5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与同型半胱氨酸相关性研究

逯晓辉 张彤 王前明

在我国，人群具有较高的血浆同型半胱氨酸（Hcy）水平，如果合并高血压，那么其就具有更高的Hcy水平[1]。相关医学研究表明[2]，很多疾病均和Hcy关系密切，在高血压等心脑血管疾病的影响因素中，高Hcy水平是危险因素。相关医学学者认为[3]，如果原发性高血压患者具有较高的Hcy水平，那么其就为H型高血压。本研究对厦门大学附属第一医院2018年8月—2019年2月心内科住院和门诊心血管疾病患者202例的临床资料进行了统计分析，对厦门地区5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性调查及其与同型半胱氨酸水平相关性进行了研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取厦门大学附属第一医院2018年8月—2019年2月心内科住院和门诊心血管疾病患者202例，其中男性141例，女性61例，平均年龄（62.36±13.36）岁。

1.2 纳入和排除标准

纳入标准：（1）均为汉族；（2）均知情同意。排除标准：（1）未检测血浆同型半胱氨酸；（2）重症监护病房患者。

1.3 方法

1.3.1 MTHFR基因型测定 运用聚合酶链式反应－限制性酶切片断长度多态性（P C R－R F L P）分析方法，PCR扩增引物序列正向、反向分别为5′－C T C T G T G C T A A C C T G T A G C－3′、5′－C T G G T A C G A C C T C A G C T A A C－3′。在37℃的温度下用HinfI酶切PCR产物，2% 琼脂糖凝胶电泳对酶切结果进行观察，CC基因型患者无HinfI酶切位点，Hinf I酶切后只有一条产物带，长度为274 bp；CT基因型、TT基因型患者酶切产物分别有3条带、2条带，长度分别为46 bp、228 bp、274 bp，46 bp、228 bp。

1.3.2 Hcy测定 清晨8:00-10:00将两组患者的2 mL空腹静脉血采集下来，EDTA-K2抗凝，1 h内在4℃的温度下进行10 min的离心，将速率设定为3 000 r/min，将上层血浆分离出来，在-20℃的低温下放置保存，3个月内测量。运用高效液相色谱法对Hcy进行测定，正常值≤15 μmol/L，Hhcy的诊断标准为Hcy＞15 μmol/L[4]。

1.4 统计学分析

计量资料用（x-±s）表示，用t检验；计数资料用率表示，用χ2检验。多元线性回归分析血浆Hcy水平和MTHRF C667T不同基因型，采用SPSS 21.0，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 不同性别患者的一般资料比较

男性患者的年龄显著高于女性（P＜0.05），身体质量指数显著低于女性（P＜0.05），MTHFR C677T基因型CC+CT型比例显著高于女性（P＜0.05），但男性、女性患者的CC型、CT型、TT型比例之间的差异不显著（P＞0.05）。具体见表1。

2.2 血浆Hcy水平和MTHRF C667T不同基因型的多元线性回归

男性、女性TT基因型患者的血浆Hcy水平均显著高于CC基因型、CT基因型（P＜0.05），但CC基因型、CT基因型患者的血浆Hcy水平之间的差异均不显著（P＞0.05）。对混杂因素进行调整前后男性、女性TT基因型患者的血浆Hcy水平均显著高于CC基因型（P＜0.05），对年龄、身体质量指数进行调整后CC基因型、CT基因型患者的血浆Hcy水平之间的差异均不显著（P＞0.05）。具体见表2。

3 讨论

很多疾病均和N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（N5,10-MTHFR）C677T基因多态性关系密切，同时，在Hcy代谢过程中，MTHFR是关键酶，血浆Hcy代谢在其活性消失或减弱的情况下失常，进而引发高同型半胱氨酸血症（Hhcy）[5-9]。现阶段，很多相关医学研究均报道了很多疾病和MTHFRC677T基因多态性、Hc y水平的相关性，但是却较少有相关医学研究报道心脑血管疾病和MTHFRC677T基因多态性、Hc y水平的相关性。相关医学研究表明[10-12]，在高血压人群H型高血压、Hcy升高的遗传因素中，MTHFR基因C677T纯合突变可能占有重要地位，同时有性别差异存在。本研究结果表明，男性患者的年龄显著高于女性（P＜0.05），身体质量指数显著低于女性（P＜0.05），但男性、女性患者的CC型、CT型、TT型比例之间的差异不显著（P＞0.05）。男性、女性TT基因型患者的血浆Hc y水平均显著高于CC基因型、CT基因型患者（P＜0.05），但CC基因型、CT基因型患者的血浆Hcy水平之间的差异均不显著（P＞0.05）。对混杂因素进行调整前后男性、女性TT基因型患者的血浆Hc y水平均显著高于CC基因型、CT基因型（P＜0.05），对年龄、身体质量指数进行调整后CC基因型、CT基因型患者的血浆Hcy水平之间的差异均不显著（P＞0.05），和上述相关医学研究结果一致。

表1 两组患者的一般资料比较

表2 血浆Hcy水平和MTHRF C667T不同基因型的多元线性回归（ x- ±s）

综上所述，厦门地区5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T纯合突变可能是同型半胱氨酸水平升高的重要遗传因素，同时有性别差异存在。