胃癌患者腹水及外周血中乙醛脱氢酶1、胃泌素17表达观察及其相关性分析

张晶晶，彭琼

(合肥市第一人民医院,合肥230000)

胃癌具有高发病率、高转移率、高病死率特点，在我国发病率逐年增高，其中腹膜转移是晚期胃癌死亡的首要原因之一[1,2]。因此研究胃癌的发生、发展及浸润转移至腹腔的机制，对预防胃癌患者腹水生成，降低胃癌病死率具有重要意义。乙醛脱氢酶1(ALDH1)是新发现的一种肿瘤干细胞标志物，在肺癌、食管癌等实体瘤中高表达[3,4]，在肿瘤转移、复发及耐药中起重要作用[5]。胃泌素17(G-17)为一种新型的肿瘤标志物，具有无创、简便易行等优点，常用于癌前病变及胃癌筛查，被称为“血清学活检”，在临床应用中具有重要价值[6]。两者在胃癌腹腔转移机制方面的研究较少[7]。本研究采用ELISA法检测胃癌伴腹水患者腹水及外周血中ALDH1、G-17水平，观察其水平变化，并探讨两者在胃癌患者腹水及外周血中的相关性，为初步探讨两者在胃癌腹腔转移中的作用机制提供基础。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2014年8月～2018年8月合肥市第一人民医院消化内科门诊及住院部确诊的胃癌患者92例，入组前均未予放化疗及手术治疗，其中高分化癌5例、中分化癌49例、低分化癌38例。纳入标准：入组胃癌患者均经胃镜及病理学检查确诊，腹水组均经腹水穿刺脱落细胞学检查阳性或经病理诊断，并排除其他可以引起腹水的非恶性疾病。排除标准：①炎症感染性疾病或自身免疫性疾病；②近期大量使用抑酸剂、抗生素、糖皮质激素、非甾体药物及胃黏膜保护剂；③合并有其他类型肿瘤；④孕妇或有严重心肺、肝肾功能不全；⑤经过放化疗的胃癌或精神疾病。按其有无腹腔转移分为腹水组及无腹水组，其中腹水组43例，男23例、女20例，年龄27～75(50.4±7.1)岁；无腹水组49例，男26例、女23例，年龄28～77(47.7±6.8)岁。另选取本院同期体检中心确诊为慢性非萎缩性胃炎患者25例作为对照组，其中男14例、女11例，年龄33～70(52.8±5.3)岁，均经胃镜检查提示正常胃黏膜，病理组织学检查提示黏膜轻度慢性炎症。三组性别、年龄有可比性。

1.2 腹水及外周血中ALDH1、G-17的检测 晨起抽取研究对象空腹外周血6 mL，2 000 r/min离心8 min，取上层血清，-80 ℃冰箱保存待检。抽取腹水组患者腹水200 mL，以3 000 r/min恒温离心15 min，取上清液，-80 ℃冰箱保存待检。采用ELISA法检测腹水组腹水及各组外周血中的ALDH1、G-17水平。其中ALDH1试剂盒购自RayBiotech公司，G-17试剂盒购自芬兰Biohit公司。

2 结果

2.1 腹水组腹水和各组外周血中ALDH1、G-17水平比较 腹水组腹水及外周血中ALDH1分别为(27.46±11.58)、(15.57±7.59 )ng/mL，G-17 分别为(50.53±25.47)、(35.36±20.68)pmol/L；无腹水组外周血中ALDH1、 G-17分别为(9.38±4.98) ng/mL、(23.65±8.79) pmol/L；对照组外周血中ALDH1、 G-17分别为(3.32±1.64) ng/mL、(7.67±6.23) pmol/L。 腹水组中腹水ALDH1、G-17水平高于外周血中(P均<0.05)；外周血中ALDH1、G-17水平比较，腹水组高于无腹水组和对照组(P均<0.05)，无腹水组高于对照组(P均<0.05)。

