL，高于健康妇女的(79.106±33.133)pg/mL(P<0.01)。

2.2 血清CDCA5检测对子宫内膜癌的诊断效能 血清CDCA5检测用于诊断子宫内膜癌的AUC为0.818。血清CDCA5临界值为99.69 pg/mL时，其诊断子宫内膜癌的灵敏度和特异度分别为77.1%和77.6%，阳性似然比为3.44，阴性似然比为1.02。

2.3 不同临床病理特征的子宫内膜癌患者血清CDCA5水平比较 见表1。

表1 不同临床病理特征的子宫内膜癌患者血清CDCA5水平比较(pg/mL)

2.4 不同子宫内膜组织中CDCA5表达比较 子宫内膜癌组织、癌旁组织及子宫内膜非典型增生组织中CDCA5蛋白的阳性表达率分别为86.5%(32/37)、30.0%(9/30)、31.8%(7/22)。子宫内膜癌组织CDCA5阳性率高于癌旁组织及子宫内膜非典型增生组织(P均<0.01)，而癌旁组织与子宫内膜非典型增生组织比较差异无统计学意义。

2.5 不同临床病理特征子宫内膜癌患者癌组织CDCA5表达比较 见表2。

表2 不同临床病理特征子宫内膜癌患者癌组织CDCA5表达比较

3 讨论

目前子宫内膜癌的病因仍不明确，可能与肥胖、不孕不育、激素替代治疗、糖尿病以及生活饮食习惯的改变有关[7, 8]。尽管子宫内膜癌的诊断和治疗有了一定进展，但其发病率和病死率仍然很高[9]。寻找子宫内膜癌新的诊断标志物提高早期诊断率，对于改善疾病预后有重要意义。

研究表明，细胞分裂发生故障可导致癌症[10]，细胞周期的异常改变可导致癌细胞不受控制地增殖[11,12]。许多细胞周期相关基因在癌症中被调控，而这些基因很可能是药物治疗的潜在靶点。CDCA5是细胞分裂周期相关蛋白家族中的一员，其主要作用是促进姐妹染色单体结合，并确保姐妹染色单体准确分离以维持基因组的完整性[13]。CDCA5可以调节细胞周期相关蛋白和转录因子的活性，并能促进癌细胞的增殖以及参与癌细胞的凋亡[3,14]。Nguyen等[15]发现，CDCA5在肺癌组织中表达上调，且非小细胞肺癌的预后不良与CDCA5过表达有关。在尿路上皮癌的一项研究[16]中，CDCA5在DNA修复中有着至关重要的作用，且CDCA5的过度表达是预后不良的预测因素。另一项研究中，肝癌组织中CDCA5表达量增高，抑制CDCA5基因的表达可导致肝癌细胞活力下降[17]。由上述研究结果可推测，CDCA5有可能成为恶性肿瘤诊断与预后的生物标志物和潜在的治疗靶点。

本研究发现，子宫内膜癌患者血清CDCA5水平明显高于健康妇女。CA125目前被认为是子宫内膜癌最有诊断价值的肿瘤标志物之一，但血清CA125水平升高常见于晚期并发生转移的子宫内膜癌患者。有研究报道，血清CA125应用于诊断晚期子宫内膜癌时，其灵敏度为73%、特异度为55%[1]。而本研究中CDCA5诊断子宫内膜癌的灵敏度和特异度分别为77.1%和77.6%，诊断效能优于CA125。此外我们还发现， CDCA5水平随肌层浸润深度和临床分期的增加而逐渐升高，说明CDCA5可能通过促进癌组织对正常组织的浸润来促进子宫内膜癌的进展。同时，我们发现CDCA5在子宫内膜癌组织中高表达，与CDCA5在肝癌[18]、胃癌[19]和前列腺癌[20]组织中高表达的研究结果相一致。另外，我们还发现肿瘤分化程度越高，CDCA5阳性表达率越低;肿瘤分化程度越差，CDCA5阳性表达率越高。这提示CDCA5可能促使子宫内膜癌细胞分裂速度加快,从而造成肿瘤恶性程度增高。CDCA5的高表达提示其可能参与了子宫内膜癌的进展，机制可能为CDCA5高表达导致姐妹染色单体在结合过程中发生故障，引起了基因突变，造成细胞周期失控，导致癌细胞不受控制地生长，从而促进了癌症的发展进程。在子宫内膜癌中肌层浸润深度>1/2的阳性表达率明显低于肌层浸润深度<1/2，差异具有统计学意义。此结果与血清检测结果相反，可能是因为本研究样本含量不够大，因此后续仍需要更大规模的样本来进一步验证。

综上所述， CDCA5有望成为子宫内膜癌早期诊断和病情判断的一种重要指标，我们将进一步探讨其在子宫内膜癌发生发展过程中的作用，从而为子宫内膜癌的临床诊断和治疗提供更多的思路和新靶点。