2.2 腹水组外周血及腹水中ALDH1、G-17水平的相关性 腹水组中，腹水和外周血中ALDH1水平与G-17水平呈正相关(r=0.592、P<0.05；r=0.523、P<0.05)；在无腹水组中，外周血ALDH1水平与G-17水平呈正相关(r=0.655、P<0.05)。

3 讨论

胃癌是我国最常见的消化道肿瘤[8]，早期发现率低，易出现腹腔、肝、肺、骨等脏器转移，根治性手术难度大，术后易复发，常年居我国恶性肿瘤病死率第一位。胃癌腹腔转移时易出现腹水，是晚期胃癌的严重并发症，也是导致患者死亡的重要原因，一旦患者出现腹水，5年生存率不到3%，平均生存时间和中位生存时间分别为6.5个月和3.1个月。

ALDH1是乙醛脱氢酶家族新发现的一种肿瘤干细胞(CSC)标志物[9,10]，是各组织中正常干细胞和肿瘤干细胞生长、分化的必需物质，在神经系统、造血系统的干、祖细胞中明显升高[11]。ALDH1在肿瘤组织中表达高于癌旁组织，临床分期越高、淋巴结转移越早、预后越差的患者，ALDH1表达水平越高[12]，ALDH1与肿瘤分期、有无转移及预后有明显相关性[5,13]。ALDH1在肿瘤转移过程中的具体机制尚不明确，可能通过上皮间质转换(EMT)、血管内皮生长因子(VEGF)中导致肿瘤细胞浸润转移[14,15]。本研究发现，相对无腹水组，腹水组患者外周血中ALDH1表达升高，且腹水组患者腹水中ALDH1表达高于外周血中,提示ALDH可能通过某些机制，如EMT、VEGF，发挥CSC的作用，导致胃癌发展、转移，腹水生成。

G-17是胃窦和十二指肠G细胞合成和分泌的一种胃泌素，在消化道肿瘤患者外周血及癌组织中高表达，临床分期越高者其表达水平越高[16]。因此，目前认为G-17在胃癌疾病筛查及疾病早期诊断过程中可能发挥重要作用，临床中广泛用于癌前疾病及早期胃癌筛查[17,18]。G-17与进展期胃癌，特别是胃癌伴腹腔转移关系的研究较少，其在肿瘤发展、侵袭、转移中的作用机制尚未完全明确。目前研究认为，G-17可能通过与其受体，如胃泌素与胆囊收缩素-2受体(CCK-2R)结合，刺激多个信号传导路径，从而导致肿瘤细胞增殖。此外，G-17可通过激活混合谱系激酶3及INK1等激酶，活化金属基质蛋白酶[19]，降解细胞外基质，进而促进肿瘤细胞的浸润及转移[20～22]。本研究发现，在腹水组患者中，其外周血中G-17表达水平较无腹水组及对照组升高，且腹水中G-17表达高于患者外周血，提示在胃癌腹水转移过程中，G-17可能通过与CCK-2R等受体结合启动信号传导通路或者通过金属基质蛋白酶作用导致肿瘤发展、转移。

肿瘤发展和转移是一个渐进式的过程，涉及多级反应。在胃癌腹腔转移形成恶性腹水过程中，ALDH1通过VEGF促进血管内皮细胞增殖，导致肿瘤和新生组织中血管生成；而G-17通过与CCK-2R结合发挥作用，在血管生成中增强内皮细胞活性，增加微血管和小静脉的通透性从而促进肿瘤转移[23]；由此考虑两者可能通过相同或者相近的机制协同作用，促进和加速肿瘤发展、转移。本研究发现，在腹水组中，腹水和外周血中ALDH1表达水平与G-17水平呈正相关；在无腹水组中，外周血ALDH1水平与G-17水平呈正相关；提示ALDH1和G-17可能通过上述机制或其他机制，共同促进和加速肿瘤发展、转移。

综上所述，胃癌患者腹水及外周血中ALDH1、G-17异常高表达，且具有高度相关性，可能通过某种协同机制，促进胃癌进一步转移、恶化。